溶菌酶在異育銀鯽和草魚(yú)飼料中的應(yīng)用研究.pdf

1、隨著水產(chǎn)集約化養(yǎng)殖的發(fā)展,抗生素殘留、耐藥性等問(wèn)題已經(jīng)制約了水產(chǎn)養(yǎng)殖的發(fā)展,開(kāi)發(fā)新型安全的飼料添加劑是解決這些問(wèn)題的一個(gè)重要途徑。溶菌酶就是新型安全飼料添加劑的一種。
　　本文旨在研究溶菌酶在水產(chǎn)飼料中的應(yīng)用可能性,并初步確定在異育銀鯽和草魚(yú)飼料中的用量范圍。本文共三個(gè)試驗(yàn)部分,第一章為溶菌酶在異育銀鯽飼料中的應(yīng)用,旨在研究溶菌酶在異育銀鯽飼料中應(yīng)用的可能性,第二章和第三章是在第一章的基礎(chǔ)上,將溶菌酶制品優(yōu)化,驗(yàn)證溶菌酶作為飼料添

2、加劑的穩(wěn)定性;并研究具備飼料添加劑穩(wěn)定性的溶菌酶優(yōu)化制品在草魚(yú)飼料中的應(yīng)用效果,初步確定溶菌酶在草魚(yú)飼料中的適宜用量。
　　溶菌酶在異育銀鯽飼料中的應(yīng)用研究試驗(yàn)采用單因子試驗(yàn)設(shè)計(jì),選用當(dāng)年異育銀鯽,在試驗(yàn)池中用基礎(chǔ)飼料養(yǎng)殖40d,使其適應(yīng)試驗(yàn)條件,并消除試驗(yàn)魚(yú)因營(yíng)養(yǎng)和環(huán)境造成的差異。試驗(yàn)分為11組,每組4個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)30尾(初重28.11±2.14g),放入2m×0.75m×1.0m的網(wǎng)箱內(nèi)養(yǎng)殖,養(yǎng)殖周期60d,研究飼料中添加

3、溶菌酶和其包被品(采用膠體法制備的溶菌酶顆粒)對(duì)異育銀鯽生長(zhǎng)性能、內(nèi)源酶指標(biāo)和免疫機(jī)能即抗感染能力的影響。溶菌酶組設(shè)置6個(gè)梯度:0mg/kg(對(duì)照組),10mg/kg(L1),20 mg/kg(L2),30 mg/kg(L3),40 mg/kg(L4)和50 mg/kg(L5)。溶菌酶包被品組根據(jù)初始酶活的理論值將添加量分別設(shè)置為:2g/kg(EL1),4 g/kg(EL2),6 g/kg(EL3),8 g/kg(EL4)和10 g/k

4、g(EL5)。結(jié)果表明:飼料中添加溶菌酶或其包被品對(duì)異育銀鯽的生長(zhǎng)性能有顯著影響。包被組相對(duì)增重率除 EL1組和EL3組比對(duì)照組有顯著提高(P<0.05),其他組無(wú)顯著差異;溶菌酶L5組相對(duì)增重率比對(duì)照組有顯著的降低,其他組和對(duì)照組無(wú)顯著差異(P>0.05)。包被組飼料系數(shù)EL1、EL2組和EL3組比對(duì)照組有顯著降低,EL5組比對(duì)照組有顯著的升高(P<0.05),呈現(xiàn)出隨包被品濃度的增加先降低再升高的趨勢(shì);溶菌酶除 L5組比對(duì)照組有顯著

5、的提高(P<0.05),其他組和對(duì)照組無(wú)顯著差異(P>0.05)。在相同的酶活力條件下,包被組試驗(yàn)魚(yú)的生長(zhǎng)性能普遍優(yōu)于溶菌酶組。攻毒結(jié)果說(shuō)明,飼料中添加溶菌酶和其包被品可增強(qiáng)異育銀鯽對(duì)嗜水氣單胞菌的抗感染能力,提高異育銀鯽的非特異性免疫功能。對(duì)內(nèi)源酶的影響溶菌酶組和溶菌酶包被品組的趨勢(shì)基本一致。綜合生長(zhǎng)和免疫性能兩方面,包被品組表現(xiàn)出更多的優(yōu)勢(shì),在本試驗(yàn)條件下,溶菌酶包被品在異育銀鯽飼料中的適宜添加量為2-6g/kg。
　　鑒于第

