藥品無(wú)菌檢查

1、藥品無(wú)菌檢查及相關(guān)知識(shí),吉林省藥品檢驗(yàn)所微生物室,主要內(nèi)容,1、藥品無(wú)菌檢查法基礎(chǔ)2、2015年版藥典無(wú)菌檢查法的變動(dòng)3、潔凈實(shí)驗(yàn)室微生物的監(jiān)測(cè)和控制4、菌種的管理5、二級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室,藥品無(wú)菌檢查法,定義及特點(diǎn)培養(yǎng)基、沖洗液方法學(xué)驗(yàn)證供試品的無(wú)菌檢查無(wú)菌檢查的要點(diǎn),藥品無(wú)菌檢查法,無(wú)菌檢查法系用于檢查藥典要求無(wú)菌的藥品、生物制品、醫(yī)療器具、原料、輔料、及其他品種是否無(wú)菌的一種方法。若供試品符合無(wú)菌檢查法的規(guī)定,僅表

2、明了供試品在該檢驗(yàn)條件下未發(fā)現(xiàn)微生物污染。也并不表示所有的產(chǎn)品都是無(wú)菌的。反之，當(dāng)供試品中檢出微生物污染，則可以認(rèn)為批產(chǎn)品的微生物污染風(fēng)險(xiǎn)相當(dāng)高。,藥品無(wú)菌檢查法,無(wú)菌制劑比非無(wú)菌制劑存在更高的風(fēng)險(xiǎn)一系列的藥品不良事件2006年的“欣弗事件”---安徽華源生產(chǎn)的“克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液”引起了11人死亡，93人感染，企業(yè)倒閉，總經(jīng)理自殺。未按批準(zhǔn)的工藝參數(shù)滅菌，降低滅菌溫度、縮短滅菌時(shí)間，增加滅菌柜裝載量，影響了滅菌效果，經(jīng)中

3、檢所檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)無(wú)菌不合格。2012年10月，美國(guó)新英格蘭合成制藥中心生產(chǎn)的注射用類(lèi)固醇霉菌污染，造成數(shù)百人感染真菌腦炎，至年底統(tǒng)計(jì)死亡39人。這些事故促使無(wú)菌制劑GMP監(jiān)管的進(jìn)步，同時(shí)也對(duì)無(wú)菌檢驗(yàn)提出更高更嚴(yán)的要求。,藥品無(wú)菌檢查法,特點(diǎn)無(wú)菌檢驗(yàn)結(jié)論為一次性，藥典規(guī)定為不得復(fù)試，為什么不得復(fù)試，菌落的分布具有不均勻性，檢驗(yàn)過(guò)程是破壞性的，不具有重復(fù)性。---------------對(duì)操作過(guò)程的要求非常高。過(guò)程的控制------

4、----1、環(huán)境控制；2、操作影響，人員、物流是否引入外源性污染？,無(wú)菌性檢查,靈敏度檢查,SOP操作,有效的結(jié)果,有效的方法,環(huán)境保證,培養(yǎng)基保證,方法學(xué)驗(yàn)證,過(guò)程控制,結(jié)果判斷,可靠的結(jié)論,,藥品無(wú)菌檢查法,培養(yǎng)基配制后采用驗(yàn)證合格的滅菌程序滅菌。什么是驗(yàn)證合格的？保存條件：2-25℃、避光，非密閉容器在3周內(nèi)使用，密閉容器一般在1年內(nèi)使用。流乙醇酸鹽流體：供試品接種前，培養(yǎng)基氧化層不超過(guò)深度的1/5，否則100℃水浴加熱至

5、粉紅色消失（不超過(guò)20分鐘），只能加熱一次，培養(yǎng)結(jié)束后氧化層不超過(guò)1/2,藥品無(wú)菌檢查法,藥品無(wú)菌檢查法,培養(yǎng)基適用性檢查無(wú)菌性—每批次培養(yǎng)基取不少于5瓶（支），培養(yǎng)14天，應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。靈敏度 6種菌（<100cfu） 金、銅綠、生孢---------流乙醇酸鹽流體 7支，12ml/支，每種菌接種2支，陰性一支， 枯草、白念、黑曲--

