雪旺細胞的分離培養(yǎng)及RGD復合材料促進周圍神經修復作用的研究.pdf

1、雪旺細胞(SCs)是周圍神經系統(tǒng)一種重要的膠質細胞，能形成有髓神經纖維和無髓神經纖維的神經內膜，具有多種生理功能，增生的雪旺細胞能分泌產生多種促進神經再生修復的神經營養(yǎng)因子與細胞粘附分子。隨著組織工程的發(fā)展，在構建的神經導管支架材料上種植雪旺細胞，移植入體可以促進軸突生長，從而促進神經修復，但如何快速獲取大量雪旺細胞是移植的關鍵。人工合成的神經導管已被廣泛證明可以促進神經再生，具有良好細胞親和性，能長期持續(xù)釋放神經生長因子的生物材料逐漸

2、成為周圍神經組織工程的研究熱點。 本文探討出一種可在短時間內分離培養(yǎng)成年大鼠雪旺細胞的方法，并能使其純度達到90％以上，數(shù)量在10<'6>/ml以上，來滿足臨床上修復周圍神經損傷的需要。本實驗通過預變性大鼠坐骨神經7天后，依次應用組織塊種植法，快速酶消化法和雙差速貼壁，對得到的細胞進行分離純化，通過鏡下胎盼藍細胞計數(shù)和S-100免疫組化染色鑒定，對分離得到的原代雪旺細胞進行數(shù)量計算和純度計算，實驗結果顯示通過此法得到的雪旺細胞的

3、數(shù)量和純度均能達到組織工程化人工神經的實驗要求。 利用各種神經導管可成功橋接修復短段周圍神經缺損已被許多實驗所證明，應用組織工程技術構建神經導管，為修復長段周圍神經缺損提供了新的方法和思路。本實驗以聚乳酸為基體材料，接枝了RGD多肽，添加了一定比例的β-TCP和神經生長因子(NGF)，制備出一種新型的具有良好降解性能和藥物釋放性能的復合型神經導管。通過對RGD復合導管材料進行體外模擬降解實驗，測定降解過程中浸泡液pH值的變化及材

4、料質量損失率，顯示PLA降解速度最慢，24周后膜質量損耗率僅為25％左右，PRGD/PLA，PRGD/PLA/TCP和PRGD/PLA/TCP/NGF膜降解速度相當，在24周時膜損耗率已超過50％。PRGD/PLA膜較PRGD/PLA/TCP，PRGD/PLA/TCP/NGF兩組材料pH值下降較快，四種材料的浸泡液在24周內PH值基本呈下降趨勢，PRGD/PLA/TCP和PRGD/PLA/TCP/NGF兩組材料在第2周左右達6.8，呈微