枯草芽孢桿菌BSY-2對(duì)大豆疫病菌的拮抗機(jī)理研究.pdf

1、枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)BSY-2是本實(shí)驗(yàn)室分離獲得的一株生防細(xì)菌,前期研究明確該生防細(xì)菌對(duì)大豆疫霉有良好抑制作用。本學(xué)位論文在此基礎(chǔ)上,對(duì)菌株BSY-2抗菌譜、發(fā)酵液的抗菌穩(wěn)定性、發(fā)酵液中抗菌蛋白提取及抗菌蛋白抑菌機(jī)理進(jìn)行了研究,主要研究結(jié)果如下:
　　1.采用平板對(duì)峙法進(jìn)行枯草芽孢桿菌BSY-2的抗菌譜檢測(cè),平板對(duì)峙試驗(yàn)顯示,枯草芽孢桿菌BSY-2對(duì)10種供試病原真菌均有不同程度的抑制作用,其中枯草芽孢

2、桿菌BSY-2對(duì)大豆疫霉AH、串珠鐮孢FM、灰梨孢菌PO的抑制效果極強(qiáng),抑菌活性分別達(dá)到71.51％、91.04%、83.21%,對(duì)尖孢鐮孢西瓜專(zhuān)化型FO-2、蘋(píng)果炭疽菌GF、丹皮根腐病菌FS、燕麥鐮孢FA、大麗輪枝菌VD、小麥赤霉病菌FG也具有較強(qiáng)的抑制作用,而對(duì)尖鐮孢萎蔫專(zhuān)化型FO-1的抑制作用相對(duì)較弱,但抑菌活性仍然達(dá)到27.95%。此項(xiàng)研究表明枯草芽孢桿菌BSY-2具有廣譜的抗菌活性,是一株具有良好生防潛能的菌株。
　　2

3、.對(duì)枯草芽孢桿菌BSY-2發(fā)酵液的抗菌活性及不同條件下抗菌穩(wěn)定性進(jìn)行初步研究,結(jié)果表明,發(fā)酵液在培養(yǎng)2-5d內(nèi),具有較強(qiáng)的抗菌活性,以培養(yǎng)3d為佳;其抗菌活性在室溫至60℃范圍內(nèi)保持良好;在pH6-10范圍內(nèi),抗菌活性較為穩(wěn)定,對(duì)酸穩(wěn)定性較差;其抗菌活性紫外光照射時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸減弱,發(fā)酵液對(duì)紫外光敏感。此項(xiàng)研究為該發(fā)酵液的分離純化工作提供了有力的理論依據(jù),為該菌株的進(jìn)一步研究和產(chǎn)品開(kāi)發(fā)奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
　　3.采用硫酸銨沉淀法進(jìn)

4、行枯草芽孢桿菌BSY-2發(fā)酵液中抗菌蛋白的提取,通過(guò)不同飽和度硫酸銨沉淀蛋白的拮抗活性檢測(cè)明確最佳硫酸銨飽和度,以獲取活性最佳的抗菌蛋白,結(jié)果顯示,當(dāng)(NH3)2SO4飽和度達(dá)到80%時(shí),提取的抗菌蛋白對(duì)大豆疫霉菌絲生長(zhǎng)抑制效果顯著高于其他處理,抑菌率達(dá)到49.75%,活性仍然保留原發(fā)酵液活性的60%左右,表明枯草芽孢桿菌BSY-2發(fā)酵液中主要有效活性物質(zhì)為蛋白類(lèi),且提取發(fā)酵液中有效抗菌蛋白的最佳硫酸銨飽和度80%。
　　4.為了

5、明確抗菌蛋白對(duì)大豆疫霉AH的拮抗機(jī)理,測(cè)定了抗菌蛋白對(duì)大豆疫霉AH菌絲生長(zhǎng)、游動(dòng)孢子萌發(fā)和卵孢子產(chǎn)生的抑制作用,結(jié)果顯示,抗菌蛋白能顯著抑制菌絲的正常生長(zhǎng),能夠破壞大豆疫霉菌絲結(jié)構(gòu),導(dǎo)致大豆疫霉菌絲畸形腫脹、扭曲變形、斷裂、原生質(zhì)外滲等;抗菌蛋白處理游動(dòng)孢子12h和24h后萌發(fā)率均顯著下降,萌發(fā)活性喪失近60%;抗菌蛋白導(dǎo)致大豆疫霉卵孢子產(chǎn)量顯著減少,卵孢子形成抑制率為38.46%。此項(xiàng)研究表明,枯草芽孢桿菌BSY-2主要通過(guò)抑制大豆疫