腦膠質(zhì)瘤中NDRG2表達下調(diào)機制研究.pdf

1、人NDRG2(N-myc downstream regulated gene2)基因是本研究組用錨定引物PCR方法從正常人腦cDNA文庫中克隆得到的一個新基因，基因庫登錄號為AF159092，之后在腦膠質(zhì)瘤和瘤旁組織的消減雜交中，抑癌基因組又克隆到該基因。NDRG2為NDRG基因家族成員之一，且該基因家族成員的氨基酸組成在從低等生物到高等生物的進化中有相當(dāng)高的保守性,提示該基因家族在細(xì)胞的生命過程中起著重要作用。而目前對于NDRG2結(jié)構(gòu)

2、和功能的研究尚處于初步階段。我們研究小組發(fā)現(xiàn)，將該基因轉(zhuǎn)染入某些腫瘤細(xì)胞系后具有抑制細(xì)胞增殖的功能，且發(fā)現(xiàn)該基因在膠質(zhì)瘤、肺癌和肝癌等十余種腫瘤組織中的表達低于相應(yīng)的癌旁組織，因此目前觀點認(rèn)為NDRG2可能是抑癌基因，但具體作用機制尚不清楚。
　　本實驗首先采用實時定量PCR技術(shù)檢測膠質(zhì)瘤中NDRG2的表達，發(fā)現(xiàn)NDRG2表達水平明顯低于瘤旁組織，進一步采用BSP技術(shù)檢測膠質(zhì)瘤組織和細(xì)胞系中NDRG2啟動子區(qū)CpG島甲基化狀態(tài)，分

3、析NDRG2啟動子甲基化與基因表達的關(guān)系。
　　因PI3K通路是膠質(zhì)瘤中異常活躍的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路之一，AKT和PKC是其下游分子。有研究表明NDRG2是AKT、PKC的底物，本實驗檢測了膠質(zhì)瘤中PI3K、AKT2、PKC-αmRNA表達，在mRNA水平探討它們與NDRG2表達的相關(guān)性。
　　結(jié)果發(fā)現(xiàn)，腦膠質(zhì)瘤中NDRG2mRNA表達低于瘤旁組織，且隨膠質(zhì)瘤惡性程度增高，NDRG2表達逐漸減少；膠質(zhì)瘤組織NDRG2啟動子區(qū)甲基化

4、陽性率顯著多于瘤旁組織，且甲基化陽性的Ⅳ級膠質(zhì)瘤多于Ⅲ級、Ⅱ級膠質(zhì)瘤；病理分級間甲基化陽性位點數(shù)目有差異，其中Ⅳ級與Ⅲ級間有顯著性差異；檢測的32個CpG位點中正向序列的前16個CpG位點發(fā)生甲基化的頻率顯著高于后16個CpG位點；細(xì)胞系中，U251發(fā)生了甲基化，SHG44未發(fā)生甲基化。說明NDRG2的表達降低可能參與了膠質(zhì)瘤的發(fā)生和發(fā)展。NDRG2啟動子區(qū)的甲基化可能是導(dǎo)致NDRG2表達下調(diào)進而促使膠質(zhì)瘤發(fā)生惡性演變的原因之一。