6、--------胰酪大豆胨液體 7支，每種菌接種2支，9ml/ 支，一支陰性 流乙醇酸鹽流體培養(yǎng)3天，胰酪大豆胨液體 5天， 空白對(duì)照管應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)，若加菌的培養(yǎng)基管均生長(zhǎng)良好，判斷該培養(yǎng)基的靈敏度符合規(guī)定,藥品無(wú)菌檢查法,沖洗液0.1%蛋白胨水溶液pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液可選用其他經(jīng)驗(yàn)證過(guò)的適宜的溶液,藥品無(wú)菌檢查法,方法適用性試驗(yàn)證明所采用的方法適合于該產(chǎn)品的無(wú)菌檢查。若檢驗(yàn)程序或產(chǎn)品發(fā)生變化可能影響檢驗(yàn)結(jié)

7、果時(shí)，應(yīng)重新進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)。菌種：金葡、大腸、枯草、生孢、白念、黑曲方法：1、薄膜過(guò)濾 2、直接接種,藥品無(wú)菌檢查法,薄膜過(guò)濾法試驗(yàn)組：取每種培養(yǎng)基規(guī)定接種的供試品總量按薄膜過(guò)濾法過(guò)濾，沖洗，在最后一次沖洗液中加入小于100cfu的試驗(yàn)菌，過(guò)濾。將培養(yǎng)基加至濾筒內(nèi)。對(duì)照組：另取一裝有同體積培養(yǎng)基的容器，加入等量試驗(yàn)菌，培養(yǎng)時(shí)間不得超過(guò)5天。,藥品無(wú)菌檢查法,直接接種法 取流乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（

8、不少于15ml）6管，分別加入金葡、大腸、生孢各2管，其中一管接入供試品，另一管作為對(duì)照，TSB（不少于10ml）6管，分別加入枯草、白念、黑曲各2管，其中一管加入供試品，另一管作為對(duì)照，培養(yǎng)時(shí)間不得超過(guò)5天。結(jié)果判斷：與對(duì)照管比較，試驗(yàn)組的試驗(yàn)菌生長(zhǎng)良好，則說(shuō)明供試品的該檢驗(yàn)量在該檢驗(yàn)條件下無(wú)抑菌作用或抑菌作用可以忽略不計(jì)； 如含供試品的任一容器中的試驗(yàn)菌生長(zhǎng)微弱、緩慢或不生長(zhǎng)----供試品的該檢驗(yàn)量在該檢驗(yàn)條件下有抑菌

9、作用-----增加沖洗量、培養(yǎng)基用量、中和劑或滅活劑、更換濾膜品種，重新進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)。,藥品無(wú)菌檢查法,供試品的無(wú)菌檢查 檢驗(yàn)數(shù)量：一次試驗(yàn)所用供試品最小包裝容器的數(shù)量 出廠(chǎng)產(chǎn)品按表1，上市產(chǎn)品監(jiān)督檢驗(yàn)按表2 最少檢驗(yàn)數(shù)量不包括陽(yáng)性對(duì)照用的。 檢驗(yàn)量：按表3，采用薄膜過(guò)濾法時(shí)，只要供試品

10、特性允 許，應(yīng)將所有容器內(nèi)的全部?jī)?nèi)容物過(guò)濾。,藥品無(wú)菌檢查法,1、薄膜過(guò)濾法 封閉式薄膜過(guò)濾器只要供試品性狀允許，應(yīng)采用薄膜過(guò)濾抗生素樣品選用低吸附的濾膜水溶性供試品過(guò)濾前先將少量沖洗液過(guò)濾以潤(rùn)濕濾膜油類(lèi)供試品的濾膜和濾器在使用前應(yīng)充分干燥沖洗量一次一般為100ml，總沖洗量不得超過(guò)1000ml，以免膜上的微生物受損?？倹_洗量特別大時(shí)應(yīng)盡量減小流速。,藥品無(wú)菌檢查法,水溶性的液體--

