利用組織工程技術體外構建氣管上皮組織的研究.pdf

1、本實驗以培養(yǎng)氣管上皮細胞(epithelialcell)、成纖維細胞(Fibroblast)種子細胞為基礎，簡化常規(guī)氣管上皮細胞與成纖維細胞的培養(yǎng)方法，建立更簡單、易行的種子細胞培養(yǎng)方法。種子細胞體外擴增后利用膠原將氣管上皮細胞、成纖維細胞在體外構建活性氣管上皮組織，形成組織工程氣管上皮組織。 研究方法：比較不同的常規(guī)分離培養(yǎng)方法在培養(yǎng)氣管上皮細胞中的異同。 簡化常規(guī)分離培養(yǎng)方法，同時分離氣管上皮細胞與成纖維細胞，共同培

2、養(yǎng)，根據兩種細胞對胰酶濃度耐受性不同的特性，分離氣管上皮細胞與成纖維細胞，通過細胞生長曲線與MTT檢測分析觀察細胞的生長狀態(tài)，并與常規(guī)方法培養(yǎng)的細胞進行比較。體外培養(yǎng)氣管上皮細胞、成纖維細胞數(shù)量分別達到1×106個、1×108個后，將成纖維細胞接種到Ⅰ型膠原中培養(yǎng)2d，將氣管上皮細胞消化下來后，復合于構建的膠原表面，共同培養(yǎng)7d，取出膠原用格柵法氣液雙相法進行培養(yǎng)2w后，行組織學檢查。 研究結果：(1)Dispase冷消化法得到

3、的細胞數(shù)量(381780±580)較其他方法得到的少(P＜0.05)，其他五種方法得到的細胞數(shù)量(430600±628)vs(430780±581)vs(430900±200)vs(430740±730)vs(430580±672)無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。兩步酶冷消化法及Dispase冷消化法較其它四種方法得到的氣管上皮細胞純度高，細胞狀態(tài)好。(2)用不同濃度胰酶消化后可完全分離氣管上皮細胞與成纖維細胞，分離后的細胞與常規(guī)方法培養(yǎng)

4、的細胞生長曲線一致，MTT檢測細胞增值活性不存在統(tǒng)計學差異。(3)體外構建氣管上皮組織，組織學切片示成纖維細胞構成的薄層結締組織上有氣管上皮細胞形成的上皮細胞層。 研究結論：(1)兩步酶冷消化法所獲得的細胞純度高、細胞成活率高、細胞數(shù)量多，是一種較好的體外的種子細胞(氣管上皮細胞)獲得方法。(2)新的分離培養(yǎng)方法較常規(guī)方法簡單、易行，是一種較好的體外一次獲得兩種細胞的方法(3)利用膠原成功地在體外將氣管上皮細胞與成纖維細胞復合，