安神方治療失眠癥的療效觀察及相關機制研究.pdf

1、背景: 自古以來，人類就對睡眠和夢產(chǎn)生了濃厚的興趣。從西方的佛洛依德所著《夢的解析》開始，人類對睡眠和夢的探究從來沒有停止過。睡眠作為人生命的重要組成部分，對人體保持充沛的精力體力，維持神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)功能正常均具有重要意義。 近年來，經(jīng)濟社會變革加速，人們的生活工作節(jié)奏均大幅加快，負面情緒引起的精神緊張焦慮、抑郁更是頻繁發(fā)生，導致失眠癥發(fā)生日益頻繁。失眠（insomnia）是指睡眠的始發(fā)（sleep on

2、set）和睡眠維持（sleep maintenance）發(fā)生障礙，致使睡眠質(zhì)量不能滿足個體生理需要而明顯影響患者白天活動（如白天困倦乏力、記憶力注意力下降等）的一種睡眠障礙綜合征。 現(xiàn)代醫(yī)學對失眠的研究發(fā)現(xiàn)睡眠的發(fā)生和維持與視交叉上核、下丘腦、腦干網(wǎng)狀上行系統(tǒng)以及松果體等部位，與乙酰膽堿（ACH）、去甲腎上腺素（NE）、多巴胺（DA）、單胺類、氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)以及退黑激素（melatonin，MT）、前列腺素（Prostagla

3、ndin，PG）、白介素（interleukin，IL）等物質(zhì)，均存在密切聯(lián)系。 目前失眠癥的臨床治療仍以BZD類鎮(zhèn)靜催眠藥物為主，在改善失眠癥狀的同時，往往伴有不同程度毒副作用并容易形成藥物依賴。祖國中醫(yī)藥的整體辯證論治方法，調(diào)整人體機能狀態(tài)的同時達到改善睡眠的治療方法，為失眠癥患者帶來了福音。導師陳寶田教授在研讀中醫(yī)經(jīng)典《傷寒論》過程中，結合臨床實踐在“柴胡桂枝湯”的基礎上創(chuàng)立了“安神方”，治療失眠癥療效確切，同時對改善患者

4、焦慮、抑郁等精神疾患亦有療效。在前期臨床觀察的基礎上，設計本實驗旨在系統(tǒng)地觀察安神方治療失眠癥的臨床療效，并進一步通過動物實驗探討安神方治療失眠癥的作用機理，為安神方的開發(fā)提供可靠的理論和臨床依據(jù)。 第一章、安神方治療失眠癥臨床觀察。 目的：通過臨床觀察探討安神方治療失眠癥的臨床效果。觀察失眠癥癥侯療效，臨床整體療效以及多導睡眠圖（PSG）檢查客觀結果，客觀的評價安神方治療失眠癥的效果。 方法： 1、病例

5、與分組符合納入標準的失眠癥患者80例，隨機方法分為安神方治療組和棗仁安神膠囊對照組。 2、用藥治療組安神方顆粒劑每日1劑，1次/晚；對照組棗仁安神膠囊每次4粒，1次/晚。睡前1小時服藥，時間4周。（安神方，由南方醫(yī)院中藥房提供，由廣東一方制藥生產(chǎn)，許可證號：粵zbx20060360；棗仁安神膠囊，由南方醫(yī)院藥房提供，貴州同濟堂制藥有限公司生產(chǎn)，國藥準字號220010033）。 3、中醫(yī)癥候療效評價在中醫(yī)癥候評分基礎上，比

6、較治療前后主要癥狀（睡眠時間，入睡困難，易醒，多夢，困倦乏力）改善等級，采用非參數(shù)檢驗方法，分析評價各組癥狀的改善。 4、臨床整體療效評價根據(jù)治療前后總評分，計算反應總體改善情況的“療效指數(shù)”，評定每例患者改善等級，以此評價兩組治療的整體療效。 5、臨床多導睡眠圖療效評價以分鐘（min）為單位記錄兩組治療前后總睡眠時間（TST）、睡眠潛伏時間、覺醒次數(shù)，淺睡眠時間（S1+S2），深睡眠時間（S3+S4）及REM睡眠時間。

7、分別進行治療前差異比較（兩獨立樣本t檢驗）、組內(nèi)治療前后癥狀比較（兩配對樣本t檢驗）、治療后組間癥候療效比較（協(xié)方差分析）。 6、安全性評價 治療前后檢查體溫，心率，血壓，呼吸；血、尿、便常規(guī)檢查；肝、腎功能檢查；心電圖檢查； 7、統(tǒng)計分析采用統(tǒng)計軟件SPSS13．0進行統(tǒng)計學處理和分析。實驗數(shù)據(jù)計量資料采用均數(shù)加減標準差（x±s）表示。治療前后劑量資料比較采用兩配對樣本t檢驗；兩組間計量資料比較采用兩獨立樣本t檢驗；治

8、療后組間癥候療效比較采用協(xié)方差分析；等級資料分布情況采用秩和檢驗及非參數(shù)檢驗。計數(shù)資料以百分率表示，采用卡方檢驗。所有統(tǒng)計數(shù)據(jù)均以P<0．05作為差異有顯著性差異的界限。 結論： 1、安神方治療對改善“易醒，困倦乏力”癥狀的療效優(yōu)于對照組，治療失眠癥的整體療效優(yōu)于對照組。 2、安神方對“總睡眠時間、覺醒次數(shù)、深睡眠時間、REM睡眠時間”癥狀的改善，具有顯著療效；與對照組比較，改善“深睡眠時間、REM睡眠時間”的療

