山東省禽源大腸桿菌血清型鑒定及喹諾酮類藥物耐藥性研究.pdf

1、在臨床獸醫(yī)上,大腸桿菌病造成的危害十分嚴(yán)重,特別是禽大腸桿菌病,由于其臨床癥狀復(fù)雜、病理特征多樣,一直是困擾養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的常見病。近年來,集約化養(yǎng)殖使主要疾病得到基本控制后,大腸桿菌病呈明顯上升趨勢(shì),已成為養(yǎng)殖業(yè)主要細(xì)菌性疾病之一。
　　 1、2003—2009年山東省禽源大腸桿菌血清型鑒定
　　 2003年以來,自山東省不同地區(qū)的規(guī)?；B(yǎng)雞場(chǎng)和養(yǎng)鴨場(chǎng)具有典型大腸桿菌病臨床癥狀和病理變化的病禽中分離鑒定出214株大腸桿菌,

2、應(yīng)用微量平板凝集試驗(yàn)共鑒定出200株分離菌的O抗原血清型,分別屬于14個(gè)血清型,其中O78、O88、O2、O35和O18為主要優(yōu)勢(shì)血清型,占總分離菌株的82.7％,而O3血清型在我國(guó)禽類中還未見報(bào)道過。
　　 2、禽源大腸桿菌普通藥敏試驗(yàn)及最低抑菌濃度(MIC)測(cè)定
　　 采用WHO推薦的紙片法對(duì)分離鑒定的214株大腸桿菌進(jìn)行6種喹諾酮類藥物敏感性實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明:分離菌存在廣泛的耐藥性,49.5％的菌株對(duì)6種藥物均有耐藥

3、性。6種藥物中最為敏感的是左氧氟沙星,耐藥率為71.5％,而培氟沙星最不敏感,耐藥率為92.1％,環(huán)丙沙星、諾氟沙星、氧氟沙星及洛美沙星的耐藥率分別為為77.1％、79.0％、81.8％和88.8％。鴨源大腸桿菌耐藥率(60.4％)要明顯高于雞源大腸桿菌的耐藥率(41.5％)。從2003年到2009年大腸桿菌耐藥率逐年上升,而且不同地區(qū)敏感藥物差異較大,各地區(qū)均有敏感藥物和耐受藥物。
　　 采用CLSI推薦的微量肉湯稀釋法對(duì)21

4、4株大腸桿菌進(jìn)行了乳酸環(huán)丙沙星和乳酸諾氟沙星的最低抑菌濃度(MIC)的測(cè)定,結(jié)果表明乳酸環(huán)丙沙星耐藥率為87.4％,乳酸諾氟沙星耐藥率為89.3％。
　　 3、喹諾酮類耐藥基因克隆測(cè)序及規(guī)律的分析
　　 根據(jù)乳酸諾氟沙星和乳酸環(huán)丙沙星這兩種藥物的MIC,選取不同抑菌濃度的47株大腸桿菌,對(duì)其基因組上耐藥基因gyrA、gyrB、parC和parE進(jìn)行了PCR擴(kuò)增及測(cè)序分析。與GenBank公布的序列進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)氨基酸差異

5、:(1)gyrA基因83位Ser突變?yōu)長(zhǎng)eu,87位Asp突變?yōu)锳sn；(2)gyrB基因491基因Ser突變?yōu)锳sn,但沒發(fā)現(xiàn)突變規(guī)律；(3)parC80位Ser突變?yōu)镮le,84位點(diǎn)Glu→Gly；(4)parE突變較少見,僅在458位Ser突變?yōu)锳la和Thr。gyrA基因突變是對(duì)喹諾酮類藥物耐藥的主要因?yàn)?是首要靶位點(diǎn)；parC基因突變可能在對(duì)喹諾酮抗菌藥物高水平耐藥的形成中起輔助性作用,是第二靶位點(diǎn)；gyrB基因單突變對(duì)喹諾酮