河蚌多糖對(duì)羅非魚腸道黏膜免疫和菌群的影響.pdf

1、本文以羅非魚的腸道為研究對(duì)象，選用體長(zhǎng)10cm左右、初體重(75.0±5.0)g健康羅非魚，隨機(jī)分成4組，每組20尾，分別在每公斤基礎(chǔ)飼料中添加0.05％、0.1％、0.15％的河蚌多糖，飼喂一個(gè)月，研究河蚌多糖對(duì)羅非魚腸道黏膜形態(tài)和腸道相關(guān)免疫細(xì)胞的影響、河蚌多糖對(duì)腸道溶菌酶活性的影響和河蚌多糖對(duì)羅非魚腸道微生態(tài)的影響，旨在探討河蚌多糖對(duì)羅非魚腸道黏膜免疫的作用。本論文分三個(gè)試驗(yàn)進(jìn)行。 試驗(yàn)一：研究河蚌多糖對(duì)羅非魚腸黏膜結(jié)構(gòu)和

2、腸道相關(guān)免疫細(xì)胞的影響。試驗(yàn)采用傳統(tǒng)的制作組織學(xué)切片的方法，應(yīng)用顯微鏡進(jìn)行觀察。 采用HE染色法檢測(cè)羅非魚腸絨毛形態(tài)變化。結(jié)果表明：添加0.05％河蚌多糖組的前腸腸絨毛長(zhǎng)度顯著長(zhǎng)于對(duì)照組的前腸腸絨毛長(zhǎng)度，添加0.1％河蚌多糖組的前腸腸絨毛長(zhǎng)度與對(duì)照組相比增加了29.61％，差異極顯著(P<0.01)。對(duì)于中腸和后腸來說，添加了0.1％河蚌多糖的試驗(yàn)組，腸絨毛長(zhǎng)度分別較對(duì)照組都有顯著的增長(zhǎng)(P<0.05)；羅非魚的腸絨毛寬度的變化

3、相對(duì)于對(duì)照組來說差異不明顯；在前腸部位，添加0.1％河蚌多糖的試驗(yàn)組肌層厚度與對(duì)照組相比，顯著增加了18.83％(P<0.05)。后腸部位，添加不同劑量的多糖組和對(duì)照組相比，肌層厚度均有不同程度的增厚。 采用阿利新蘭醋酸染色檢測(cè)羅非魚前腸、中腸、后腸杯狀細(xì)胞的數(shù)量變化，探討不同濃度的河蚌多糖對(duì)羅非魚腸道內(nèi)杯狀細(xì)胞數(shù)量的影響。結(jié)果表明：添加0.05％和0.1％的河蚌多糖對(duì)羅非魚的前腸和中腸的杯狀細(xì)胞都有顯著的影響(P<0.01)。

4、 采用奧新蘭-沙黃染色法檢測(cè)羅非魚前腸、中腸和后腸肥大細(xì)胞數(shù)量變化，探討不同水平的河蚌多糖對(duì)羅非魚腸道內(nèi)肥大細(xì)胞數(shù)量的影響。結(jié)果顯示：不同水平的河蚌多糖對(duì)羅非魚腸道肥大細(xì)胞數(shù)量的影響不大，但有增加的趨勢(shì)。 采用HE染色法檢測(cè)羅非魚前腸、中腸、后腸中腸上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞數(shù)量變化，探討不同水平的河蚌多糖對(duì)羅非魚腸道內(nèi)淋巴細(xì)胞的數(shù)量的影響。結(jié)果表明：添加0.05％多糖組和添加0.1％多糖組對(duì)前腸和中腸的對(duì)照組來說，腸道上皮內(nèi)淋巴細(xì)

5、胞數(shù)量都有顯著的增加。 試驗(yàn)二：研究河蚌多糖對(duì)羅非魚腸道中溶菌酶的影響。飼喂結(jié)束后，每池取4尾魚。無菌解剖，取出相應(yīng)的魚的腸道組織，然后根據(jù)溶菌酶試劑盒的方法操作檢測(cè)羅非魚前腸、中腸、后腸中溶菌酶的活性。結(jié)果表明，在飼料中添加0.1％的河蚌多糖能顯著增加羅非魚前腸和中腸中溶菌酶的活性。 試驗(yàn)三：研究河蚌多糖對(duì)羅非魚腸道微生態(tài)的影響。采用非培養(yǎng)法，直接提取腸道內(nèi)細(xì)菌的總DNA，然后采用16s rDNA的PCR-DGGE的技