首烏藤多糖抗氧化活性及提取純化工藝研究.pdf

1、目的:考察首烏藤多糖(SWTP)抗氧化活性,并優(yōu)選SWTP提取純化工藝,為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)首烏藤藥材提供依據(jù)。
　　方法:(1)體外測(cè)定SWTP清除Fenton體系產(chǎn)生的羥基自由基(-OH)、鄰苯三酚自氧化體系產(chǎn)生的超氧自由基(O2-)的能力;使用超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)測(cè)定試劑盒測(cè)定SWTP體內(nèi)抗氧化活性。(2)以多糖得率和含糖量為指標(biāo),優(yōu)選SWTP水提工藝,并對(duì)多糖醇沉濃度進(jìn)行考

2、察。(3)在優(yōu)選出最佳堿種類(lèi)的基礎(chǔ)上,以NaOH濃度(A)、提取溫度(B)、料液比(C)、提取時(shí)間(D)為考察因素,確定SWTP堿提工藝的最優(yōu)條件。(4)在確定適用酶為纖維素酶、料液比為1:10、酶解pH為5.0的基礎(chǔ)上,用正交試驗(yàn)的方法優(yōu)選SWTP酶提工藝。。(5)采用大孔吸附樹(shù)脂法對(duì)SWTP的脫色、除蛋白工藝進(jìn)行了研究,對(duì)樹(shù)脂脫色和除蛋白的影響因素,如樹(shù)脂類(lèi)型、上樣濃度、流速、泄露曲線(xiàn)、洗脫體積進(jìn)行了考察。(6)以無(wú)水葡萄糖為對(duì)照品

3、,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),采用紫外分光光度計(jì)法研究SWTP含量測(cè)定方法。
　　結(jié)果:(1)9mg/mLSWTP對(duì)-OH的清除率是51.7％,對(duì)O2-的清除率是49.7%,并且其清除能力有一定的劑量依賴(lài)性。SWTP可顯著提高小鼠血清和肝組織中SOD、GSH-Px活力,并顯著降低MDA含量。(2)SWTP最佳水提工藝為:料液比1:10,提取溫度100℃,提取時(shí)間2h,提取次數(shù)3次,醇沉濃度80%。(3)SWTP堿提優(yōu)選工藝為A2B3C1D2,即

4、藥材加15倍量0.2mol/LNaOH溶液,90℃回流提取2次,每次3h。(4)酶解過(guò)程優(yōu)選工藝為:A2B1C1,水提過(guò)程優(yōu)選工藝為:A3B1C1,最后確定優(yōu)選SWTP酶提工藝為:藥材加10倍量水,50℃浸泡30min,冷卻后加入藥材量3%的纖維素酶并調(diào)溶液pH至5.0,于55℃水浴酶解4h,調(diào)pH至中性,然后100℃恒溫提取2h。(5)研究表明樹(shù)脂DA-201的脫色、除蛋白效果最好。確定純化參數(shù)為:處理約2.5倍柱床體積的濃度為108

5、0.6mg/mL的SWTP溶液,流速1.0mL/min,洗脫劑用量約8倍柱床體積,測(cè)定結(jié)果顯示多糖保留率為85.42%,脫色率為38.37%,蛋白脫除率為31.84%,可見(jiàn)用DA-201樹(shù)脂純化SWTP是可行的。(6)采用苯酚-硫酸法測(cè)定總多糖的含量,標(biāo)準(zhǔn)品葡萄糖在20.02-70.07mg/mL范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好,回歸方程y=0.0156x+0.0176(r=0.9995)。經(jīng)方法學(xué)考察表明測(cè)定方法精密度高,重現(xiàn)性好,樣品在2h內(nèi)穩(wěn)定