褐飛虱CYP4、6家族P450基因的克隆及表達研究.pdf

1、褐飛虱(Nilaparvata lugens Stal.)是水稻的主要害蟲之一，其發(fā)生與危害嚴重影響稻谷的產量。褐飛虱能很快適應水稻新品種，往往導致抗性水稻品種的推廣和應用受到制約；此外，由于褐飛虱防治長期以化學防治為主，使褐飛虱對許多農藥產生了抗性。昆蟲的CYP4、CYP6家族的P450常被報道受植物次生物質和殺蟲劑的誘導，并參與相應底物的代謝。為深入研究褐飛虱細胞色素P450的解毒機制，我們開展了有關褐飛虱細胞色素P450的研究工作

2、，現(xiàn)總結如下：
　　 1.褐飛虱P450基因的克隆和序列分析
　　 采用簡并RT-PCR技術與RACE技術相結合，克隆了褐飛虱的三個P450cDNA全長：CYP4C62、CYP4CE1、CYP6CS1。其中CYP4C62全長為2146bp，有48bp的5’端非翻譯區(qū)，535bp的3’端非翻譯區(qū)，編碼520個氨基酸的多肽。CYP4CE1全長為2160bp，有372bp的5’端非翻譯區(qū)，160bp的3’端非翻譯區(qū)，編碼541

3、個氨基酸的多肽。CYP6CS1全長為2700bp，有89bp的5’端非翻譯區(qū)，1063bp的3’端非翻譯區(qū)，編碼515個氨基酸的多肽。三個新的P450基因的氨基酸序列比對發(fā)現(xiàn)，它們都含有昆蟲P450基因的保守特征序列如螺旋K的保守序列W---R，血紅素結合區(qū)F--G-R-C-G/A等。氨基酸序列相似性分析表明，CYP4C62與CYP4CE1有38％的同源性。CYP6CS1與黑鳳蝶的CYP681具有較高的同源性。
　　 2.取食抗

4、性水稻褐飛虱的mRNA表達量的比較
　　 以B-actin為參照基因，采用熒光實時定量PCR技術比較褐飛虱CYP4C62、CYP4CE1、CYP6CS1三個基因在取食感蟲水稻與抗性水稻后的表達量差異。結果表明，取食抗性水稻后，CYP4CE1有1.8倍的過量表達，而CYP6CS1有接近70倍的過量表達，CYP4C62則沒有過量表達。由此推斷CYP4CE1、CYP6CS1可能參與了水稻次生物質的代謝。
　　 3.褐飛虱P45