金錢(qián)草總黃酮的提取、純化及分析.pdf

1、金錢(qián)草系報(bào)春花科珍珠菜屬植物過(guò)路黃(LysimachiachristinaeHance)的新鮮或干燥全草，主產(chǎn)于四川、浙江等地。具有清熱利濕、通淋消腫等功能；用于黃疸、尿赤、肝膽結(jié)石等癥。現(xiàn)代研究表明金錢(qián)草總黃酮具有預(yù)防草酸鈣結(jié)石形成和復(fù)發(fā)的作用，另外還有顯著的抗炎作用，增加冠脈血流量等。但在《中國(guó)藥典》2005版中，缺少對(duì)金錢(qián)草質(zhì)量?jī)?yōu)劣的評(píng)價(jià)，本文以金錢(qián)草的主要有效成分為依據(jù)，利用高效液相色譜法對(duì)主要有效成分進(jìn)行了含量測(cè)定，從而判定金

2、錢(qián)草的質(zhì)量。 金錢(qián)草中主要含有黃酮類(lèi)成分，據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)，異鼠李素、山奈酚、槲皮素是金錢(qián)草總黃酮中的常見(jiàn)成分。本次試驗(yàn)設(shè)計(jì)是首先從利用微波萃取和大孔樹(shù)脂色譜提取并純化金錢(qián)草總黃酮，然后利用高效液相色譜對(duì)其中槲皮素和山奈酚進(jìn)行定量分析，從而判斷金錢(qián)草的質(zhì)量。 本次實(shí)驗(yàn)首先采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)選出微波萃取金錢(qián)草總黃酮的最佳工藝條件：即50％乙醇8倍量，于60℃條件下萃取30min。同時(shí)考慮了溶劑濃度，固液比，溫度和提取時(shí)間對(duì)提

3、取效果的影響?？疾斓膸讉€(gè)影響中，溶劑的濃度對(duì)結(jié)果的影響最大，其次是提取的溫度，而提取時(shí)間和固液比對(duì)結(jié)果的影響較小，可以根據(jù)實(shí)際條件和需要選擇。采用微波萃取金錢(qián)草總黃酮，平均黃酮含量為5.58％，而采用傳統(tǒng)的乙醇回流法提取的提取率只有3.09％，微波萃取法的效率要高80％以上。而且時(shí)間短，溶劑省，效果好。 為進(jìn)一步純化金錢(qián)草總黃酮，我們以飽和吸附量、回收率和純度作為考察指標(biāo)，綜合比較了D101、AB-8、NKA-9三種大孔樹(shù)脂對(duì)金

4、錢(qián)草總黃酮的吸附分離性能。研究表明，NKA-9(極性)樹(shù)脂的綜合表現(xiàn)要優(yōu)于D101(非極性)和AB-8(弱極性)樹(shù)脂。NKA-9樹(shù)脂對(duì)金錢(qián)草總黃酮的飽和吸附量為51.2mg·g-1，洗脫率為96.5％。經(jīng)實(shí)驗(yàn)研究，NKA-9純化金錢(qián)草總黃酮的最佳工藝條件為：上樣濃度20mg·mL-1，6倍量純水洗滌，50％乙醇洗脫。經(jīng)NKA-9型樹(shù)脂吸附分離后，總黃酮純度可達(dá)60.8％，樹(shù)脂可反復(fù)使用4次。 本文還探討了NKA-9型大孔樹(shù)脂分離

5、純化金錢(qián)草總黃酮的動(dòng)力學(xué)過(guò)程，繪制了滲漏曲線和洗脫曲線來(lái)描述動(dòng)態(tài)吸附-洗脫過(guò)程，并建立了此方程的數(shù)學(xué)方程：y=u(1-e-kx)。吸附與洗脫的過(guò)程十分復(fù)雜，此曲線和方程能大致描繪了3個(gè)步驟：流動(dòng)相向樹(shù)脂顆粒的滲透過(guò)程；有效成分與樹(shù)脂顆粒間的吸附與解吸附過(guò)程；吸附-解吸附過(guò)程趨于平衡。 經(jīng)過(guò)純化后的金錢(qián)草總黃酮通過(guò)HPLC對(duì)其中的槲皮素和山奈酚進(jìn)行了含量測(cè)定。經(jīng)實(shí)驗(yàn)研究，最佳的含量測(cè)定工藝如下：Nova-PakC18柱上對(duì)目標(biāo)化合

6、物的甲醇溶液進(jìn)行洗脫，流動(dòng)相選用甲醇-水-磷酸(500:500:1)，25℃下流速為1ml/min進(jìn)行洗脫，槲皮素的保留時(shí)間大約在5.1min左右，山奈酚的保留時(shí)間約在8.8min左右，檢測(cè)波長(zhǎng)為360nm。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，槲皮素和山奈酚的標(biāo)準(zhǔn)曲線都具有良好的線性關(guān)系(r2＞0.999)，而且線性范圍均比較寬。兩種成分的精密度的RSD分別為0.31％和0.27％，平均回收率在101～105％范圍內(nèi)。在重復(fù)性實(shí)驗(yàn)中，兩者的RSD分