全反式維甲酸與奧沙利鉑在誘導人胃癌BGC-823細胞凋亡中的協(xié)同作用.pdf

1、背景和目的
　　 胃癌是常見的惡性腫瘤,在世界范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤中占第4位,死亡率占所有惡性腫瘤的第2位。在我國胃癌發(fā)病率和死亡率分別占惡性腫瘤的第1位和第3位。針對胃癌的治療藥物也層出不窮,短期內(nèi)顯示出良好的臨床療效。然而大規(guī)模的隨訪研究結果表明,腫瘤患者的遠期生存率并沒有因為化療藥物的使用而得到顯著提高,而且有些化療藥物嚴重的毒副作用限制了它們在臨床上的應用。探索低劑量多藥聯(lián)合應用,是腫瘤藥物研究的一個重要方向。

2、　　 全反式維甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)是維生素A的主要代謝產(chǎn)物,是維持生長發(fā)育不可缺少的物質(zhì),是一種公認的誘導分化劑。奧沙利鉑(Oxaliplatin,L-OHP)是第三代鉑類抗癌化合物,主要用于晚期大腸癌的治療。由于其與第一代順鉑和第二代卡鉑均無交叉耐藥性,并且耐受性好、毒副作用小,因而受到廣泛重視。
　　 ATRA與L-OHP伸聯(lián)合作用于胃癌是否能夠提高療效,目前未見報道。本實驗從體

3、外細胞學角度觀察全反式維甲酸(ATRA)與奧沙利鉑(L-OHP)對人胃癌BGC-823細胞凋亡的誘導作用,從而為進一步研究提供理論基礎。
　　 材料和方法：
　　 1.用ATRA和L-OHP單獨及聯(lián)合作用于BGC-823細胞,倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)變化；
　　 2.采用MTT法檢測ATRA及L-OHP分別作用24h、48h、72h后BGC-823細胞的增殖抑制率；
　　 3.采用流式細胞儀檢測ATRA及

4、L-OHP作用48h后BGC-823細胞的凋亡率及周期變化；
　　 4.采用免疫細胞化學技術檢測ATRA及L-OHP作用48h后BGC-823細胞中Bcl-2和Survivin蛋白的表達情況。
　　 結果：
　　 1.藥物作用24h后,細胞間隙增寬,胞內(nèi)顆粒增多,出現(xiàn)空泡；作用48h后,多數(shù)細胞漂浮于培養(yǎng)液中,少量細胞仍貼壁生長,并可見部分細胞的細胞核固縮、斷裂成碎片、核膜消失,細胞膜完整且有突起,呈凋亡晚期改變

5、；作用72h后,凋亡細胞數(shù)量逐漸增多。隨著作用時間的延長,與對照組相比,實驗組細胞碎片數(shù)量明顯增多,貼壁細胞數(shù)量顯著減少。
　　 2.ATRA對BGC-823細胞的抑制作用呈現(xiàn)時間依賴性,24h后對細胞的抑制作用不顯著,48h和72h后抑制作用相對明顯,與對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。聯(lián)合用藥后抑制作用更加顯著,與ATRA組及L-OHP組相比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),最佳作用時間為加藥后48h。
　　

6、 3.ATRA作用細胞后,G0/G1期和G2/M期的細胞比率增加,S期的細胞比率下降；L-OHP作用細胞后,G0/G1期的細胞比率下降,S期和G2/M期的細胞比率增加；聯(lián)合用藥后G0/Gl期和G2/M期的細胞比率增加,S期的細胞比率下降；聯(lián)合用藥組與ATRA組、L-OHP組相比,凋亡率差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 4.對照組中可以見到細胞質(zhì)中較多的Survivin蛋白和Bcl-2蛋白表達,呈淺黃色到棕黃色顆粒。A

7、TRA組和L-OHP組陽性表達細胞數(shù)減少,而聯(lián)合用藥組的細胞表達數(shù)更少。聯(lián)合用藥組與ATRA組、L-OHP組相比,蛋白陽性率差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 結論：
　　 1.ATRA對人胃癌BGC-823細胞存在增殖抑制作用,且具有時間依賴性,最佳作用時間為48h,與L-OHP聯(lián)用后對BGC-823細胞的增殖抑制作用更顯著。
　　 2.ATRA可誘導人胃癌BGC-823細胞分化,形成G0/G1期阻滯；