11、---直接過(guò)濾或混合至含不少于100ml適宜稀釋液的無(wú)菌容器中，混勻，立即過(guò)濾，如供試品有抑菌作用，須沖洗一般不少于三次。水溶性的固體----溶取規(guī)定量，加適宜的稀釋液溶解或按標(biāo)簽復(fù)溶。非水溶性供試品-----直接過(guò)濾，或乳化后（加吐溫80等）立即過(guò)濾，用含0.1-1%吐溫80的沖洗液沖洗，培養(yǎng)基中可加入吐溫80可溶于十四烷酸異丙酯的膏劑和黏性油性供試品-----溶解于適量無(wú)菌十四烷酸異丙酯中，過(guò)濾，加熱仍然沒(méi)法過(guò)濾的，萃取，靜置

12、，取水層過(guò)濾無(wú)菌氣霧劑----在-20℃冷凍1小時(shí)，取出在容器上鉆一小孔釋放拋射劑后再無(wú)菌開(kāi)啟容器，轉(zhuǎn)移至無(wú)菌容器中。裝有藥物的注射器供試品——注意應(yīng)采用適宜的方法進(jìn)行包裝中所配帶的無(wú)菌針頭的無(wú)菌檢查帶有導(dǎo)管的醫(yī)療器具（輸血、輸液袋等）---每個(gè)最小包裝用50-100ml沖洗液分別沖洗內(nèi)壁，過(guò)濾沖洗液。同時(shí)注意應(yīng)采用直接接種法對(duì)配帶的無(wú)菌針頭做無(wú)菌檢查,藥品無(wú)菌檢查法,2、直接接種法培養(yǎng)基的用量符合接種的供試品體積不得大于培養(yǎng)基

13、體積的10%，同時(shí)，流乙醇酸鹽每管裝量不少于15ml，TSB不少于10ml適用于無(wú)法用薄膜過(guò)濾法進(jìn)行無(wú)菌檢查的。,藥品無(wú)菌檢查法,混懸液等非澄清水溶液供試品 取規(guī)定量，等量接種至各管培養(yǎng)基中固體供試品 取規(guī)定量，直接等量接種至各管培養(yǎng)基中，或加入適宜的溶劑溶解，或按標(biāo)簽說(shuō)明復(fù)溶后，取規(guī)定量等量接種至各管培養(yǎng)基中。非水溶性供試品 加入適量的乳化劑及稀釋劑使其乳化再接種，或直接接種至含乳化劑的培養(yǎng)基中敷料供試品 以無(wú)菌

14、操作拆開(kāi)每個(gè)包裝，于不同部位剪取約100mg或1cm*3cm的供試品，等量接種于各管足以浸沒(méi)供試品的適量培養(yǎng)基中。腸線(xiàn)、縫合線(xiàn)等供試品 取最小包裝，無(wú)菌拆開(kāi)包裝，等量接種于各管足以浸沒(méi)供試品的適量培養(yǎng)基中。滅菌醫(yī)用器具供試品 必要時(shí)將其拆散或切成小碎段，等量接種于各管足以浸沒(méi)供試品的適量培養(yǎng)基中。放射性藥品 取供試品1支，等量接種于裝量為7.5ml的流乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和TSB中。每管接種量為0.2ml。,藥品無(wú)

15、菌檢查法,陽(yáng)性對(duì)照 無(wú)抑菌作用及抗革蘭氏陽(yáng)性菌為主的----金葡 抗革蘭氏陰性菌為主的------大腸 抗厭氧菌的------生孢梭 抗真菌的-----白念 陽(yáng)性對(duì)照72小時(shí)內(nèi)生長(zhǎng)良好 陰性對(duì)照 相應(yīng)的溶劑、稀釋液、沖洗液同法操作， 不得有菌生長(zhǎng),藥品無(wú)菌檢查法,培養(yǎng)及觀察液體培養(yǎng)基渾濁 物理變化？化學(xué)變化？生物學(xué)變化？培養(yǎng)14天，逐日觀察并記錄

16、，注意和陽(yáng)性、陰性對(duì)比，培養(yǎng)14天后依然無(wú)法從外觀上判斷有無(wú)微生物生長(zhǎng)，可取該培養(yǎng)液轉(zhuǎn)種至同種新鮮培養(yǎng)基，培養(yǎng)3天，觀察是否再次出現(xiàn)渾濁。,藥品無(wú)菌檢查法,若明顯渾濁------怎么辦？1）立即轉(zhuǎn)接2ml該培養(yǎng)物至相同的培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)；2）取5支凍存管，每管分裝1ml渾濁培養(yǎng)物，-80℃保存；3）取渾濁培養(yǎng)物在TSA平板/血瓊脂上劃線(xiàn)，分離污染微生物；4）如果發(fā)現(xiàn)硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)管變渾濁，還應(yīng)增加血平板劃線(xiàn)，并在厭氧條件下

