玻璃化低溫保存肌腱細(xì)胞與PDMS材料復(fù)合物的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:建立一種研究工程化人工肌腱低溫保存的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，尋找一種較好的玻璃化低溫保存劑配方，建立一套相應(yīng)的操作流程，以期工程化人工肌腱在低溫保存后獲得較高的細(xì)胞存活率，以滿足組織工程肌腱產(chǎn)業(yè)化需要。 材料和方法:從sD大鼠乳鼠尾腱中分離出原代肌腱細(xì)胞，行Ⅰ,Ⅲ型膠原免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定并擴(kuò)增備用。制備表面微溝槽硅膠膜和3D硅膠泡沫，經(jīng)Ⅰ型膠原裱襯滅菌后接種肌腱細(xì)胞，靜態(tài)培養(yǎng)9天。將肌腱細(xì)胞與PDMS材料復(fù)合物在0℃連續(xù)滴注導(dǎo)入VS55玻

2、璃化保存液和21％DMSO凍存液，VS55組直接投入液氮中，21％DMSO組先以1℃/min梯度降溫至-60℃再直接投入液氮，在液氮溫度保存24h以上，37℃水浴快速?gòu)?fù)溫后，0℃連續(xù)滴注洗脫低溫保存劑，恢復(fù)培養(yǎng)1h后，行掃描電鏡、熒光染色觀察細(xì)胞粘附和形態(tài)。行流式細(xì)胞檢測(cè)確定細(xì)胞的存活率。 結(jié)果:sD大鼠乳鼠尾腱源細(xì)胞Ⅰ型膠原免疫細(xì)胞化學(xué)染色呈陽(yáng)性，Ⅲ型膠原細(xì)胞免疫化學(xué)染色陰性，符合肌腱細(xì)胞生物學(xué)特性。肌腱細(xì)胞在裱襯Ⅰ型膠原的微

3、溝槽硅膠膜表面可定向定形生長(zhǎng)，可作為研究細(xì)胞粘附形態(tài)與低溫凍存關(guān)系的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?。VS55玻璃化保存液保存鼠尾肌腱細(xì)胞與裱襯I型膠原的3D硅膠泡沫材料復(fù)合物，肌腱細(xì)胞復(fù)蘇后平均存活率(平均64.9％)低于21％DMSO凍存液(平均76.2％)。 結(jié)論:玻璃化低溫保存需要復(fù)雜的凍存劑導(dǎo)入和洗脫流程。由于缺乏深低溫段的程序化溫度控制設(shè)備，本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果不太理想。玻璃化保存需要建立標(biāo)準(zhǔn)的操作程序，最好由機(jī)器程控完成。21％DMSO僅需要簡(jiǎn)單