采用自制培養(yǎng)基培養(yǎng)奶牛乳腺上皮細胞可行性研究.pdf

1、該研究在建立了奶牛乳腺上皮細胞體外培養(yǎng)方法的基礎上，研究了自制培養(yǎng)基對奶牛乳腺上皮細胞生物學功能的影響，分別從細胞生長曲線、細胞增殖能力、酪蛋白基因表達及酪蛋白合成方面進行了初步探討。該研究的目的旨在驗證自制培養(yǎng)基是否會對奶牛乳腺上皮細胞的生物學功能造成負面的影響，為下一步試驗奠定基礎。主要研究內容與結果如下：
　?。?）采用酶消化和乳汁分離法分別對乳腺上皮細胞進行原代培養(yǎng)，根據(jù)成纖維細胞和乳腺上皮細胞對胰蛋白酶的敏感性不同對原代

2、培養(yǎng)的乳腺上皮細胞進行純化，并進行傳代、凍存與復蘇，對得到的細胞進行形態(tài)學、生長特性、免疫組織化學鑒定。結果顯示：分離得到的細胞培養(yǎng)后呈鵝卵石鋪路石樣，細胞之間連接緊密且界限清晰，單層生長；細胞生長曲線呈S形，具有明顯的潛伏期、指數(shù)生長期、平臺期，細胞于第3d進入指數(shù)生長期于第7d進入平臺期，符合一般的細胞生長規(guī)律；CK-18（細胞角蛋白18）的免疫組化鑒定結果呈現(xiàn)出強陽性，說明分離得到的細胞屬典型的上皮細胞。
　?。?）研究了自

3、制培養(yǎng)基對乳腺上皮細胞生物學功能的影響。試驗采用完全隨機試驗設計，對照組為 DMEM/F12培養(yǎng)基，試驗組為自制培養(yǎng)基。每個處理均設三個重復，每個重復三個平行。試驗結果如下：使用自制培養(yǎng)基的乳腺上皮細胞指數(shù)生長期的細胞活力要明顯弱于DMEM/F12培養(yǎng)基，但是在延遲期（接種48h）內細胞的增值活力并不弱于DMEM/F12培養(yǎng)基；自制培養(yǎng)基在接種后48h內對乳腺上皮細胞的增殖活力要顯著高于（P<0.0001）DMEM/F12培養(yǎng)基；與DM