ABCE1基因?qū)π〖毎伟┰鲋?、侵襲、遷移能力影響的研究.pdf

1、中國醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文ABCE1基因?qū)π〖毎伟┰鲋?、侵襲、遷移能力影響的研究姓名：黃波申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：胸外科指導(dǎo)教師：田大力20090401ABCElSiRNA2、pEGFPCl、ABCElSiRNAN轉(zhuǎn)染入小細胞肺癌細胞中。轉(zhuǎn)染48d時后應(yīng)用Westernblot及免疫組織化學(xué)法檢測轉(zhuǎn)染后ABCEl蛋白表達。MTT法、Transwclld、室、劃痕實驗以及流式細胞儀檢測NCIH446細胞在轉(zhuǎn)染前后的增殖能力、侵襲能力、遷移

2、能力及細胞凋亡數(shù)目的改變。同時應(yīng)用免疫組織化學(xué)法、Wcsterablot方法，檢測人小細胞肺癌組織、細胞株、、轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)及癌旁肺組織中ABCEl的表達情況。在上述實驗基礎(chǔ)上構(gòu)建可以用于篩選陽性克隆且?guī)в芯G色熒光的ABCEl基因SiI悄A表達載體ABCElpRNATU61／NooSiRNA1、ABCElPRN柞U61／NeoSiRNA2及ABCEIpRNATU61／NeoSiRNAN，采用FUGENEHD法將載體ABCElpRNADU61

3、／NeoSiRNA1、ABCElPRNATU61／NeoSiRNA2及ABCElpRNATU61／NcoSiRNAN轉(zhuǎn)染ANCIH446細胞中，并以(3418(400pg／m1)進行陽性克隆篩選，篩選ABCEl基因沉默的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞系。幺七蟹三日禾經(jīng)酶切和研蛆測序驗證，證實pEGFPABCEI、ABCElSiRNA及ABCElpRNATU61／NeoSiRNA表達載體構(gòu)建成功。免疫組織化學(xué)法、Westernblot方法檢測發(fā)現(xiàn)：小細胞肺

4、癌組織及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中ABCEI的表達水平明顯高于癌旁肺組織，差異具有顯著性。小細胞肺癌細胞株同樣顯示ABCEl的高表達。轉(zhuǎn)染ABCElSiRNA后的小細胞肺癌細胞內(nèi)可見紅色熒光。在轉(zhuǎn)染ABCElSiRNAN的NCIH446細胞中其ABCEI基因呈高表達，而轉(zhuǎn)染ABCElSiRNA1、ABCElSiRNA2的細胞呈低表達，故確認目的載體ABCElSiRNA1、ABCElSiRNA2已成功轉(zhuǎn)染至NCIH446細胞中并起到了一定程度的沉默AB

5、CEl基因的目的。MTT實驗提示，轉(zhuǎn)染ABCElSiRNA1、ABCElSiRNA2的小細胞肺癌細胞與轉(zhuǎn)染ABCElSiRNAN的同類細胞相比增殖能力受到明顯抑制，轉(zhuǎn)染ABCElSiRNAN后的細胞增殖程度與對照組細胞則無明顯改變。Transwell實驗發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染ABCElSiRNA1、ABCElSiRNA2后的小細胞肺癌細胞穿膜細胞數(shù)較未轉(zhuǎn)染的和轉(zhuǎn)染ABCElSiRNAN組細胞明顯減少，而轉(zhuǎn)染ABCElSiRNAN后的穿膜細胞數(shù)較對照組