質(zhì)粒介導的大腸埃希菌和克雷伯菌的喹諾酮耐藥研究.pdf

1、[目的]了解臨床分離大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐藥性，為臨床用藥提供依據(jù)。了解上海地區(qū)臨床分離大腸埃希菌和克雷伯菌的qnr基因的分布以及Ⅰ類、Ⅱ類整合酶基因的存在情況，研究上述細菌中喹諾酮類藥物的耐藥機制，闡明質(zhì)粒介導的水平傳播在細菌耐喹諾酮類藥物中所起的作用和意義。 [方法]收集該院05年臨床分離的153株大腸埃希菌和157株肺炎克雷伯菌，采用全自動細菌鑒定儀VITEK系統(tǒng)進行最低抑菌濃度（MIC）的測定；在VITEK系統(tǒng)上篩

2、選ESBLs，再用CLSI紙片法確證。收集上海四家綜合性醫(yī)院臨床分離的267株大腸埃希菌和59株克雷伯菌（其中產(chǎn)酸雷伯菌4株）對質(zhì)粒介導的喹諾酮類藥物的耐藥機制進行研究：1）采用全自動細菌鑒定儀VITEK系統(tǒng)進行鑒定，用微量稀釋法進行最低抑菌濃度（MIC）的測定；2）采用聚合酶鏈反應（PCR）進行qnr基因篩選；3）采用聚合酶鏈反應（PCR）進行Ⅰ類、Ⅱ類整合酶基因檢測；4）采用聚合酶鏈反應（PCR）進行超廣譜內(nèi)酰胺酶(ESBLs)基因

3、型的檢測；5）采用熒光標記測序法對qnr基因陽性菌株的qnr基因以及Ⅰ類整合酶基因進行測序；6）采用接合試驗對qnr基因陽性菌株進行耐藥質(zhì)粒水平傳播的研究；7）采用紙片擴散法和瓊脂稀釋法進行接合子的穩(wěn)定性試驗。 [結(jié)果]大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌對β內(nèi)酰胺類、氨基糖苷類和氟喹喏酮類等抗菌藥物均有較高的耐藥性，平均在60％以上。產(chǎn)ESBLs菌株對多種抗菌藥物耐藥率顯著高于非產(chǎn)ESBLs菌株。大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌的ESBLs陽性率

4、分別為49.0％和33.1％。在267株大腸埃希菌和59株克雷伯菌中有3株攜帶qnr基因，其中1株為大腸埃希菌，占0.37％，2株為肺炎克雷伯菌，占3.39％；在135株大腸埃希菌和59株克雷伯菌中檢出105株細菌攜帶Ⅰ類整合酶基因，其中72株為大腸埃希菌，占53.33％（72/135），33株肺炎克雷伯菌，占55.93％（33/59）,其中攜帶II類整合酶基因3株，全部為大腸埃希菌，此3株同時攜帶I類整合酶基因并產(chǎn)ESBLs；3株qn

5、r基因陽性菌株均攜帶Ⅰ類整合酶基因和產(chǎn)超廣譜內(nèi)酰胺酶基因且呈多重耐藥；3株qnr基因陽性菌株都攜帶超廣譜內(nèi)酰胺酶(ESBLs) TEM基因型，都不攜帶CTX-M基因型，其中2株攜帶SHV基因型；通過分子生物學方法可證明qnr基因位于Ⅰ類整合子上；3株qnr基因陽性菌株的接合試驗均成功，qnr基因在接合子中相對穩(wěn)定。 [結(jié)論]大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌對多種抗菌藥物耐藥率較高，而且產(chǎn)ESBLs菌株高于非產(chǎn)ESBLs菌株。因此臨床醫(yī)生

6、應合理使用抗生素，降低ESBLs的發(fā)生率，避免多重耐藥的常見菌在院內(nèi)傳播。對所收集大腸埃希菌和克雷伯菌中檢出3株細菌攜帶qnr基因，其陽性率并不高。Qnr基因陽性菌株均為產(chǎn)超廣譜內(nèi)酰胺酶(ESBLs)且呈多重耐藥菌株。Qnr基因位于Ⅰ類整合子上，可以通過質(zhì)粒介導的水平傳播，在接合子中是相對穩(wěn)定。Qnr基因的水平傳播對臨床細菌的喹諾酮耐藥有重大意義，它可以跨種屬廣泛傳遞，導致耐藥性播散，因此，檢測qnr基因，掌握本地區(qū)qnr基因的流行情況