神經(jīng)肽P物質(zhì)影響瘢痕中肥大細胞釋放組胺的實驗研究.pdf

1、增生性瘢痕(hypertrophicscar,HS)不僅在形體上損害患者的功能和外貌，而且增生性瘢痕一般都伴有不同程度的瘙癢，有的早期瘢痕瘙癢更是讓病人難以忍受，嚴重影響患者的日常生活和社會交往，對病人的身心健康造成極大的傷害。目前，對增生性瘢痕瘙癢的研究尚處于起步階段，相關研究甚少。主要是沒有可靠的動物模型和用于人體的簡便、敏感、可重現(xiàn)的客觀測癢方法。組胺(histamine)是公認的皮膚致癢介質(zhì)[1]，神經(jīng)肽P物質(zhì)(substanc

2、eP,SP)也是現(xiàn)在研究的熱點之一，它是一種致炎性神經(jīng)肽，由感受傷害的C類神經(jīng)纖維轉運到外周，使肥大細胞(mastcell，MC)脫顆粒釋放組胺引起皮膚瘙癢[2,3]。為了深入了解組胺與神經(jīng)肽P物質(zhì)在瘢痕瘙癢發(fā)生中所起的作用，初步探討瘢痕瘙癢發(fā)生的機制，為臨床治療提供新的思路，我們設計并開展了本研究。實驗分六部分：首先對增生性瘢痕、非增生性瘢痕(non-hypertrophicscar,NHS)和皮膚中組胺與神經(jīng)肽P物質(zhì)進行定量、半定量

3、分析；接著在電鏡下觀察肥大細胞的超微結構在上述三種組織中的區(qū)別；然后將組織中的肥大細胞分離、培養(yǎng)并鑒定；觀察神經(jīng)肽P物質(zhì)對分離的肥大胞釋放組胺的影響及G蛋白(Gprotein)mRNA在肥大細胞的表達，以探討它與瘢痕瘙癢是否有關。 第1章.人瘢痕和正常皮膚局部組織中組胺含量的測定 目的：比較HS、NHS和皮膚局部組織中組胺含量的差別，推測組胺在人HS瘙癢發(fā)生中的意義。 方法：去除所取標本的皮下組織，取等質(zhì)量的全層

4、組織，用高氯酸制成勻漿，用熒光分光光度計測定組胺含量。 結果：HS組織中組胺的含量明顯高于NHS和正常皮膚[(236.32±26.79)，(170.12±20.53)，(162.31±18.97)ng/g，P＜0.01]，但在NHS和正常皮膚中卻無明顯差異(P＞0.05)。 結論：增生性瘢痕局部組織中組胺含量的升高可能與瘙癢有關。 第2章.P物質(zhì)在人瘢痕和皮膚局部組織中的表達 目的：比較HS、NHS和皮膚

5、局部組織中SP表達的差別，推測SP在人瘢痕瘙癢發(fā)生中的意義。 方法：用免疫組織化學方法結合圖像數(shù)據(jù)分析SP的表達。 結果：瘢痕組織全層可見SP的表達，皮膚中SP則主要表達在真皮層和表皮基底層。HS中SP的表達(18.36±3.28PU)明顯強于NHS(13.12±1.22PU)和皮膚(12.75±2.01PU)(P＜0.01)，但在NHS和皮膚中卻無明顯差異(P＞0.05)。另外，HS組織中分布在表皮基底層、小血管內(nèi)膜的

6、SP,其密度也明顯高于正常皮膚，并可見致密的膠原結締組織間有SP神經(jīng)纖維。 結論：增生性瘢痕局部組織中SP含量的升高可能與瘙癢有關。 第3章.人瘢痕和皮膚中肥大細胞超微結構的觀察 目的：觀察HS、NHS和皮膚局部組織中MC超微結構特點及其功能狀態(tài)，推測MC在人HS瘙癢發(fā)生中的意義。 方法：用透射觀察電鏡MC的超微結構。 結果：皮膚中MC散布于真皮淺層，瘢痕組織中MC主要分布在瘢痕淺層血管周圍及成纖

7、維細胞臨近處。皮膚和NHS中MC結構類似，主要呈非活化狀態(tài)；HS中MC數(shù)量多、體積大，多數(shù)呈活化脫顆粒狀態(tài)，并含較多的幼稚MC。 結論：增生性瘢痕局部組織中大量呈活化脫顆粒狀態(tài)和幼稚MC是瘙癢產(chǎn)生的基礎。 第4章.人瘢痕和皮膚中肥大細胞的分離和鑒定 目的：分離并鑒定人瘢痕和皮膚組織中MC，為下一步實驗奠定基礎。方法：用Ⅰ型膠原酶和透明質(zhì)酸酶消化分離MC；甲苯胺藍染色和番紅復染，鑒定并計數(shù)MC。 結果：MC

8、體積大、核呈藍色，胞漿內(nèi)含紫紅色分泌顆粒。HS中MC占有核細胞的百分比(8.6±1.9)明顯高于NHS(6.1±1.5)和皮膚(5.3±1.2)(P＜0.01)，但皮膚組與NHS組之間的差異不明顯(P＞0.05)。培養(yǎng)12h后，大部分懸浮細胞為MC。 結論：用Ⅰ型膠原酶和透明質(zhì)酸酶可以成功分離皮膚及瘢痕組織中的MC。 第5章.P物質(zhì)對瘢痕和皮膚中肥大細胞釋放組胺的影響 目的：探討SP與HS瘙癢發(fā)生的關系及可能的機

9、制。 方法：用熒光分光光度法檢測SP對分離的MC組胺釋放率的影響，觀察時間及劑量-效應關系。 結果：HS中MC的組胺釋放率隨SP刺激時間的延長和濃度的增加而遞增，與NHS組及皮膚組差異有顯著性(P＜0.01)。 結論：SP明顯提高HS中MC釋放組胺的水平而產(chǎn)生癢覺，這可能是增生性瘢痕瘙癢發(fā)生的機制之一。 第6章.G蛋白對瘢痕和皮膚中肥大細胞釋放組胺的介導 作用及P物質(zhì)對G蛋白α亞基mRNA表達的影

10、響 目的：探討G蛋白在HS瘙癢發(fā)生中可能的作用及SP的作用機制。 方法：將細胞分為對照組、SP刺激組、NEM預處理+SP刺激組，用熒光分光光度法檢測組胺釋放率并用RT-PCR法半定量測定MCs內(nèi)G蛋白α亞基mRNA的表達量。 結果：用G蛋白失活劑NEM預處理細胞后，削弱了SP增強MCs分泌組胺的效應。HS中GiαmRNA的表達明顯弱于NHS和皮膚(P＜0.01)，GsαmRNA在上述三種組織中的表達差異無顯著性(