香煙煙霧誘導(dǎo)的慢性阻塞性肺疾病大鼠模型肺組織中Derlin-1的表達(dá).pdf

1、目的：初步研究香煙煙霧誘導(dǎo)的慢性阻塞性肺疾?。–OPD）大鼠模型肺組織中Derlin-1的表達(dá)。
　　方法：研究分動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞實(shí)驗(yàn)兩部分
　　1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分：采用本實(shí)驗(yàn)室復(fù)制的香煙煙霧誘導(dǎo)的大鼠COPD模型標(biāo)本，動(dòng)物分為4個(gè)組，分別為對(duì)照組、吸煙2個(gè)月組、吸煙4個(gè)月組和戒煙組（吸煙4個(gè)月然后戒煙1個(gè)月），收集對(duì)照組和各實(shí)驗(yàn)組大鼠肺組織標(biāo)本，采用逆轉(zhuǎn)錄-PCR（RT-PCR）方法檢測(cè)Derlin-1 mRNA表達(dá)水平，并采

2、用Western-blot、免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)Derlin-1蛋白質(zhì)表達(dá)水平。
　　2.采用本實(shí)驗(yàn)室保存的分離大鼠AECII細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)并傳代至第三代用于實(shí)驗(yàn)，用10％CSE對(duì)AECII細(xì)胞分別處理0h、3h、6h、12h、24h、48h并收集細(xì)胞采用RT-PCR、Western blot技術(shù)檢測(cè)Derlin-1的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.動(dòng)物試驗(yàn)部分結(jié)果
　　（1）肺組織病理學(xué)結(jié)果：大鼠肺組織結(jié)構(gòu)在對(duì)照

3、組大致正常；2個(gè)月吸煙組大鼠肺結(jié)構(gòu)出現(xiàn)紊亂現(xiàn)象，部分肺泡結(jié)構(gòu)破裂；吸煙4個(gè)月組大鼠肺結(jié)構(gòu)紊亂現(xiàn)象更加明顯，肺泡壁破裂較重，肺泡腔擴(kuò)大；戒煙組大鼠肺泡的破壞有所緩解，但與吸煙4個(gè)月組無(wú)顯著改變。
　　（2）免疫組化結(jié)果顯示Derlin-1主要定位于肺泡上皮細(xì)胞，血管內(nèi)皮細(xì)胞，支氣管上皮細(xì)胞的胞漿中，在吸煙2個(gè)月大鼠表達(dá)最高，戒煙組大鼠次之，吸煙4個(gè)月組表達(dá)較戒煙組大鼠明顯降低，而對(duì)照組表達(dá)最低，P均<0.05。RT-PCR和West

4、ern blot檢測(cè)結(jié)果與免疫組化一致。
　　2細(xì)胞試驗(yàn)部分結(jié)果
　　（1）Western blot結(jié)果顯示：在AECII中，用10%CSE作用不同時(shí)間Derlin-1蛋白的表達(dá)：Derlin-1的表達(dá)隨著CSE暴露時(shí)間的延長(zhǎng)呈先遞增后逐漸下降的趨勢(shì)，在6h組達(dá)到高峰。隨后逐漸降低但仍高于對(duì)照組水平。RT-PCR的結(jié)果與Western blot結(jié)果一致。
　　結(jié)論：
　　1.隨著香煙煙霧暴露時(shí)間的延長(zhǎng)，肺組織中內(nèi)