9、效顯著。其對睡眠結構的調(diào)整主要是增加了“深睡眠時間”及“REM睡眠時間”；致使“總睡眠時間”增加。 3、安全性指標觀察 各項檢查指標無異常。 第二章、安神方治療失眠癥的相關機制研究。 一、安神方對失眠造模大鼠中樞氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)的影響。 目的：觀察安神方對大鼠中樞氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)含量的影響，探討其治療失眠癥的機理。 方法： 1、實驗動物與分組：清潔級Wistar大鼠60只，體重（200±2

10、0g），南方醫(yī)院實驗動物中心提供，許可證號：（粵）2006-0015。按隨機方法分成高劑量組、中、低劑量組和生理鹽水對照組，共4組。 2、給藥：高劑量組大鼠每天按40g．Kg-1灌胃，中劑量組大鼠每天按20g．Kg-1灌胃，低劑量組大鼠每天按10g．Kg-1灌胃，生理鹽水組給予等量生理鹽水灌胃。失眠造模同時連續(xù)給藥15天。 3、失眠大鼠模型制備方法本實驗采用‘限制運動法’制作大鼠失眠模型：將大鼠置于自制的大鼠運動限制儀內(nèi)

11、，通過移動插片控制大鼠的活動空間。每日束縛制動1次，第一次4h，其后每次增加1h，連續(xù)15d完成。大鼠在制動期間禁食、禁水。 4、中樞氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)檢測方法 處死并分離大鼠海馬及下丘腦。稱重，玻璃勻漿器勻漿化；離心取上清液，采用“高效液相色譜熒光檢測法”檢測中樞氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)。 5、儀器和試劑。 儀器及試劑：DIONEX Summit高效液相色譜儀（美國DIONEX公司），Chromeleon色譜工作站（美國

12、DIONEX公司），RF2000熒光檢測器（美國DIONEX公司），PHS-2C精密酸度計（上海理達儀器廠），冷凍離心機（Avanti 30），電子天平（BA 110S）。谷氨酸（Glu）、γ-氨基丁酸（GABA）、OPA（內(nèi)含2-ME）均購自美國SIGMA公司，批號分別為43907190、026K07361、116K5005；乙腈購自美國TEDIA公司；其余試劑均為市售分析純。 6、實驗數(shù)據(jù)計量資料采用（x±s）表示；采用統(tǒng)計

13、軟件SPSS13．0進行統(tǒng)計學描述和分析。多組間比較采用單因素方差分析（One-Way ANOVA）檢驗；方差齊時采用LSD方法檢驗；方差不齊時采用非參數(shù)Kruskal-Wallis檢驗。所有統(tǒng)計數(shù)據(jù)均以P<0．05作為差異有顯著性的界限。 結論：安神方治療組能增加大鼠海馬、下丘腦中γ-氨基丁酸（GABA）含量，降低谷氨酸（GLU）含量；調(diào)節(jié)中樞氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)是安神方治療失眠癥的機制之一。 二、安神方對睡眠剝奪大鼠血清

14、皮質(zhì)醇的影響。 目的：觀察安神方對應激條件下動物的焦慮癥狀的調(diào)節(jié)作用。 方法： 1、動物及分組清潔級Wistar大鼠30只，8周齡，雄性，體重（300±30g），南方醫(yī)院實驗動物中心提供，許可證號：（粵）2006-0015。隨機方法分為2組，每組15只。 2、試驗藥物中藥安神方，由南方醫(yī)院中藥房提供。治療組大鼠每天按20g．Kg-1灌胃（劑量按成人換算），生理鹽水組給予等量生理鹽水；每天灌胃1次。

15、 3、睡眠剝奪大鼠模型制備 采用“改良多平臺睡眠剝奪法”進行睡眠剝奪（sleep deprivation，SD）。室溫保持20-25℃，正常晝夜光照，每日更換睡眠剝奪用水，保持自由進食條件。 4、試驗步驟：持續(xù)睡眠剝奪72h，兩組分別在睡眠剝奪（SD）0h，24h，48h和72h時，記錄各組動物體重，并采血檢測血清皮質(zhì)醇。血清皮質(zhì)醇測定方法：于早晨7時經(jīng)尾靜脈取血0．5ml，置離心管中以3000r/min離心10min，取上清液

16、保存于低溫冰箱（-60℃）待檢測。 5、資料整理與統(tǒng)計學方法：采用統(tǒng)計軟件SPSS13．0進行統(tǒng)計學處理和分析。治療前后指標差值采用協(xié)方差分析，不同時間點數(shù)據(jù)變化采用重復測量數(shù)據(jù)的方差分析和獨立樣本t檢驗進行比較。所有統(tǒng)計數(shù)據(jù)分析均以P<0．05作為差異有顯著性的界限。 結論： 1、治療組體重減輕速度慢于生理鹽水對照組。 2、治療組血清皮質(zhì)醇含量增加的速度慢于生理鹽水對照組。 3、安神方治療可以減