17、培養(yǎng)分離厭氧菌。由平板分離到的菌落應(yīng)進(jìn)一步鑒定，并逐一保藏。,藥品無(wú)菌檢查法,結(jié)果判斷陽(yáng)性對(duì)照生長(zhǎng)良好，陰性不得有菌，否則試驗(yàn)無(wú)效若供試品澄清，或雖然渾濁但經(jīng)確證無(wú)菌生長(zhǎng)，判供試品符合規(guī)定若任何一管渾濁并確證有菌生長(zhǎng)，判不符合規(guī)定，除非能充分證明試驗(yàn)結(jié)果無(wú)效，符合下面至少一個(gè)條件：1、無(wú)菌檢查試驗(yàn)所用的設(shè)備及環(huán)境的微生物監(jiān)控結(jié)果不符合無(wú)菌檢查法的要求2、回顧試驗(yàn)過(guò)程，發(fā)現(xiàn)有可能引起微生物污染的因素3、供試品管中生長(zhǎng)的微生物經(jīng)

18、鑒定后，確證是因無(wú)菌試驗(yàn)中所使用的物品和（或）無(wú)菌操作技術(shù)不當(dāng)引起的。 若確認(rèn)無(wú)效，應(yīng)重試。,藥品無(wú)菌檢查法,要點(diǎn)一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的SOP，物料進(jìn)場(chǎng)，外圍消毒劑消毒表面，拆除外包裝，潔凈傳遞，風(fēng)淋、紫外照射，過(guò)氧化氫滅菌等，由低級(jí)別向高級(jí)別遞進(jìn)，最后到達(dá)A級(jí)核心區(qū)人員進(jìn)場(chǎng)，合理的更衣程序，A/B級(jí)：應(yīng)用頭罩將所有頭發(fā)以及胡須等相關(guān)部位全部遮蓋，，必要時(shí)戴防護(hù)目鏡。應(yīng)戴經(jīng)滅菌且無(wú)顆粒物（如滑石粉）散發(fā)的橡膠或塑料手套，穿經(jīng)滅菌或消

19、毒的腳套，褲腿應(yīng)塞進(jìn)腳套內(nèi)，袖口應(yīng)塞進(jìn)手套內(nèi)。工作服應(yīng)為滅菌的連體工作服，不脫落纖維或微粒，并能滯留身體散發(fā)的微粒。無(wú)菌操作技術(shù)，動(dòng)作熟練，關(guān)鍵點(diǎn)的控制實(shí)驗(yàn)過(guò)程的監(jiān)控：環(huán)境菌，表面微生物，手部微生物，對(duì)環(huán)境菌進(jìn)行鑒定，建立檔案，以便OOS調(diào)查，進(jìn)行溯源。,2015年版藥典的變化,主要修訂點(diǎn)改良馬丁培養(yǎng)基修訂為胰酪大豆胨肉湯培養(yǎng)基（TSB）無(wú)菌檢查實(shí)驗(yàn)條件由“萬(wàn)級(jí)下的局部百級(jí)”修訂為“B+A”三部藥典的統(tǒng)一,2015年版藥典的變

20、化,培養(yǎng)基的變化,2015年版藥典的變化,意義1、與國(guó)際接軌USP\BP2、培養(yǎng)-觀察的體系改變，取消嚴(yán)格意義上的以真菌、細(xì)菌劃分的培養(yǎng)，而以需氧、厭氧的培養(yǎng)體系來(lái)劃分，是一個(gè)更加廣泛，更加互補(bǔ)的體系。,2015年版藥典的變化,培養(yǎng)基的改變導(dǎo)致陽(yáng)性菌的培養(yǎng)條件改變培養(yǎng)基靈敏度實(shí)驗(yàn)：,2015年版藥典的變化,方法適用性實(shí)驗(yàn)：,2015年版藥典的變化,菌種的培養(yǎng)條件改變,2015年版藥典的變化,無(wú)菌檢查實(shí)驗(yàn)條件由“萬(wàn)級(jí)下的局部百級(jí)”

