21-三體、性染色體非整倍體病產(chǎn)前診斷的研究.pdf

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文21三體、性染色體非整倍體病產(chǎn)前診斷的研究姓名：江帆申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：人體解剖學(xué)和組織胚胎學(xué)指導(dǎo)教師：何蘊(yùn)韶2006050121三體、性染色體非整倍體病產(chǎn)前診斷的研究要價值。此方法以QF—PCR(定量熒JtPCR)、FISH(Fluorescenceinsituhybridization，熒光原位雜交)較為常見，其中QF—PCR具有傳統(tǒng)PCR的一切優(yōu)點(diǎn)，靈敏度高、特異性強(qiáng)，與染色體核型分析技術(shù)相比，操作自動化、

2、耗時短，適于高通量檢測。它甚至可以對單細(xì)胞單基因缺陷進(jìn)行檢測，這使得該方法在PGD(Pre—ImplantationGeneticDiagnosis，植入前胚胎診斷)領(lǐng)域具有較好的應(yīng)用前景。率試驗(yàn)研究EI的是應(yīng)用定量熒光PCR(QuantitativeFluorescence。PCR)和染色體核型分析的方法檢測21三體和性染色體異常疾病，通過與核型分析診斷結(jié)果的比較，對QF—PCR方法進(jìn)行評價，希望通過對多重定量熒光PCR體系的優(yōu)化，建

3、立一種快速簡便的21三體、性染色體異常疾病的產(chǎn)前診斷方法。材料和方法1研究對象本實(shí)驗(yàn)自2005年3月2006年5月共收集T320t，OPb周血標(biāo)本，每次將所收集的外周血標(biāo)本分成兩份，一份取外周血250400ul，分裝于0lml的離心管中flj于DNA提取，剩余的外周血標(biāo)本用于染色體核型分析(600u1)，所有標(biāo)本由廣卅J達(dá)安臨檢Ih0、中山附一醫(yī)院及湖南省兒童醫(yī)院提供。2實(shí)驗(yàn)方法(1)染色體核型分析：①制各染色體標(biāo)本②顯帶前預(yù)處理③吉姆

4、薩染色，核型分析。(2)QFPCR：①引物設(shè)計：針對21號染色體上特異的3個STR位點(diǎn)(D21S1435、D2ISl41l、D21S11)，X染色體上的兩個STR位點(diǎn)(DXS981、DXS6809)，X、Y染色體上共有的STR位點(diǎn)X22及性別特異性位點(diǎn)AMXY設(shè)計引物，并在引物的5’端標(biāo)記熒光。②將染色體核型分析診斷為異常的標(biāo)本整理出來，共162例；隨機(jī)抽取40例正常的標(biāo)本。對此202例標(biāo)本提取基因組DNA進(jìn)行七重定量熒光PCR擴(kuò)增。③

5、ABl310測序儀進(jìn)行PCR結(jié)果分析④根據(jù)英國臨床生化協(xié)會、臨床分子遺傳協(xié)會相關(guān)規(guī)定(ACC／CMGSbestpracticemeetingwasheldonthe15thApril2004)：QF—PCR擴(kuò)增后，結(jié)果分析表現(xiàn)為三個熒光峰，峰值比接近l：1：l或者表現(xiàn)為雙峰，但峰值kL18可判斷為三體者。(3)統(tǒng)計分析：本實(shí)驗(yàn)叫_I計量資料用算術(shù)均數(shù)(或幾何均數(shù))標(biāo)準(zhǔn)差(xSD)描述，通過靈敏度、特異度兩個指標(biāo)對QFPCR方法進(jìn)行評價。