組蛋白去乙酰化酶抑制劑SAHA聯(lián)合三氧化二砷對(duì)NB4、K562、U266細(xì)胞的作用研究.pdf

1、目的：探討組蛋白去乙?；敢种苿㏒AHA聯(lián)合三氧化二砷對(duì)NB4細(xì)胞、K562細(xì)胞、U266細(xì)胞殺傷作用及機(jī)制研究，為探索血液腫瘤新的治療方案提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：以人急性早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株（NB4細(xì)胞株）、人慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株（K562細(xì)胞株）和人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞株（U266細(xì)胞株）為研究對(duì)象，采用CCK-8法檢測(cè)SAHA、ATO單用或聯(lián)合應(yīng)用對(duì)NB4、K562、U266三種細(xì)胞增殖抑制作用；采用 Annexin-VF

2、ITC/PI雙染流式細(xì)胞術(shù)、AO/EB熒光染色法對(duì)凋亡進(jìn)行量化；運(yùn)用Western blot方法檢測(cè)三種細(xì)胞死亡過(guò)程中P53、P21、BCL-2、Akt、PML-RARa、Acetyl-Histone H3、Acetyl-Histone H4等相關(guān)蛋白的變化。
　　結(jié)果：①CCK-8法實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，SAHA、ATO對(duì)NB4、K562、U266三種細(xì)胞均有殺傷作用，并呈時(shí)間和劑量依賴性，與對(duì)照組相比均有顯著性差別（p<0.01）。S

3、AHA與ATO進(jìn)行聯(lián)用處理NB4、K562、U266細(xì)胞48h后，兩藥聯(lián)合對(duì)NB4、K562細(xì)胞的殺傷具有相加作用，對(duì)U266細(xì)胞的殺傷具有相加作用或協(xié)同作用。②Annexin-VFITC/PI雙染流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，對(duì)照組中活細(xì)胞所占比例均﹥95％；單藥作用后的細(xì)胞凋亡率隨藥物濃度的增大而增加。SAHA0.5μmol/L、ATO2μmol/L以及SAHA0.5μmol/L與ATO2μmol/L聯(lián)合作用后48h，NB4細(xì)胞中凋亡細(xì)胞的比

4、例分別為31.25±2.15％、19.25±1.35％、83.05±7.75％。SAHA2μmol/L、ATO8μmol/L以及SAHA2μmol/L與ATO8μmol/L聯(lián)合作用后48h，K562細(xì)胞中凋亡細(xì)胞的比例分別為10.85±0.65％、29.65±1.75％、84.00±0.80％。SAHA2μmol/L、ATO16μmol/L以及SAHA2μmol/L與ATO16μmol/L聯(lián)合作用后48h，U266細(xì)胞中凋亡細(xì)胞的比例分

5、別為17.90±2.60％、26.45±4.95％、81.60±4.20％。兩藥聯(lián)用組三種腫瘤細(xì)胞的凋亡率較單藥組均明顯升高（p<0.01）。③AO/EB染色在熒光顯微鏡下可見藥物處理組和對(duì)照組之間細(xì)胞形態(tài)存在明顯變化，單藥處理組可見細(xì)胞凋亡（細(xì)胞核可見明顯核固縮、核碎裂），對(duì)照組則改變不明顯，聯(lián)合用藥組則凋亡現(xiàn)象更為顯著。④Western blot的檢測(cè)結(jié)果顯示，NB4、K562、U266三種細(xì)胞經(jīng)SAHA處理后，單藥組和聯(lián)用組Ace

6、tyl-Histone H3、Acetyl-Histone H4蛋白表達(dá)水平均顯著上調(diào)。在NB4細(xì)胞中，藥物聯(lián)用組BCL-2及PML-RARa融合蛋白表達(dá)水平較單藥組及對(duì)照組明顯降低；SAHA單藥組及聯(lián)用組Akt蛋白表達(dá)水平顯著上調(diào)；P53蛋白表達(dá)水平經(jīng)ATO單藥處理后上調(diào)，而SAHA組及聯(lián)合用藥組未見明顯變化；p21WAF1/CIP1經(jīng)SAHA單藥處理后表達(dá)水平上調(diào)，ATO單藥及聯(lián)用組較對(duì)照組表達(dá)水平無(wú)明顯變化。在K562細(xì)胞中，單藥

7、組及聯(lián)用組Bcr/abl融合蛋白P210表達(dá)水平較對(duì)照組明顯降低；p21WAF1/CIP1經(jīng)SAHA單藥處理后表達(dá)水平上調(diào)，As2O3單藥及聯(lián)用組較對(duì)照組表達(dá)水平無(wú)明顯變化；藥物聯(lián)用組Akt蛋白表達(dá)水平較單藥組及對(duì)照組明顯降低。在U266細(xì)胞中，聯(lián)用組P53蛋白表達(dá)下調(diào)；各藥物組Akt蛋白表達(dá)水平未見明顯改變。
　　結(jié)論：1.SAHA、ATO單用對(duì)NB4細(xì)胞、K562細(xì)胞和U266細(xì)胞均有殺傷作用，呈時(shí)間和劑量依賴性；兩藥聯(lián)合對(duì)三