21、修訂為“B+A”和以前的100級(jí)、10000級(jí)的區(qū)別？需要怎么控制環(huán)境？,潔凈實(shí)驗(yàn)室,潔凈室的定義及分級(jí)兩版藥典對(duì)潔凈室的要求對(duì)比潔凈室微生物的監(jiān)測(cè)與控制微生物鑒定隔離器簡(jiǎn)介消毒劑的選擇與使用幾種空間滅菌方法,潔凈實(shí)驗(yàn)室,潔凈室的定義與分級(jí)藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室是指用于藥品無(wú)菌或微生物檢驗(yàn)用的潔凈實(shí)驗(yàn)室、隔離系統(tǒng)及其它受控環(huán)境。潔凈室不是絕對(duì)無(wú)菌的。概念不等于無(wú)菌室（命名需準(zhǔn)確）,潔凈實(shí)驗(yàn)室,潔凈室的分級(jí)ISO146

22、44---按懸浮粒子大小劃分了潔凈室的級(jí)別（等級(jí)1-9級(jí)）ISO14698---潔凈室及其相關(guān)控制環(huán)境,潔凈實(shí)驗(yàn)室,各國(guó)不同法規(guī)對(duì)于潔凈室污染控制的要求對(duì)比美國(guó)聯(lián)邦標(biāo)準(zhǔn)FED-STD-209E：率先建立了由懸浮粒子含量規(guī)定空氣潔凈度的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，以每立方英尺空氣所含最大允許微粒的數(shù)量確定，分為1、10、100、1000、10000、100000六個(gè)級(jí)別。國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)ISO14644-1：空氣潔凈度分為9個(gè)級(jí)別，比美國(guó)聯(lián)邦標(biāo)準(zhǔn)多出3個(gè)。

23、美國(guó)FDA《無(wú)菌工藝藥品CGMP工業(yè)指南》：以動(dòng)態(tài)期間在物料漏置臨近處所測(cè)數(shù)據(jù)為依據(jù)，強(qiáng)調(diào)了動(dòng)態(tài)概念，對(duì)微生物進(jìn)行了控制，100、1000、10000、100000對(duì)應(yīng)ISO5、6、7、8美國(guó)藥典《1116》：根據(jù)美國(guó)聯(lián)邦標(biāo)準(zhǔn)改編，M1-M7歐盟GMP：A、B、C、D，靜態(tài)、動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)、強(qiáng)調(diào)了粒子的在線(xiàn)監(jiān)測(cè)2010年版GMP:等同于歐盟,潔凈實(shí)驗(yàn)室,按空氣懸浮粒子大小和數(shù)量的不同參考現(xiàn)行“藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范”分為A、B、C、D 4

24、 個(gè)級(jí)別。,潔凈實(shí)驗(yàn)室,初次使用的潔凈實(shí)驗(yàn)室應(yīng)進(jìn)行參數(shù)確認(rèn)，確認(rèn)參數(shù)包括物理參數(shù)、空氣懸浮粒子和微生物。,物理參數(shù),空氣懸浮粒子,微生物,浮游菌,沉降菌,表面微生物,空氣過(guò)濾器完整性，氣流組織、空氣流速，換氣次數(shù)、壓差、溫度和相對(duì)濕度,,參數(shù)確認(rèn),,執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)《潔凈室施工及驗(yàn)收規(guī)范》附錄D3 高效空氣過(guò)濾器現(xiàn)場(chǎng)掃描檢漏方法粒子計(jì)數(shù)器法、附錄E12 氣流的檢測(cè)、附錄E1 風(fēng)量和風(fēng)速的檢測(cè)、附錄E2 靜壓差的檢測(cè)、附錄E5 溫濕度的檢

