擬南芥青枯病抗性基因RRS1的煙草同源性的研究.pdf

1、本研究旨在篩選煙草種質抗青枯病基因RRS1。2008年、2009年和2011年開展了選取來自國內外81個煙草品種為材料的大田青枯病病害指數(shù)調查及RRS1基因9對SSR特異引物的篩選工作；通過9對引物及81個煙草種質的篩選，目前已鑒定出引物6F-6R(5'ATGAGAAAGAGGCTCGTCAA3'and5'ACCACAACCCTCAAGCAGTT3')能夠有效地篩選種質，共篩選出3個煙草種質(G28，K346，LMAFC34)含有RRS

2、1特異性擴增序列；預期針對引物(6R-6F)擴增的3個煙草種質材料的特異性序列進行測序并和RRS1基因的序列進行同源性比對，并對煙草種質資源進行同源性評價。研究的主要結果如下：
　　 1、煙草種質中至今沒有報道過可直接利用的抗青枯病基因，擬南芥中克隆的RRS1基因是被發(fā)現(xiàn)的第一個青枯病抗性基因，目前只限在擬南芥中研究沒有在其它作物中篩選同類基因，本研究旨在進行煙草種質抗青枯病基因RRS1的篩選研究，期望在煙草種質中尋找出具有類似

3、抗性基因的品種，最終實現(xiàn)品種改良提高品種抗性。
　　 2、分別于2008年、2009年在安徽省皖南煙區(qū)煙草青枯病病圃，選擇國內外文獻中標注為抗青枯病的部分煙草種質及安徽省尚未鑒定抗性的地方種質共138份，田間采用高密度栽培方式、隨機區(qū)組設計，鑒定其青枯病抗性。本試驗中沒有免疫煙草種Coker298、K346、NC86、Coker86、K399、LMAFC34、歙圓四號為高抗品種；G28等13份種質為中抗品種；其它種質在中感以上。

4、依據(jù)大田病情指數(shù)變化對煙草種質抗性分為四類：感病型、慢病型、抗病型及免疫型，并對其進行數(shù)據(jù)規(guī)范。
　　 3、本研究采用特異引物中在擴增80個煙草種質后差異篩選出3份煙草種質(G28、K346、LMAFC34)，PCR擴增具有與陽性對照擬南芥同等分子量大小的特異帶型，能夠有效地篩選抗青枯病種質。利用PCR特異擴增鑒別種質不受大田環(huán)境和時間的限制，可以多重復驗證結果的可靠性。
　　 4.依據(jù)混合群體分組分析法(BSA)建立抗