骨橋蛋白通過促進p47phox蛋白質的表達提高肝臟kupffer細胞清除細菌能力的機制研究.pdf

1、骨橋蛋白(osteopontin，OPN)是一種由多種組織及細胞分泌的磷酸化糖蛋白，可介導巨噬細胞的遷移，激活，吞噬及細胞因子的釋放等。但是該蛋白在巨噬細胞清除病原微生物過程中所發(fā)揮的作用及機制還不甚明了。利用Propionibacterium acnes(P.acnes)誘導的以巨噬細胞浸潤形成局部肉芽腫為明顯特征的小鼠肝臟肉芽腫模型為研究基礎，本研究引入OPN基因敲除小鼠，來研究該蛋白在巨噬細胞清除病原微生物過程中的作用及進行后續(xù)機

2、制探討。在上述模型中，我們發(fā)現(xiàn)OPN基因敲除小鼠的肝臟內所形成的肉芽腫數(shù)量與野生型小鼠肝臟內肉芽腫形成數(shù)量相比明顯增多并伴隨著較高的炎癥反應性。后續(xù)研究結果揭示OPN并未影響到免疫細胞的遷移及凋亡環(huán)節(jié)，提示OPN在機體感知病原微生物的能力上沒有缺陷。隨后分離肝臟kupffer細胞進行體外實驗進一步發(fā)現(xiàn)OPN基因缺失的kupffer細胞清除P.acnes的能力明顯降低，該清除能力的降低主要是由于OPN基因缺失的kupffer細胞經P.ac

3、nes刺激后產生具有清除胞內細菌能力的活性氧(ROS)明顯降低。后續(xù)實驗結果進一步證明OPN基因缺失的kupffer細胞其ROS產生降低主要是由于產生ROS的NADPH復合酶中p47phox蛋白質的表達障礙，外源給予重組鼠源OPN分子可彌補由于OPN缺失造成的該蛋白表達下降。隨后利用抗β3中和性抗體阻斷該OPN受體后，p47phox蛋白表達下降，而抗CD44抗體則對該蛋白表達沒有影響，提示OPN主要是通過與其整合素β3受體結合進而促進p

4、47phox的蛋白質表達。最后，利用PI3K及ERK信號通路抑制劑阻斷整合素β3下游的信號通路后可以明顯觀察到由于兩條信號通路的阻斷造成的p47phox蛋白質表達障礙及由此引起的ROS產生下降。綜上所述，我們的研究結果提示OPN在提高kupffer細胞清除細菌能力上發(fā)揮非常重要的作用，該作用主要是通過其與整合素受體αvβ3結合及激活該受體下游的PI3K及ERK介導的信號通路來上調p47phox蛋白質的表達進而提高ROS來完成的。我們提供