凋亡抑制蛋白PED-PEa-15在食管鱗狀細胞癌和不同食管癌細胞株中的表達及其意義.pdf

1、目的:食管癌是一種常見消化道惡性腫瘤，發(fā)病率高、預后差。目前認為食管癌的發(fā)生和發(fā)展與多種因素密切相關，包括飲食、環(huán)境、遺傳、以及基因改變等。在病因研究中，關于基因在食管癌發(fā)生過程中的作用成為目前的熱點。食管癌是食管上皮細胞發(fā)生增殖性病變的過程。該過程中，多種調節(jié)因子參與細胞周期中不同環(huán)節(jié)的調節(jié)，其中細胞凋亡紊亂為重要的環(huán)節(jié)。細胞凋亡（apoptosis）是指細胞的程序性死亡(programmedcelldeath，PCD)，是一個由基因

2、控制的高度有序并有一系列酶參與的主動過程。細胞凋亡的調控是在多重因素共同作用下引起促進或抑制發(fā)生的復雜過程。半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspases)的活化是凋亡的起始和執(zhí)行階段的主要調控因素。
　　 目前研究顯示當凋亡啟動誘導因素對Caspase產生作用并且一定基因對其進行調節(jié)時，細胞膜上的某些特定受體蛋白就會將凋亡的信號傳遞至Caspase，從而使Caspase發(fā)生級聯(lián)式激活，導致細胞的形態(tài)學發(fā)生改變從而發(fā)生細胞凋亡。

3、>　　 凋亡蛋白抑制因子（inhibitorsofapoptosisprotein，IAPs）是一類在結構上具有同源性的抗凋亡蛋白，此類抗凋亡蛋白在多種惡性腫瘤組織中呈現高表達。PED/PEA-15與IAPs的抗凋亡機制相似，是另一種新近發(fā)現的具有廣譜抗凋亡功能的小分子蛋白，兩者均通過抑制Caspase的級聯(lián)激活而阻斷凋亡通路。PED/PEA-15可依靠分子中的“死亡效應區(qū)（deatheffectordomain，DED）”抑制“死亡

4、誘導信號復合體(DISC)”的形成阻斷Caspase級聯(lián)式激活，使腫瘤細胞的凋亡受到抑制，進而促進腫瘤的發(fā)生發(fā)展。目前對于PED/PEA-15在喉癌、肺癌中的表達已經有相關研究，但是尚未見其在食管癌中的表達及其意義的研究。
　　 本實驗通過免疫組織化學方法檢測PED/PEA-15蛋白在食管鱗狀細胞癌組織中與食管正常組織中表達率的差異，分析其與食管癌臨床病理特征的關系，并探討其表達與食管癌預后的關系。通過RT-PCR方法檢測PED

5、/PEA-15在不同食管癌細胞株中的表達差異性。為研究PED/PEA-15是否可作為食管癌靶向治療的新靶點提供理論參考。
　　 方法:
　　 收集2005年1月至12月河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院經手術病理證實的食管鱗狀細胞癌患者50例，取其癌組織蠟塊。男性32例，女性18例，男女比例1.78/1，患者平均年齡55.9歲。根據術后病理結果侵及粘膜及粘膜下層者9例，侵及肌層者12例，侵及纖維膜者29例，無侵及周圍軟組織病例。術后病

6、理結果顯示有淋巴結轉移35例，無淋巴結轉移15例。腫瘤組織低分化者12例，中分化者30例，高分化者8例，將以上癌組織病例定為實驗組，所有病例術前均未行放化療，術后隨訪資料完整。收集2005年1月至12月手術中所取的食管正常組織蠟塊54例，將以上正常組織病例定為對照組。用免疫組織化學方法檢測50例癌組織及54例食管正常組織中PED/PEA-15的表達情況，分析其與食管癌臨床病理特征的關系。
　　 采用由日本千葉縣腫瘤研究中心實驗室

7、友情提供的食管癌細胞株TE1、TE2。將細胞株經過細胞復蘇、傳代等步驟進行擴增，然后將TE1、TE2兩種癌細胞分別分為10個備份，分別提取其RNA。通過RT-PCR方法檢測兩種癌細胞中PED/PEA-15表達的差異性。
　　 結果:
　　 1.通過免疫組織化學方法檢測凋亡抑制蛋白PED/PEA-15在食管癌組織中的表達。
　　 凋亡抑制蛋白PED/PEA-15在50例食管鱗狀細胞癌組織中的陽性表達率為60.0％;

8、54例食管正常組織中的陽性表達率為33.3％。統(tǒng)計學分析結果顯示P=0.000(P＜0.05)，兩者的表達有明顯差異。
　　 PED/PEA-15在50例食管鱗狀細胞癌組織中有30例陽性表達，其總陽性表達率為60.0％。其分布為:男性63.3％，女性36.7％;年齡大于60歲的患者36.7％，小于60歲的患者63.3％;腫瘤位于食管上段者16.7％，中段者63.3％，下段者20.0％。統(tǒng)計學分析結果顯示:此蛋白在食管癌組織中的表

9、達與性別、年齡、腫瘤位置均無相關性（均P＞0.05）?；颊唛L期生存率分析顯示:PED/PEA-15陽性表達率越高，患者的五年生存率越低。在30例呈陽性表達的患者中有淋巴結轉移者83.3％，無淋巴結轉移的者16.7％;腫瘤組織侵及粘膜及粘膜下層者10.0％，侵及肌層者23.3％，侵及纖維膜者66.7％;低分化者33.3％，中分化者56.7％，高分化者10.0％。統(tǒng)計學分析發(fā)現PED/PEA-15的表達與腫瘤組織的浸潤深度、有無淋巴結轉移及

10、分化程度均有密切關系（均P＜0.05）
　　 2.通過RT-PCR方法檢測PED/PEA-15在食管癌細胞TE1、TE2中表達的差異性。
　　 凋亡抑制蛋白PED/PEA-15的mRNA在食管癌細胞TE1、TE2中表達的結果為:TE1(1.513±0.118)、TE2（1.491±0.064）。該mRNA在兩種不同癌細胞中的表達無明顯差異(P＞0.05)。
　　 結論:
　　 1.PED/PEA-15在食

11、管鱗狀細胞癌組織的中的表達率明顯高于正常組織(P＜0.05)。
　　 2.PED/PEA-15在食管癌組織中的表達與性別、年齡、腫瘤位置均無相關性（均P＞0.05）。
　　 3.PED/PEA-15在食管癌組織中的表達與腫瘤組織的浸潤深度、有無淋巴結轉移及分化程度均有密切關系（均P＜0.05）。并且其陽性率越高，患者五年生存率越低。
　　 4.PED/PEA-15在不同的食管癌細胞株中均有表達，但表達無明顯差異（