6、一章試驗(yàn)中包被品對(duì)異育銀鯽生長(zhǎng)性能和免疫性能的影響均優(yōu)于未經(jīng)處理的溶菌酶,而由于凝膠法制備的包被品的顆粒較大,且酶活力的穩(wěn)定性較差,故對(duì)溶菌酶包被工藝進(jìn)行優(yōu)化,采用薄膜法進(jìn)行包被制作成近似粉狀的溶菌酶制品,并對(duì)其性質(zhì)和應(yīng)用作出如下研究。
　　采用薄膜法制備的溶菌酶制品的穩(wěn)定性研究,共設(shè)計(jì)了四個(gè)方面的試驗(yàn):溶菌酶性質(zhì)試驗(yàn),飼料加工環(huán)境模擬試驗(yàn),體外消化試驗(yàn)和儲(chǔ)存試驗(yàn)。溶菌酶性質(zhì)試驗(yàn)通過(guò)設(shè)置不同溫度條件和pH條件測(cè)定溶菌酶制劑的酶活變

7、化。試驗(yàn)結(jié)果表明,該溶菌酶制劑的最適溫度為80℃左右,而pH值在3.0-8.0之間對(duì)溶菌酶的酶活影響不顯著(P>0.05)。通過(guò)擠壓和高溫處理模擬飼料加工環(huán)境,研究其對(duì)溶菌酶酶活的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明,擠壓和高溫處理對(duì)溶菌酶飼料的酶活力影響不顯著(P>0.05)。體外消化試驗(yàn)研究溶菌酶草魚(yú)、鯉魚(yú)和鯽魚(yú)消化道粗酶液作用下的酶活變化情況。結(jié)果表明,魚(yú)類消化道所分泌的消化酶對(duì)溶菌酶制品活力的影響因消化道位置不同而不同,總體看來(lái)在中腸處溶菌酶活力

8、損失最大。消化酶對(duì)溶菌酶制品活力的影響也與魚(yú)的種類有關(guān),相比較而言,草魚(yú)消化道對(duì)該溶菌酶制品的分解能力較強(qiáng)。溶菌酶飼料的儲(chǔ)存試驗(yàn)表明,隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng),飼料中的溶菌酶活力逐漸降低。200-400mg/kg組在30d后較為穩(wěn)定;100mg/kg組儲(chǔ)存試驗(yàn)中呈現(xiàn)折線下降;500mg/kg組呈現(xiàn)持續(xù)下降的趨勢(shì)。
　　優(yōu)化后的溶菌酶制品在草魚(yú)飼料中的應(yīng)用研究試驗(yàn)采用單因子試驗(yàn)設(shè)計(jì),選用當(dāng)年草魚(yú)夏花,放于試驗(yàn)池中用基礎(chǔ)飼料養(yǎng)殖30d,使其

9、適應(yīng)試驗(yàn)條件,并消除試驗(yàn)魚(yú)因營(yíng)養(yǎng)和環(huán)境造成的差異。在基礎(chǔ)飼料中分別添加溶菌酶制品0(對(duì)照)、100、200、300、400和500mg/kg,每組設(shè)置5個(gè)重復(fù),飼喂草魚(yú)(6.93±0.27g)60d。通過(guò)生長(zhǎng)性能和抗感染能力兩個(gè)方面研究溶菌酶的效果,并確定適宜用量。試驗(yàn)結(jié)果表明,試驗(yàn)45天時(shí),試驗(yàn)組的草魚(yú)特定生長(zhǎng)率顯著低于對(duì)照組,60天時(shí),100-300mg/kg組的草魚(yú)特定生長(zhǎng)率與對(duì)照組差異不顯著,400mg/kg組和500mg/kg

10、組顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。飼料中溶菌酶含量對(duì)草魚(yú)的飼料系數(shù)的影響呈現(xiàn)先降低再升高的趨勢(shì),200mg/kg組飼料系數(shù)最低。通過(guò)腹腔注射的方法對(duì)草魚(yú)進(jìn)行嗜水氣單胞菌攻毒,結(jié)果表明,200-500mg/kg組的草魚(yú)死亡率顯著低于對(duì)照組和100mg/kg組(P<0.05)。飼用溶菌酶對(duì)草魚(yú)內(nèi)源免疫酶活性和內(nèi)源消化酶活性有一定的刺激作用。抑菌試驗(yàn)表明,該溶菌酶制品對(duì)常見(jiàn)革蘭氏陰性菌嗜水氣單孢菌、哈維氏弧菌、溶藻弧菌和副溶血弧菌有明顯的抑菌