利用轉基因胡蘿卜表達口蹄疫病毒結構蛋白VP1.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是偶蹄動物一種急性、發(fā)熱性、高度接觸性傳染病,目前尚無一種十分有效的方法進行防治.利用轉基因植物生產可以直接口服的疫苗來防治該病具有十分廣闊的前景.胡蘿卜種植廣泛,易于組織培養(yǎng)和轉化,可以生食,對人類特別是嬰幼兒較為理想,是生產口服疫苗理想的"生物反應器".該實驗以胡蘿卜為轉化受體,研究了口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)結構蛋白

2、VP1基因在轉基因胡蘿卜中的表達情況,為進一步研究利用轉基因植物生產口服疫苗和研制防御口蹄疫的新型疫苗提供了一條新途徑.該實驗選用三個胡蘿卜(Daucus carota L.var.sativa)栽培品種金筍五寸、Carol和改良黑田七寸,以它們的下胚軸和子葉為外植體,首先建立了高效的再生體系.在此基礎上,以Carol的下胚軸和愈傷組織為受體材料,利用根癌農桿菌LBA4404介導,轉化質粒pBI121,實現了外源報告基因GUS在胡蘿卜中

3、的瞬間表達和穩(wěn)定表達.在成功地構建了攜帶有FMDV結構蛋白VP1基因的植物表達載體pBFMDV后,利用根癌農桿菌LBA4404介導,將FMDV VP1基因導入胡蘿卜細胞中,經PCR和PCR-Southern雜交等方法的鑒定,確認FMDV VP1基因已整合到胡蘿卜染色體中.SDS-PAGE實驗結果初步證明了在轉化苗中有目的基因的表達.Western-blotting結果進一步確認了目的基因在轉化苗中的表達.Dot-ELISA和ELISA實

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