石蒜堿通過上調(diào)p21基因表達抑制HL-60細胞增殖的分子機制初步研究.pdf

1、白血病是當前嚴重危害人類健康的惡性血液腫瘤，化療藥物仍是治療白血病的主要策略。石蒜堿(lycorine)是從我國廣泛分布的多年生草本植物石蒜鱗莖中分離出的一種化學單體，屬于異喹啉類 (isoquinoline)植物生物堿，具有明顯的抗白血病作用。我們以人急性早幼粒白血病細胞株HL-60作為實驗對象進行石蒜堿抗白血病作用機制研究，在凋亡相關(guān)基因表達變化和細胞周期阻滯兩方面展開探討。 第一章：石蒜堿對HL-60細胞凋亡及增殖相關(guān)基因

2、表達影響的基因芯片分析利用基因芯片可以全面的研究在石蒜堿作用下HL-60細胞凋亡或增殖相關(guān)基因表達的改變。我們用5.0μM濃度石蒜堿干預HL-60細胞，并設(shè)立對照組(0 μM)，24 h后提取總RNA進行基因芯片分析。本實驗顯示在基因芯片總共494個凋亡或增殖相關(guān)基因中，顯著差異表達的基因有91個，其中上調(diào)79個，下調(diào)12個。所改變的基因涉及細胞周期、凋亡、細胞骨架等多個方面，并發(fā)現(xiàn)p21、Caspase-7、DAPKl、TNF-α、C

3、yclin Gl等與細胞凋亡、細胞周期阻滯相關(guān)的重要基因表達差異達2倍以上。由此可見，石蒜堿能夠在轉(zhuǎn)錄水平明顯改變一些關(guān)鍵基因的表達，從而使細胞內(nèi)的網(wǎng)絡(luò)調(diào)控的平衡被打破，最終導致細胞走向凋亡。 第二章：石蒜堿抑制HL-60細胞增殖的作用機制的初步研究進而利用RT-PCR對p21基因的芯片結(jié)果進行驗證。結(jié)果顯示石蒜堿干預下p21基因轉(zhuǎn)錄水平明顯上調(diào)，與基因芯片結(jié)果一致。進一步利用Western blot研究在石蒜堿干預下p21蛋白

4、表達變化，以及受p21蛋白調(diào)控的下游分子：Cdc2、Cdk2、Cyclin E三種蛋白的表達變化。設(shè)立4個組，石蒜堿干預濃度分別為0、1.25、2.5和5.0μM，24 h后回收細胞提取蛋白進行Western blot分析。結(jié)果顯示，隨著藥物濃度的上升，p21蛋白表達量逐漸上調(diào)，Cdc2、Cdk2、Cyclin E三種蛋白表達量逐漸下調(diào)?？梢姡鈮A可以影響HL-60細胞的細胞周期調(diào)控通路，使p21蛋白表達上調(diào)，Cdk2、Cdc2、Cy