核仁素適配體修飾的雷公藤甲素體外抗胰腺癌作用研究及機制初探.pdf

1、目的:
　　研究雷公藤甲素-核仁素適配體偶合物（簡稱偶合物）體外抗胰腺癌作用，并對其機制進行初步探索。
　　方法:
　　(1)采用CCK-8法檢測不同濃度、時間點(24，48h)核仁素適配體細胞毒性，以及對比偶合物、雷公藤甲素，對MIA PaCa-2細胞增殖的抑制作用。
　　(2)以吉西他濱耐藥的胰腺癌胞系——MIA PaCa-2，作為細胞模型，采用CCK-8法對比不同濃度、不同時間點(24，48，72h)偶合物

2、和吉西他濱對MIA PaCa-2細胞增殖的抑制作用，計算藥物IC50。
　　(3)采用Annexin V/PI雙染法、ELISA試劑盒檢測Caspase-3活性，檢測偶合物對MIA PaCa-2細胞系凋亡誘導作用。
　　(4)通過蛋白免疫印跡實驗檢測同時間點(12h，24h)，不同濃度偶合物對HSP70在MIA PaCa-2中表達的影響。
　　結果:
　　(1)偶合物、雷公藤甲素以及核仁素適配體均可有效抑制MIA

3、 PaCa-2增殖，抑制作用具有時間和劑量依賴性。200nM核仁素適配體處理MIA PaCa-2細胞48h后，其抑制率達到38.19％。對在各個時間點，相同濃度下偶合物對MIA PaCa-2的抑制率均低于雷公藤甲素對MIA PaCa-2的抑制率，當藥物作用濃度達到25nM，存在顯著性差異，P＜0.05。
　　(2)在各時間點，不同濃度偶合物和吉西他濱對MIA PaCa-2均有增殖抑制作用，且具有時間和劑量依賴性。偶合物和吉西他濱I

4、C50分別為97.86±12.52nM，142.5±31.26nM，具有統(tǒng)計學差異，P＜0.05。
　　(3) Annexin V/PI雙染法檢測結果表明，50-200nM偶合物與MIA PaCa-2共孵育24、48h后，細胞早期凋亡率為10.4％至1％; Caspase-3活性檢測結果表明，50-200nM偶合物與MIA PaCa-2共孵育12、24h后，Caspase-3活性出現(xiàn)不同程度升高，最高可達約9.24倍。
　　

5、(4)免疫印跡結果表明，50-200nM偶合物與MIA PaCa-2共孵育12、24h后，細胞中HSP70表達量被顯著降低。
　　結論:
　　核仁素適配體對雷公藤甲素的結構修飾，降低了偶合物的細胞毒性。偶合物對吉西他濱耐藥的胰腺癌胞系——MIA PaCa-2有顯著地抑制作用，其效果優(yōu)于吉西他濱。偶合物對MIA PaCa-2可通過Caspase依賴途徑誘導凋亡，其促凋亡機制可能是通過降低HSP70的表達實現(xiàn)。相較于吉西他濱，偶