質粒pLXSN-bcl-2治療短暫性局灶性腦缺血及對熱休克蛋白70表達影響的實驗研究.pdf

1、目的:目前,轉bcl-2基因治療缺血性腦血管病的研究尚處于探索階段,其中載體的選擇和基因導入途徑是該治療能否臨床應用的關鍵.國內外多采用以病毒為載體通過腦缺血局部注射的方法,但該方法由于一些不可避免的缺陷使臨床廣泛應用受到很大限制.該實驗為尋求更為簡便快捷的治療方法,用質粒作為載體攜帶bcl-2基因,直接注入短暫性局灶性腦缺血大鼠的側腦室內,觀察該方法能否收到良好的治療效果.熱休克蛋白70(Heat shock protein 70,H

2、sp70)在應激狀態(tài)的細胞內大量存在,對缺血狀態(tài)的細胞有保護作用.近來有研究發(fā)現(xiàn)hsp70蛋白的腦保護作用可能與其抗凋亡效應有關.因此,該實驗欲觀察bcl-2的過度表達能否引起hsp70蛋白表達的變化,為進一步探討二者之間的關系提供依據(jù).方法采用改良的Longa栓線法[1]構建大鼠局灶性腦缺血模型,用立體定位儀確定大鼠側腦室精確位置,缺血后立即向治療組和對照組大鼠側腦室中分別注入質粒pLXSN-bcl-2(100ng/ul)、空質粒pL

3、XSN(100ng/ul)和生理鹽水各20ul.缺血一小時后將拴線拔出進行缺血鼠腦再灌注.存活的各組大鼠分成再灌注3h、6h、24h、48h、72h組,在各時間點將大鼠斷頭取大腦.用免疫組織化學方法觀察bcl-2蛋白和hsp70蛋白表達情況,用2％TTC(2％2,3,5-triphenyltetrazolium chloride紅四氮唑)染液顯示鼠腦梗死灶,并用直接測量法比較治療組和對照組大鼠各時間點腦梗死體積變化.結論1.向大鼠側腦室