哈維氏弧菌外膜蛋白基因ompU的克隆表達(dá)、DNA疫苗構(gòu)建及對大菱鲆免疫效果探究.pdf

1、哈維氏弧菌是一種革蘭氏陰性菌,被認(rèn)為是引起發(fā)光弧菌病的主要病原性弧菌。發(fā)光性弧菌病已經(jīng)影響到大范圍的海洋無脊椎動物,已有報道稱很多國家養(yǎng)殖對蝦的大量死亡是受到了哈維氏弧菌的感染引起的。哈維氏弧菌也與中國和南亞各國的魚類細(xì)菌性疾病有關(guān),其廣泛的致病性和給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成的嚴(yán)重影響引起了世界范圍的廣泛關(guān)注。
　　 本研究的主要目的是從致病性哈維氏弧菌SF-1中克隆和表達(dá)一種外膜蛋白OmpU,探究其作為疫苗候選基因在大菱鲆對抗哈維氏弧菌

2、感染時的免疫效果。
　　 在本實(shí)驗(yàn)中,一種外膜蛋白基因ompU從致病性哈維氏弧菌SF-1基因組中克隆,并在大腸桿菌原核表達(dá)系統(tǒng)中得到表達(dá)。ompU基因編碼一個35kDa的蛋白,此蛋白可以通過Ni親和柱親和層析的方法得到純化。將ompU基因插入到真核表達(dá)質(zhì)粒載體pEGFP-N1中,制備成DNA疫苗。通過RT-PCR檢測證實(shí)pEGFP-N1／ompU可以在大菱鲆肌肉組織內(nèi)得到表達(dá)。純化的外膜蛋白OmpU和重組質(zhì)粒pEGFP-N1／o

3、mpU通過肌肉注射的方式分別對大菱鲆進(jìn)行免疫,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,OmpU蛋白疫苗在對抗致病性哈維氏弧菌SF-1中可以達(dá)到很好的保護(hù)效果,實(shí)驗(yàn)組大菱鲆在攻毒試驗(yàn)中的免疫保護(hù)率達(dá)到100％,DNA疫苗pEGFP-N1／ompU免疫組大菱鲆也起到了很好的保護(hù)效果,免疫保護(hù)率達(dá)到51.4％。通過間接ELISA可以檢測到免疫組大菱鲆體內(nèi)的特異性抗體反應(yīng)。
　　 綜上所述,我們從致病性哈維氏弧菌SF-1基因組中克隆和表達(dá)了一種外膜蛋白基因omp