殼聚糖對斷奶仔豬免疫功能的影響及其調節(jié)機制的研究.pdf

1、本論文共分6個試驗研究了殼聚糖對斷奶仔豬免疫功能的影響及其免疫調節(jié)的機制。試驗1～4利用體內法，采用單因子隨機區(qū)組設計，將180頭28日齡斷奶的、體型外貌相近的、健康的（杜×大×長）三元雜交仔豬隨機分為5個日糧處理組，每個處理組6個重復，每個重復（欄）6頭（3欄公豬、3欄母豬）。5種試驗日糧是在基礎日糧中分別添加0、100、500、1000和2000 mg/kg的殼聚糖配制而成。試驗期為28天，在試驗期間仔豬自由采食、自由飲水。試驗1研

2、究了殼聚糖對斷奶仔豬體液免疫和細胞免疫功能的影響。試驗2研究了殼聚糖對斷奶仔豬應激激素水平及抗氧化酶活力的影響，進而從抗應激和抗氧化的角度來探討殼聚糖對仔豬免疫功能的影響。試驗3從一氧化氮(NO)途徑研究了殼聚糖對斷奶仔豬免疫功能的影響及其分子機制。試驗4從花生四烯酸(AA)途徑研究了殼聚糖對斷奶仔豬免疫功能的影響及其分子機制。試驗5和6利用體外法，進一步研究不同濃度殼聚糖培養(yǎng)液對斷奶仔豬外周血單個核細胞(PBMCs)中NO（試驗5）和

3、AA（試驗6）途徑相關指標的影響及其分子機制。
　　試驗結果如下:
　　1.日糧中添加殼聚糖可顯著提高斷奶仔豬血清中免疫球蛋白G(IgG)的濃度和特異性卵清白蛋白抗體(OVA-IgG)的含量（P＜0.05）。隨著殼聚糖的添加水平增加，仔豬回腸和空腸黏膜表面分泌型免疫球蛋白A(sIgA)的濃度呈現(xiàn)顯著的一次或二次劑量增加效應(P＜0.05)。殼聚糖顯著提高了斷奶仔豬血清中自介素1(IL-1)、白介素2（IL-2）和腫瘤壞死因子

4、-α(TNF-α)的濃度(P＜0.05)。此外，殼聚糖也可顯著降低血清中可溶性CD4(sCD4)和可溶性CD8(sCD8)的濃度(P＜0.05)。這表明日糧中添加殼聚糖可顯著地影響斷奶仔豬體液免疫和細胞免疫功能。
　　2.殼聚糖可顯著降低仔豬血清中促腎上腺皮質激素(ACTH)和皮質醇(COR)的濃度，并呈現(xiàn)顯著的一次或二次劑量依賴關系(P＜0.05)。隨著殼聚糖添加量的增加，仔豬血清中谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧

5、化酶(SOD)和過氧化氫酶(CAT)的活力呈現(xiàn)顯著的一次或二次劑量增加效應(P＜0.05)。提示殼聚糖可能通過緩減仔豬斷奶應激、提高仔豬抗氧化能力，進而促進斷奶仔豬的免疫功能。
　　3.殼聚糖可顯著提高斷奶仔豬血清中NO的濃度和誘導型一氧化氮合酶(iNOS)的活力，也可顯著提高小腸中iNOS mRNA的相對表達量，并呈現(xiàn)一次或二次劑量依賴關系（P＜0.05）。這表明殼聚糖可能通過提高iNOS mRNA的卡相對表達量和酶活力來提高N

6、O的濃度進而發(fā)揮其對機體的免疫調節(jié)功能。殼聚糖的添加水平為500～1000mg/kg時，血清NO濃度、iNOS的活力及小腸中iNOS mRNA的相對表達量較高;當日糧中殼聚糖添加量提高為2000 mg/kg時，上述指標的值均呈不同程度的降低，這表明殼聚糖對其影響呈現(xiàn)劑量依賴效應。
　　4.日糧添加殼聚糖顯著提高了斷奶仔豬血清中AA、前列腺素E2(PGE2)和白三烯B4(LTB4)的濃度（P＜0.05），并顯著提高了仔豬血清中胞漿型

7、磷脂酶A2(cPLA2)、環(huán)氧合酶(COX-2)和脂氧化酶(5-LOX)的活性(P＜0.05)。此外，殼聚糖可顯著提高斷奶仔豬小腸中cPLA2、COX-2和5-LOX的mRNA相對表達量(P＜0.05)。這表明殼聚糖可能通過提高斷奶仔豬cPLA2、COX-2和5-LOX的酶活力及其mRNA相對表達量來提高仔豬血清中AA、PGE2和LTB4的濃度，進而發(fā)揮其對斷奶仔豬AA途徑免疫調節(jié)功能。隨著日糧中殼聚糖添加水平的升高，上述各指標的值呈現(xiàn)

8、顯著的二次曲線增加效應，其中以添加量為500～1000 mg/kg時效果較好，但添加到2000 mg/kg時其促進效果有降低趨勢，這表明殼聚糖對其影響存在劑量依賴關系。
　　5.在培養(yǎng)基中添加殼聚糖可以顯著提高斷奶仔豬PBMCs中NO的濃度、iNOS的酶活力及其mRNA相對表達量(P＜0.05)。為了確定上述試驗中NO的升高是否主要由于iNOS活性的升高所導致，本試驗在培養(yǎng)基中添加了iNOS的特異性抑制劑1400w，結果發(fā)現(xiàn)，添加

9、1400w顯著抑制了NO濃度和iNOS活力，的升高（P＜0.05）。這表明殼聚糖可能是通過提高斷奶仔豬PBMCs中iNOS活力及其mRNA相對表達量進而促進了PBMCs中NO的生成。另外，殼聚糖顯著地抑制了由脂多糖(LPS)刺激的PBMCs中NO濃度、iNOS活力及其mRNA相對表達量的升高。這表明殼聚糖對斷奶仔豬PBMCs中NO濃度、iNOS活力及其mRNA相對表達量具有雙向調節(jié)功能。
　　6.隨著殼聚糖添加量的增加，PBMCs

10、培養(yǎng)液中cPLA2、COX-2和5-LOX的活力及AA、PGE2和LTB4濃度呈顯著的二次曲線升高（P＜0.05）;PBMCs中cPLA2、COX-2和5-LOX mRNA的相對表達量與殼聚糖添加量之間也呈現(xiàn)顯著的二次劑量增加效應（P＜0.05）。另外，當殼聚糖的添加量為80或160μg/mL時上述所有指標的值均較高，然而殼聚糖的添加量增加到320μg/mL時上述各指標的值有不同程度的降低。結果提示，殼聚糖能夠調節(jié)斷奶仔豬PBMCs中A