微囊藻毒素-LR快速檢測生物學新方法的建立.pdf

1、隨著環(huán)境污染的加劇，淡水水體富營養(yǎng)化的狀態(tài)越來越嚴重，有毒藍藻水華在各地頻繁發(fā)生，其產生的毒素對淡水水體尤其是水源水及飲用水的污染也越來越嚴重，對人類及動物的健康造成了極大威脅。微囊藻毒素是一大類藍藻毒素，其中，最常見毒性最強的藍藻毒素是微囊藻毒素-LR(MC-LR)，MC-LR是一種低分子量的環(huán)狀多肽，對生物體具有多重毒性，已將其列《入國家生活飲用水衛(wèi)生標準》(GB5749-2006)之中，規(guī)定的界限為1μg/L。目前MC-LR檢測方

2、法很多，但都存在價格昂貴、耗時費力、操作復雜等問題，因此，建立一種快速、便捷、實時、特異性檢測微囊藻毒素-LR的檢測方法具有重要意義。
　　本文通過培養(yǎng)銅綠微囊藻，收集足夠多的藻細胞進行MC-LR提取，經超聲波破碎、溶劑萃取、高效液相色譜（HPLC）分離純化、冷凍干燥獲得MC-LR純品。以MC-LR為靶分子，利用噬菌體隨機展示十二肽庫進行MC-LR特異性親和配體序列的篩選。經過四輪篩選、測序及序列比對，最終獲得了一條MC-LR特異

3、性親和配體序列。后以固相化學合成法合成該配體肽，并于N端進行FITC熒光標記制得MC-LR特異性親和配體肽探針，最后對制得探針進行活性檢測與應用，驗證并建立生物學新方法。
　　實驗結果顯示，提取獲得的MC-LR純度達94％。經過噬菌體隨機展示十二肽庫的四輪篩選及測序和序列比對，得到MC-LR特異性親和配體序列:H-F-F-K-W-H-T-R-T-N-D-Q，經人工合成獲得了有FITC熒光標記的MC-LR特異性親和配體肽P1: FI