塞來昔布作用于人結腸癌細胞GRP78與P-Akt相互作用的實驗研究.pdf

1、目的：研究塞來昔布（celecoxib）作用人結腸癌細胞SW480與DLD-1時GRP78與P-Akt的相互作用。
　　方法：以人結腸癌細胞系SW480、DLD-1為研究對象，塞來昔布依不同濃度（0μmol/L,10μmol/L,20μmol/L,40μmol/L,60μmol/L,80μmol/L,100μmol/L）作用一定時間（24h）或以一定濃度的塞來昔布（100μmol/L）作用不同時間（0h,1h,3h,6h,12h,

2、24h,48h）,采用MTT法測定塞來昔布對SW480、DLD-1生長的抑制作用。接著，塞來昔布（100μmol/L）作用一定時間（0h,1h,3h,6h,12h,24h）利用Real-time PCR、Western blot檢測SW480、DLD-1細胞PI3K/Akt通路中P-Akt與UPR標志分子GRP78表達量的變化情況。然后，分別通過PI3K抑制劑LY294002抑制P-Akt；通過RNA干擾技術設計GRP78 siRNA分

3、別轉染SW480、DLD-1細胞以抑制GRP78表達。利用Real-timePCR、Western blot檢測各細胞P-Akt與UPR相關指標（GRP78、CHOP）、線粒體凋亡通路（Bcl-2、Bax）表達量的變化。細胞凋亡的檢測由流式細胞儀完成。
　　結果：
　　1.MTT法結果顯示塞來昔布對結腸癌細胞的生長抑制率隨作用時間與作用濃度的增加而顯著加強，*P<0.05（差異有統(tǒng)計學意義）;
　　2.塞來昔布作用下誘

4、導結腸癌細胞發(fā)生 UPR，其標志性分子 GRP78表達升高(*P<0.05)，而P-Akt初期先逐漸升高（6小時達最高），后逐漸降低(*P<0.05)。3.抑制結腸癌細胞P-Akt，GRP78表達量明顯增加,差異有統(tǒng)計學意義(*P<0.05)；
　　4.抑制初期（6小時）反應性升高的P-Akt，利用流式檢測發(fā)現(xiàn)細胞凋亡率顯著增加（*P<0.05）。
　　5.下調 GRP78的表達量，與對照組相比，初期（6小時） P-Akt表

5、達下降(*P<0.05)；后期（24小時） P-Akt表達增加(*P<0.05)。
　　6.下調GRP78的表達量，細胞的凋亡比率增加（*P<0.05）；CHOP表達明顯增加(*P<0.05)；線粒體凋亡相關蛋白（Bcl-2降低、Bax升高）發(fā)生促凋亡的相應改變(*P<0.05)。
　　結論：塞來昔布作用于結腸癌細胞可誘發(fā)UPR，此過程中GRP78通過對P-Akt與CHOP的調節(jié)對結腸癌細胞產(chǎn)生保護作用，同時P-Akt能負反