重要海水養(yǎng)殖魚類星斑川鰈(Platichthys stellatus)微衛(wèi)星開發(fā)及遺傳多樣性研究.pdf

1、星斑川鰈（Platichthys stellatus）是營底棲生活習性的鰈科魚類，憑借其豐富的營養(yǎng)價值和較高的商業(yè)價值，已逐漸成為我國北方海水人工養(yǎng)殖的對象。本研究以星斑川鰈為主要研究對象，運用轉錄組測序的方法對星斑川鰈微衛(wèi)星進行開發(fā)，進而運用微衛(wèi)星標記、線粒體基因標記等分子標記的手段比較分析了星斑川鰈兩個養(yǎng)殖群體與相近鰈科魚類以及雜交子代間的遺傳多樣性。為魚類養(yǎng)殖以及野生魚類資源保護方面提供了理論基礎。本研究的主要結果如下:
　

2、　1.基于HiSeq2000轉錄組測序的方法，以日照星斑川鰈的腦垂體和下丘腦組織為材料進行轉錄組測序，使用軟件MISA對轉錄組測序所得的Unigene序列進行SSR預測建立星斑川鰈的SSR庫。在轉錄組測序得到的總長為82619097bp的30640條unigenes中共發(fā)現20095個SSRs，分布在10924條unigene中。最多的SSR重復類型是二核苷酸型的SSR，占SSR總數的63.64％，其中(AC)n類型重復的SSR最多;其

3、次是三核苷酸、四核苷酸、六核苷酸重復，最少的是五核苷酸重復。共有100種重復單元。二核苷酸重復單元類型最少，僅有4種;六核苷酸重復單元類型最多，含有37種;三、四、五核苷酸重復單元類型分別有10、25、24種。
　　2.挑選有生長或免疫功能的20個微衛(wèi)星標記，設計合成熒光引物，并在日照星斑川鰈、江蘇星斑川鰈兩個地理群體及石鰈和黃蓋鰈及其雜交一代（日照星斑川鰈♀×石鰈♂）中PCR擴增，PCR結果進行毛細管電泳檢測。其中在日照星斑川鰈

4、中有19個位點可以擴增出特異性條帶，江蘇星斑川鰈有18個，石鰈中有15個，黃蓋鰈中有12個，雜交一代中有18個。有效等位基因數分別為:日照星斑川鰈(2.07)、江蘇星斑川鰈(1.93)、黃蓋鰈(1.59)、石鰈(1.86)，雜交一代(1.81)。平均觀測雜合度分別是日照星斑川鰈(0.350)、江蘇星斑川鰈(0.278)、黃蓋鰈(0.247)、石鰈(0.274)，雜交一代(0.5255)。高度多態(tài)基因座(PIC＞0.5)所占擴出條帶的比例

5、分別為日照星斑川鰈(26.31％)、江蘇星斑川鰈(22.22％)、黃蓋鰈(16.67％)、石鰈(26.67％)，雜交一代(22.22％)。Nei's氏基因指數分別是日照星斑川鰈(0.420)、江蘇星斑川鰈(0.387)、黃蓋鰈(0.226)、石鰈(0.302)。雜交一代(0.336)。結果說明了四種鰈科魚類遺傳多樣性均較低，應注意漁業(yè)資源的保護。
　　3.本文采用了PCR擴增和直接測序的技術，對這五種鰈科魚類的線粒體基因Cytb和

6、COI進行初步研究。實驗結果均表現為(A+T)含量高于(C+G)含量。使用雙參數模型(Kimura2-parameter)計算其遺傳距離與運用UPGMA和NJ方法建立的系統(tǒng)樹結果一致，均顯示鈍吻黃蓋鰈與其他三個群體遺傳距離最遠;星斑川鰈兩個群體幾乎沒有差異;星斑川鰈與石蝶相對較近。雜交子代與母代星斑川鰈近于與父本石鰈間的距離。
　　4.雜交子代出現了兩種性狀的子代，左眼和右眼子代，其數量比近乎1∶1。不管是運用微衛(wèi)星標記還是線粒體