cDNA基因芯片和反義核柑酸技術(shù)篩選及證實GTD發(fā)病相關(guān)基因.pdf

1、浙江大學博士學位論文cDNA基因芯片和反義核柑酸技術(shù)篩選及證實GTD發(fā)病相關(guān)基因姓名：崔金全申請學位級別：博士專業(yè)：婦產(chǎn)科（婦科腫瘤）指導教師：石一復20040101新江大學博士生學位論文有關(guān)的基因上調(diào)。第二部分芯片結(jié)果驗證及滋養(yǎng)細胞增生機制探討方法：利用傳統(tǒng)的分子生物學研究手段免疫組織化學、免疫印跡及RTPCR，對基因芯片證實葡萄胎和絨毛膜癌細胞中高表達的核苷酸還原酶小亞單位(RRM2)、胸腺嘧啶核苷激酶I(TKl)、復制因子C小亞單

2、位2(RFC2)、CyclinBl基因，在15例正常絨毛、20例新鮮葡萄胎組織、98例存檔石蠟包埋滋養(yǎng)細胞疾病組織及JAR、JEG3絨癌細胞中的表達情況進行較為詳盡的檢測。PCNA在98例存檔石蠟包埋滋養(yǎng)細胞疾病組織的表達情況進行分析。結(jié)果：JAR、JEG一3細胞、葡萄胎組織RRM2、TKlmRNA和蛋白水平顯著高于正常原代滋養(yǎng)細胞或正常絨毛組織，RFC2在JAR、JEG3細胞、葡萄胎中蛋白的表達顯著高于正常絨毛和正常原代滋養(yǎng)細胞。Cy

3、clinB1蛋白在JAR、JEG3細胞、葡萄胎組織表達增加。五項指標在石蠟包埋GTD組織中的表達顯著高于正常絨毛，妊娠滋養(yǎng)細胞腫瘤未化療者TKl、CyclinBl、PCNA表達顯著高于葡萄胎，葡萄胎惡變者RRM2、TKl、PCNA、CyelinBl表達顯著高于自然恢復者，化療影響TKl、RFC2、CyclinB1表達，期別增加RRM2、TKl、RFC2表達增強，WHO預后評分越高RRM2、TKl、RFC2、CyclinBl表達越強，PC

4、NA與CyelinB1、TKl的表達呈顯著正相關(guān)。第三部分RR92反義寡核苷酸對人絨毛膜癌細胞株體外生長影響方法：以脂質(zhì)體(Oligofectamine)為載體，將人工合成的分別位于RRM2mRNA核苷酸序列626—645(編碼區(qū))和15721591(3’端非編碼區(qū))位點且全程硫代修飾的兩條反義寡核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotide，ASODN)片斷導入絨毛膜癌JAR細胞中，用MTT法檢測細胞成活率，免疫印

5、跡和RTPCR方法檢測ASODN對RRM2蛋白和mRNA表達的影響。結(jié)果：RRM2編碼區(qū)的ASODN(ASODNl)以量效和時效形式顯著抑制JAR細胞增殖，以時效形式降調(diào)RRM2的表達。3’端非編碼區(qū)ASODN(ASODN2)對細胞增殖及RRM2表達無明顯的影響，但與ASODNl聯(lián)合應(yīng)用，對細胞的生長抑制作用和對RRM2表達的影響顯著加強。ASODNl作用12ll，RRM2表達水平開始下降；作用24h，細胞RRM2表達和生長顯著抑制，4