納米羥基磷灰石-細菌纖維素復合支架對兔骨髓間充質(zhì)干細胞粘附、增殖及分化影響的實驗研究.pdf

1、目的：觀察納米羥基磷灰石/細菌纖維素復合支架(Nano-hydroxyapatite/bacterial cellulose，nHA/BC)對兔骨髓間充質(zhì)干細胞(Bone marrow mesechymalstem cells，BMSCs)的粘附、增殖及分化的影響，以探討其在骨組織工程領(lǐng)域潛在的應(yīng)用價值。
　　方法：采用密度梯度離心和貼壁篩選相結(jié)合的方法培養(yǎng)兔BMSCs，通過細胞形態(tài)學和流式細胞術(shù)鑒定BMSCs。將BMSCs與nH

2、A/BC體外復合，倒置相差顯微鏡及掃描電鏡觀察BMSCs與nHA/BC的復合情況。CCK-8法檢測并比較有nHA/BC組、無nHA/BC組的細胞增殖活性。利用含地塞米松、β-甘油磷酸鈉及維生素C的誘導培養(yǎng)基誘導細胞向成骨分化，觀察細胞分化過程中的形態(tài)變化，檢測茜素紅染色、堿性磷酸酶染色觀察成骨分化情況，掃描電鏡觀察礦化基質(zhì)沉積，RT-PCR法檢測Ⅰ型膠原、骨鈣素、骨橋蛋白mRNA的表達情況。
　　結(jié)果：BMSCs約24h貼壁，并由

3、圓形逐步變化為長梭形、多角形和不規(guī)則形等，至第3代呈均勻一致的長梭形。第3代細胞流式細胞儀檢測其表面標記CD44、CD90、CD105陽性，CD45陰性。倒置相差顯微鏡下觀察BMSCs能夠在nHA/BC表面有效的粘附生長，保持細胞形態(tài)，至7d時細胞融合成片。掃描電鏡觀察：nHA/BC呈三維立體多孔結(jié)構(gòu)，BMSCs與nHA/BC復合后，BMSCs伸出偽足粘附在表面及孔隙內(nèi)，細胞相互連接、融合。CCK-8法檢測結(jié)果顯示有nHA/BC組與無n

4、HA/BC組的細胞增殖活性比較，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。細胞誘導后呈現(xiàn)明顯的成骨細胞特征，可見鈣結(jié)節(jié)生成。茜素紅、堿性磷酸酶染色誘導組呈陽性反應(yīng)，非誘導組呈陰性反應(yīng)。掃描電鏡觀察可見nHA/BC膜上明顯的礦物質(zhì)沉積，并與nHA/BC膜緊密相連，結(jié)節(jié)中可見大量粗大的顆粒。RT-PCR結(jié)果中可以看出，nHA/BC膜上的BMSCs成骨誘導后可以觀察到Ⅰ型膠原、骨鈣素和骨橋蛋白等成骨標志基因的明顯地表達。
　　結(jié)論：1.密度梯