中國(guó)梅花鹿和豬朊蛋白基因序列分析及其在豬體內(nèi)的定量表達(dá)研究.pdf

1、朊病毒病(PrionDiseases)或稱傳染性海綿狀腦病(Transmissiblespongiformencephalopathies，TSEs)是一類傳染性、致死性的神經(jīng)退行性疾病，該病能夠感染人和多種哺乳動(dòng)物，主要包括瘋牛病(BSE)，羊癢病(Scrapie)，鹿慢性消耗性疾病(CWD)和人的克雅氏病(CJD)等。目前的研究發(fā)現(xiàn)，朊蛋白基因(PRNP)的序列變異在一定程度上影響該種動(dòng)物對(duì)TSE的易感性。我國(guó)目前雖然仍沒有TSE疾

2、病的發(fā)生，但隨著國(guó)際間交流的日益頻繁，我國(guó)急需針對(duì)TSE類疾病進(jìn)行必要的技術(shù)儲(chǔ)備和基礎(chǔ)研究，因此本試驗(yàn)主要從以下幾個(gè)方面進(jìn)行了研究： 1.運(yùn)用分子生物學(xué)技術(shù)，對(duì)中國(guó)梅花鹿的PRNP基因進(jìn)行了克隆和序列分析，鹿PRNP基因ORF區(qū)包含771bp，編碼256個(gè)氨基酸的前體蛋白。序列對(duì)比分析結(jié)果顯示，中國(guó)梅花鹿PRNP基因與其它品種鹿PRNP基因的核苷酸及氨基酸序列同源性均為98％以上。序列多態(tài)性分析發(fā)現(xiàn)了兩個(gè)單核苷酸多態(tài)性(C408

3、T，G676C)，其中一處的核苷酸的變化導(dǎo)致了226位氨基酸處由谷氨酸到谷氨酰胺的改變，本試驗(yàn)為進(jìn)一步研究中國(guó)梅花鹿朊蛋白序列多態(tài)性與其對(duì)CWD的易感性關(guān)系奠定基礎(chǔ)。 2.對(duì)中國(guó)實(shí)驗(yàn)小型豬(CEMP)和北京大白豬的朊蛋白基因進(jìn)行了克隆和序列分析，分析結(jié)果顯示：豬PRNP基因ORF區(qū)全長(zhǎng)為774bp，編碼257個(gè)氨基酸的前體蛋白，序列高度保守，京白豬的PRNP序列與已發(fā)表的豬PRNP序列(L07623)完全一致，CEMP的PRNP

4、序列與已發(fā)表的豬PRNP序列(L07623)有微小差異，僅在第四位氨基酸殘基處導(dǎo)致了一個(gè)氨基酸的改變(Ser→Asn)。本試驗(yàn)為進(jìn)一步研究中國(guó)兩種豬對(duì)TSE的易感性奠定基礎(chǔ)。 3.利用熒光定量PCR方法對(duì)豬腦及外周組織和器官中PRNP的表達(dá)進(jìn)行了絕對(duì)定量分析。結(jié)果顯示，不同組織、器官中豬PRNP基因表達(dá)存在差異，其中淋巴結(jié)中表達(dá)量最高，以后依次為：大腦，小腦，腦干，脾臟，胸腺和肌肉。頜下淋巴結(jié)比腹股溝淋巴結(jié)中PRNP表達(dá)量稍高，