尼可地爾通過調節(jié)硫氧還蛋白的表達減輕臍靜脈內皮細胞的氧化應激.pdf

1、第一部分H2O2誘導的臍靜脈內皮細胞氧化應激模型的建立及評價
　　目的：用H202建立臍靜脈內皮細胞氧化應激的模型,并對其進行評價。
　　方法：將臍靜脈內皮細胞分為6組:正常組,陽性對照組,50μmol/LH2O2組,100μmol/LH2O2組,200μmol/LH2O2組,400μmol/LH2O2組。細胞氧化應激模型建立方法:按照上述的分組及H2O2濃度,分別放于培養(yǎng)箱中6h,12h,24h,正常組加入相同體積的1×P

2、BS。然后用DCFH-DA探針裝載后于熒光顯微鏡下直接觀察細胞中的ROS熒光,用流式細胞術檢測細胞內活性氧的含量。
　　結果：H2O2可以誘導細胞內ROS的生成,不同濃度的H2O2作用不同的時間,臍靜脈內皮細胞內的ROS生成量也不同,在24h時間點細胞內氧化應激達到高峰,并且隨著H2O2刺激濃度的升高,細胞內的ROS呈先增高后降低的趨勢,在H2O2濃度為100μmol/L時作用最為顯著,隨后細胞內ROS逐漸減少,細胞壞死率比例上升

3、。熒光圖片與流式細胞術檢測的結果一致。
　　結論：100μmol/LH2O2與臍靜脈內皮細胞在37℃,5％CO2培養(yǎng)箱中共同培養(yǎng)24小時,可以導致細胞內活性氧含量顯著升高,成功建立臍靜脈內皮細胞氧化應激模型。
　　第二部分尼可地爾對細胞氧化應激模型的影響
　　目的：觀察尼可地爾對氧化應激細胞模型內活性氧形成以及參與細胞內氧化還原關鍵的蛋白質家族之一——硫氧還蛋白表達的影響
　　方法：臍靜脈內皮細胞分為四大組:①正

4、常臍靜脈內皮細胞組,②氧化應激模型組,③尼可地爾+氧化應激模型組,④尼可地爾+氧化應激模型+格列苯脲組。以上各組均在37℃,5%CO2培養(yǎng)箱中孵育24小時,采用流式細胞術檢測各組細胞中ROS的含量,分別使用RT-PCR和Western-Blot方法檢測各組細胞內硫氧還蛋白mRNA及蛋白質的表達。
　　結果：尼可地爾可以減少臍靜脈內皮細胞氧化應激模型中活性氧的形成,同時細胞內硫氧還蛋白的量有相應變化;鉀離子通道阻斷劑格列苯脲可以阻斷