牛膝總皂苷保護軟骨細胞作用及其機制研究.pdf

1、骨關節(jié)炎(osteoarthritis,OA)是一種以關節(jié)軟骨退行性病變?yōu)橹饕卣鞯穆怨顷P節(jié)病。目前臨床應用的非甾體抗炎藥有引起胃腸道不良反應及破壞軟骨細胞的弊端。中醫(yī)藥治療OA類疾病歷史悠久,實踐基礎豐厚,不良反應少,因此可深入挖掘中醫(yī)藥治療的特色與優(yōu)勢。傳統(tǒng)中藥牛膝為莧科植物牛膝(Achyranthes bidentata Bl.)的根,是中醫(yī)臨床上治療OA的常用藥,具有補肝腎、強筋骨、逐瘀通經(jīng)、引血下行功效。皂苷類成分是牛膝中重

2、要活性物質,本課題考察了牛膝總皂苷(Achyranthes bidentata Bl. saponins,ABS)對白介素-1β(IL-1β)和碘乙酸鈉(MIA)引起的大鼠軟骨細胞損傷的影響。
　　牛膝飲片經(jīng)75％乙醇回流提取,正丁醇萃取,D101大孔吸附樹脂富集收集50%乙醇洗脫液,減壓濃縮,得到ABS提取物。對ABS含量測定的5種顯色方法的考察結果表明:以5%香草醛-冰乙酸:高氯酸:冰乙酸(2:8:50)為最佳測定方法,峰型、

3、加樣回收率均優(yōu)于其它方法。測得ABS含量為52.45%。
　?、蛐湍z原酶消化大鼠軟骨,獲得軟骨細胞。加入(終濃度10 ng/mL)IL-1β,可見大鼠軟骨細胞活力下降,而3、10、30μg/mL終濃度的ABS能劑量依賴性提高細胞活力。Hochest33258及Annexin V-FITC/PI流式雙染細胞術檢測顯示, ABS對IL-1β所致軟骨細胞凋亡有一定的抑制作用。對于IL-1β誘導的抗凋亡蛋白Bcl-xL表達降低和凋亡蛋白B

4、ax、Bad表達上升,ABS有顯著抑制作用。對于IL-1β引起的caspase3活性的上升,ABS有顯著抑制作用。ABS還可下調IL-1β引起的基質金屬蛋白酶(MMP3,MMP9)和環(huán)氧化合酶(COX-2)的表達,抑制p53蛋白的磷酸化,并促進細胞增殖抗原(PCNA)的表達。對于IL-1β誘導的NF-κB信號通路活化,ABS能抑制p65亞基的磷酸化,抑制IκBα的降解和磷酸化。
　　200±20 g雄性SD大鼠36只,隨機分為6組

5、:正常對照組、模型組、ABS(50,100,200 mg/kg)三個劑量組、硫酸氨基葡萄糖(75 mg/kg)陽性對照組。除對照組外,其余各組大鼠右肢膝關節(jié)腔注射MIA(1 mg),各組大鼠灌胃給藥或對照液,觀測大鼠關節(jié)腫脹情況。造模后第28天,各組大鼠斷頭取血,分離膝關節(jié)軟骨標本。結果ABS(100,200mg/kg)可顯著抑制實驗性OA大鼠關節(jié)腫脹,降低血清 IL-1β與一氧化氮(NO)水平,抑制軟骨膠原蛋白和蛋白多糖的降解。