25、測(cè),潔凈實(shí)驗(yàn)室,2015年版與2010年版的物理指標(biāo)相比 100級(jí)與A級(jí)比較，單向流斷面風(fēng)速相差較大，100級(jí)潔凈區(qū)需要增加循環(huán)風(fēng)量才能達(dá)到A級(jí)，10000級(jí)潔凈區(qū)空調(diào)系統(tǒng)需要增加1倍的送風(fēng)量，才能達(dá)到B級(jí),潔凈實(shí)驗(yàn)室,潔凈室微生物監(jiān)測(cè)和控制 定期清潔、消毒、消毒效果驗(yàn)證包括：非生物活性的空氣懸浮粒子數(shù)和有生物活性的微生物監(jiān)測(cè)，其中微生物監(jiān)測(cè)包括環(huán)境浮游菌和沉降菌監(jiān)測(cè)，及關(guān)鍵的檢測(cè)臺(tái)面、人員操作服表面及5 指手

26、套等的微生物檢測(cè)。,潔凈實(shí)驗(yàn)室,懸浮粒子用于空氣潔凈度分級(jí)的空氣懸浮粒子尺寸范圍在0.1μm-1000μm的固體和液體粒子。,潔凈實(shí)驗(yàn)室,方法：GB/T16292-2010《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子的測(cè)試方法》采樣點(diǎn)數(shù)目：最少采樣數(shù)，兩種方法，一、NL—最少采樣點(diǎn)A—潔凈室或被控潔凈區(qū)的面積，單位為平方米（單向流，垂直于氣流方向上的橫截面積）,潔凈實(shí)驗(yàn)室,二|查表,潔凈實(shí)驗(yàn)室,采樣點(diǎn)位置與分布：離地面0.8m高度的水平面

27、上均勻分布采樣點(diǎn)多于5點(diǎn)時(shí)，也可在離地面0.8-1.5m高度的區(qū)域內(nèi)分層布置，每層不少于5點(diǎn)靜態(tài)測(cè)試時(shí)，采樣點(diǎn)布置力求均勻（附錄A），動(dòng)態(tài)測(cè)試，應(yīng)根據(jù)關(guān)鍵操作區(qū)布置。,潔凈實(shí)驗(yàn)室,采樣次數(shù)：對(duì)任何小潔凈室（區(qū)）或局部空氣凈化區(qū)域，采樣點(diǎn)數(shù)目不少于2個(gè)，總采樣次數(shù)不少于5次，每個(gè)采樣點(diǎn)的采樣次數(shù)可以多于1次，不同采樣點(diǎn)的采樣次數(shù)可以不同每次采樣量：,潔凈實(shí)驗(yàn)室,計(jì)算：（計(jì)算詳細(xì)見(jiàn)GB標(biāo)準(zhǔn)）結(jié)果：每個(gè)采樣點(diǎn)的平均懸浮粒子濃度必須

28、不大于規(guī)定的級(jí)別界限全部采樣點(diǎn)的懸浮粒子濃度平均值均值的95%置信上限必須不大于規(guī)定的級(jí)別界限，UCL≤級(jí)別界限,潔凈實(shí)驗(yàn)室,浮游菌、沉降菌：,潔凈實(shí)驗(yàn)室,方法：GB/T16293-2010《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）浮游菌的測(cè)試方法》 GB/T16293-2010 《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）沉降菌的測(cè)試方法》浮游菌最少采樣點(diǎn)——參照懸浮粒子 GB/T16292-2010采樣點(diǎn)的位置——參照懸浮粒子 GB/T16292

29、-2010 工作區(qū)測(cè)點(diǎn)位置離地0.8-1.5m左右（略高于工作面） 送風(fēng)口測(cè)點(diǎn)位置離開(kāi)送風(fēng)面30cm左右。 可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍處增加測(cè)點(diǎn)。采樣次數(shù)——每個(gè)采樣點(diǎn)采樣一次,潔凈實(shí)驗(yàn)室,最小采樣量：,注意事項(xiàng)單向流區(qū)域，采樣器采樣口朝向應(yīng)正對(duì)氣流方向；非單向區(qū)域，采樣口朝上。采樣點(diǎn)避開(kāi)回風(fēng)口。測(cè)試人員站在采樣口的下風(fēng)側(cè)，盡量少走動(dòng)。為避免培養(yǎng)皿運(yùn)輸

