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文檔簡介
1、硒甲基轉(zhuǎn)移酶(SMT)能將硒代半胱氨酸特異性的甲基化成為非蛋白質(zhì)氨基酸-硒甲基硒代半胱氨酸，并且在植物高效的抵抗硒毒性影響中起關(guān)鍵作用。因為硒與硫具有相似的化學(xué)特征和相同的代謝途徑，所以硒與硫存在競爭抑制并且其相應(yīng)代謝產(chǎn)物之間存在互作關(guān)系，青花菜既具有富含含硫化合物特性，同時也具有富硒特性，其重要活性成分-蘿卜硫素(Sulforaphane)是由含硫氨基酸(甲硫氨酸)合成而來，由于硒在代謝過程中取代了硫的位置，硒代謝途徑產(chǎn)生的硒甲硫氨酸
2、取代硫代謝途徑產(chǎn)生的甲硫氨酸，從而影響到Sulforaphane的代謝合成。 為了研究SMT基因?qū)μ}卜硫素的調(diào)控作用，我們對SMT基因進(jìn)行了克隆和超表達(dá)，并獲得了以下結(jié)果： 1.采用RT-PCR方法從青花菜幼葉中克隆出硒甲基轉(zhuǎn)移酶(Selenocysteine methyltransferase，SMI)基因的編碼序列，長度為1041 bp。同源性比較結(jié)果表明：與GenBank上已報道的SMT基因(GenBank No.
3、AY817737)同源性達(dá)99％。 2.構(gòu)建了硒甲基轉(zhuǎn)移酶基因的超表達(dá)和RaNAi載體。以pBI121質(zhì)粒為基礎(chǔ)，構(gòu)建了由CaMV35S啟動子調(diào)控的SMT基因的超表達(dá)載體pBI121-SMT；同時還克隆出SMT基因的一段473 bp高保守序列SP，并把它們正反向插入到載體pJM007的內(nèi)含子兩側(cè)，形成一個SP(RNAi)元件，經(jīng)PstⅠ酶切并克隆到植物表達(dá)載體pCAMBIA1301，形成pCAMBIAl301+SP(RNAi)載
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