豬卵巢卵母細胞體外受精的研究.pdf

1、本研究以廢棄豬卵巢為實驗初始材料，用機械法抽取獲得未成熟卵母細胞，體外培養(yǎng)成熟后用于體外受精實驗的研究。本文比較了影響豬卵母細胞體外受精的影響因素，以期能夠進一步完善豬胚胎的體外生產體系，為胚胎技術的進一步發(fā)展提供技術保障。
　　本研究包括以下內容：
　?。?）比較在mTBM中添加不同濃度的咖啡因、不同受精時間及精子上浮時間對豬體外受精的影響。
　　（2）比較豬卵母細胞體外不同成熟時間、受精過程中顆粒細胞的存在情況及低

2、氧環(huán)境對豬體外受精的影響。
　　（3）研究精子獲能液中添加不同濃度的Ionomycin及Ionomycin作用不同時間對豬體外成熟卵母細胞體外受精效果的影響。
　　主要研究結果如下：
　　1.以改良mTBM為基礎液，添加咖啡因對受精胚胎的卵裂率和囊胚率有明顯的促進作用，添加3mmol/L咖啡因組的受精胚胎卵裂率顯著高于添加5mmol/L咖啡因組和未添加咖啡因組(P＜0.05)，且該組的囊胚率最高；精子上浮處理1h組的卵

3、裂率和囊胚率均顯著高于其它實驗組(P＜0.05)；精卵孵育時間對受精胚胎卵裂率無顯著影響(P＞0.05)，隨受精時間延長至9h，受精胚胎的囊胚率顯著降低。通過各實驗組比較發(fā)現(xiàn)，受精液中添加3mmol/L咖啡因，精子上浮1.0h，受精6h能得到較好的體外受精結果。
　　2.體外成熟40～42h組的卵母細胞體外受精胚胎的卵裂率和囊胚率顯著高于體外成熟培養(yǎng)36～38h組和46～48h組(P＜0.05)；保留2-3層顆粒細胞組與不脫顆粒細

4、胞組的受精胚胎卵裂率和囊胚率差異均不顯著(P＞0.05)，且這兩組的實驗結果顯著高于無顆粒細胞組(P＜0.05)；就卵裂率和囊胚率而言，5％ CO2組顯著高于10%CO2組和15%CO2組(P＜0.05)。通過對各實驗組的比較，卵母細胞體外成熟培養(yǎng)40～42h，保留全部顆粒細胞和氣相環(huán)境為5%CO2能得到較好的體外受精結果。
　　3.獲能液中添加10μmol/L的Ionomycin能顯著提高受精胚胎的卵裂率和囊胚率(P＜0.05)