30、或搬動(dòng)過(guò)程的影響，應(yīng)對(duì)培養(yǎng)皿做陰性對(duì)照（不暴露采樣），應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。記錄———測(cè)試者名稱(chēng)，日期，測(cè)試依據(jù)，潔凈室的平面位置，測(cè)試儀器，方法描述，包括測(cè)試環(huán)境條件，采樣點(diǎn)位置，布置圖，測(cè)試次數(shù)，采樣量，測(cè)試儀器檢定證書(shū)，動(dòng)態(tài)測(cè)試應(yīng)記錄現(xiàn)場(chǎng)人員數(shù)量位置，設(shè)備的數(shù)量和位置，測(cè)試結(jié)果。,潔凈實(shí)驗(yàn)室,結(jié)果每點(diǎn)浮游菌平均濃度（個(gè)/m3）=菌落數(shù)/采樣量 結(jié)果評(píng)定每個(gè)測(cè)點(diǎn)的浮游菌平均濃度必須低于標(biāo)準(zhǔn)的界限靜態(tài)測(cè)試，某點(diǎn)浮游菌平均濃度超過(guò)

31、評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，則應(yīng)重新采樣兩次，兩次結(jié)果均合格才能判定為合格。,潔凈實(shí)驗(yàn)室,沉降菌 最少采樣點(diǎn)參照懸浮粒子GB/T16292-2010 采樣點(diǎn)的位置參照懸浮粒子GB/T16292-2010最少培養(yǎng)皿數(shù),潔凈實(shí)驗(yàn)室,結(jié)果計(jì)算平均菌落數(shù)=(M1+M2+……MN)/NM1——1號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù)N ——培養(yǎng)皿總數(shù)結(jié)果評(píng)定—同浮游菌,潔凈實(shí)驗(yàn)室,表面微生物表面微生物測(cè)定是對(duì)環(huán)境、設(shè)備和人員的表面微生物進(jìn)行監(jiān) 測(cè)，方

32、法包括接觸碟法和擦拭法。接觸碟法——將充滿(mǎn)規(guī)定的瓊脂培養(yǎng)基的接觸碟對(duì)規(guī)則表面或平面進(jìn)行取樣，然后置合適的溫度下培養(yǎng)一定時(shí)間并計(jì)數(shù)，每碟取樣面積約為25 cm2，微生物計(jì)數(shù)結(jié)果以cfu/碟報(bào)告；擦拭法——接觸碟法的補(bǔ)充，用于不規(guī)則表面的微生物監(jiān)測(cè)，特別是設(shè)備的不規(guī)則表面。擦拭法是采用合適尺寸的無(wú)菌模板確定擦拭的面積，取樣后，將拭子置合適的緩沖液或培養(yǎng)基中，充分振蕩，然后采用適宜的方法計(jì)數(shù)，每個(gè)拭子取樣面積為約25 cm2，微生物計(jì)數(shù)結(jié)

33、果以cfu/拭子報(bào)告。接觸碟法和擦拭法采用的培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度和時(shí)間同浮游菌或沉降菌（一般采用TSA，當(dāng)監(jiān)測(cè)結(jié)果有疑似真菌或考慮季節(jié)因素影響時(shí)，可增加SDA）表面菌測(cè)定應(yīng)在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后進(jìn)行。,潔凈實(shí)驗(yàn)室,推薦的藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室的監(jiān)測(cè)頻次及監(jiān)測(cè)項(xiàng)目,潔凈實(shí)驗(yàn)室,如果出現(xiàn)連續(xù)超過(guò)糾偏限和警戒限、關(guān)鍵區(qū)域內(nèi)發(fā)現(xiàn)有污染微生物存在、空氣凈化系統(tǒng)進(jìn)行任何重大的維修、消毒規(guī)程改變、設(shè)備有重大維修或增加、潔凈室（區(qū)）結(jié)構(gòu)或區(qū)域分布有重大變動(dòng)、引起微生物污

