表皮生長(zhǎng)因子對(duì)體外培養(yǎng)的人晶狀體上皮細(xì)胞移行和粘附的作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、白內(nèi)障囊外摘出術(shù)后的后發(fā)性白內(nèi)障(簡(jiǎn)稱后發(fā)障)是目前白內(nèi)障術(shù)后導(dǎo)致視力下降的最主要并發(fā)癥之一。有研究表明，成人白內(nèi)障術(shù)后2年內(nèi)，有20％～30％的患者因后發(fā)性白內(nèi)障而再度失明[1]，5年內(nèi)有43％因后發(fā)性白內(nèi)障而再次手術(shù)[2]。術(shù)后殘留的晶狀體上皮細(xì)胞的增殖和移行可能是形成后發(fā)障的主要原因。 在白內(nèi)障囊外摘除術(shù)時(shí)由于注吸皮質(zhì)、植人人工晶體等機(jī)械性操作，造成晶狀體上皮細(xì)胞損傷，術(shù)后殘留的晶狀體上皮細(xì)胞即發(fā)生損傷修復(fù)過(guò)程，合成并釋放

2、多種細(xì)胞因子。這些細(xì)胞因子在體內(nèi)與其特異性受體結(jié)合，既可單獨(dú)發(fā)揮作用，又可互相影響形成細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)，從而參與后發(fā)性白內(nèi)障的形成。 表皮生長(zhǎng)因子(EGF)最初是由Cohen等于1960年從小鼠頜下腺純化神經(jīng)生長(zhǎng)因子時(shí)發(fā)現(xiàn)的。分子質(zhì)量為6045u，由53個(gè)氨基酸組成。在繼發(fā)性白內(nèi)障、白內(nèi)障合并視網(wǎng)膜脫離、白內(nèi)障囊外摘除術(shù)后或超聲乳化術(shù)后無(wú)晶狀體眼或人工晶體眼的房水中均測(cè)出有EGF的存在[7]。EGF作為一種作用廣泛的內(nèi)皮細(xì)胞刺激素，

3、同時(shí)又是內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞發(fā)生移行、增殖的刺激劑。 白內(nèi)障囊外摘除術(shù)后，后囊混濁的發(fā)生就是殘留的晶狀體上皮細(xì)胞(LEC)向后囊膜移行，并與沉積在后囊膜上的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白結(jié)合后而粘附其上生長(zhǎng)所致的結(jié)果。表皮生長(zhǎng)因子是促進(jìn)白內(nèi)障術(shù)后晶狀體上皮細(xì)胞生長(zhǎng)的重要因子，研究EGF對(duì)晶狀體上皮細(xì)胞移行和粘附特性的影響，對(duì)進(jìn)一步了解和認(rèn)識(shí)后發(fā)性白內(nèi)障的病理生理過(guò)程具有重要的意義。 目的： 研究表皮生長(zhǎng)因子對(duì)體外培養(yǎng)的人晶狀體上皮

4、細(xì)胞移行及粘附的影響。 方法： 于20％FBS的DMEM培養(yǎng)液，5％CO2，95％空氣，濕度90％的條件下培養(yǎng)人晶狀體上皮細(xì)胞，至細(xì)胞70-80％融合后，加入表皮生長(zhǎng)因子處理。之后分別用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、免疫熒光及蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測(cè)細(xì)胞移行距離、tubulin、β-catenin、E-cadherin、vinculin的表達(dá)情況；最后在加入PI3K抑制劑wortmannin作用下再檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)。 結(jié)果： 人

5、晶狀體上皮細(xì)胞在20ng/mlEGF作用下，其移行距離隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，在48h達(dá)到高峰；在不同濃度EGF作用48h后，其移行距離隨著EGF濃度的增加而增加，在20ng/ml時(shí)達(dá)到高峰；20ng/mlEGF作用不同時(shí)間后，隨著時(shí)間的增加，微管聚集重排，細(xì)胞變形，伸出偽足；在20ng/mlEGF作用下，β-catenin蛋白表達(dá)水平隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)而變化，在2小時(shí)達(dá)到高峰；不同濃度EGF作用2小時(shí)后，β-catenin蛋白表達(dá)水

6、平隨著EGF濃度的增加而變化，在10ng/mlEGF作用下達(dá)到最大值；在20ng/mlEGF作用不同時(shí)間后，隨著時(shí)間的增加，E-cadherin蛋白表達(dá)增加，粘著斑蛋白vinculin的表達(dá)也增加；EGF作用后細(xì)胞移行距離增加，各項(xiàng)蛋白表達(dá)增加；加入PI3K抑制劑后移行距離及各項(xiàng)蛋白表達(dá)增加受到一定程度的抑制。 結(jié)論： 1.在表皮生長(zhǎng)因子的作用下，細(xì)胞內(nèi)微管聚集重排，細(xì)胞變形，伸出偽足；EGF對(duì)人晶狀體上皮細(xì)胞具有促進(jìn)其