34、染的事故、日常操作記錄反映出傾向性的數(shù)據(jù)時(shí)應(yīng)考慮修改監(jiān)測(cè)頻次。,潔凈實(shí)驗(yàn)室,潔凈實(shí)驗(yàn)室,偏差處理 當(dāng)微生物監(jiān)測(cè)結(jié)果超出警戒限度和糾偏限度時(shí)，應(yīng)當(dāng)按照偏差處理規(guī)程進(jìn)行報(bào)告、記錄、調(diào)查、處理以及采取糾正措施，并對(duì)糾正措施的有效性進(jìn)行評(píng)估。微生物鑒定 建議對(duì)受控環(huán)境收集到的微生物進(jìn)行適當(dāng)水平的鑒定1、有助于預(yù)期常見(jiàn)菌群。2、有助于評(píng)估清潔/消毒方法、消毒劑的有效性。3、有助于污染源的調(diào)查，輔助OOS調(diào)查。,潔凈實(shí)

35、驗(yàn)室,微生物鑒定通則9205“藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室微生物監(jiān)測(cè)和控制指導(dǎo)原則”建議對(duì)潔凈室和其他受控環(huán)境分離到的微生物進(jìn)行鑒定，以掌握環(huán)境微生物污染情況，有助于污染調(diào)查。無(wú)菌試驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性和無(wú)菌生產(chǎn)模擬工藝（如培養(yǎng)基灌裝）失敗時(shí)，對(duì)檢出的微生物鑒定至少達(dá)到種屬水平，必要時(shí)達(dá)到菌株水平。,潔凈實(shí)驗(yàn)室,微生物鑒定借助現(xiàn)有的分類(lèi)系統(tǒng)，通過(guò)對(duì)未知微生物的特征測(cè)定，對(duì)其進(jìn)行細(xì)菌、酵母菌和霉菌大類(lèi)的區(qū)分，或?qū)佟⒎N及菌株水平確定的過(guò)程。,潔凈實(shí)驗(yàn)室,鑒定

36、程序—分離純化—初篩試驗(yàn)—表型微生物鑒定—基因型微生物鑒定（16SrDNA、 18SrDNA、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、DNA-DNA雜交、焦磷酸測(cè)序、多位點(diǎn)序列分型等 ）,潔凈實(shí)驗(yàn)室,分離純化純培養(yǎng)物是指來(lái)源于同一單細(xì)胞的細(xì)胞群體平板劃線(xiàn)法是最常用的技術(shù),潔凈實(shí)驗(yàn)室,初篩試驗(yàn)（革蘭氏染色、芽孢染色、鏡檢觀察細(xì)胞形態(tài)、重要的生化反應(yīng)） 重要的生化篩選試驗(yàn)—氧化酶試驗(yàn)：氧化酶陽(yáng)性：不發(fā)酵的革蘭氏陰性桿菌、

37、 氧化酶陰性：腸道菌—過(guò)氧化氫酶試驗(yàn) 陽(yáng) 性：葡萄球菌 陰性：鏈球菌—凝固酶試驗(yàn) 陽(yáng) 性：致病性

38、 陰性：非致病性,潔凈實(shí)驗(yàn)室,表型微生物鑒定—培養(yǎng)物 （菌落形態(tài)、菌落顏色、形狀、大小和產(chǎn)色素）—形態(tài)學(xué)（細(xì)胞形態(tài)、大小、形狀、鞭毛、內(nèi)容物、革蘭氏染色、芽孢 和抗酸染色、孢子形成模式）—生理學(xué)（氧氣耐受性、pH值范圍、最適溫度和范圍、耐鹽性）—生化反應(yīng)（碳源利用、碳水化合物的氧化或發(fā)酵、酶的模式）—抑制性（膽鹽耐

39、受性、抗生素敏感性、染料耐受性）—血清學(xué)（凝集反應(yīng)、熒光抗體）—化學(xué)分類(lèi)（脂肪酸構(gòu)成、微生物霉素、全細(xì)胞組分）—生態(tài)學(xué)（微生物來(lái)源）,潔凈實(shí)驗(yàn)室,基因型微生物鑒定—微生物由于特殊環(huán)境的影響，表型特征常發(fā)生變異，傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)鑒定手段難以得到種水平結(jié)果，以其核酸序列為鑒定基礎(chǔ)，從遺傳進(jìn)化角度闡明微生物種群之間的分類(lèi)學(xué)關(guān)系—（16SrDNA、 18SrDNA、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、DNA-DNA雜交、焦磷酸測(cè)序、多位點(diǎn)序列分型等 ）,潔凈實(shí)

40、驗(yàn)室,潔凈實(shí)驗(yàn)室,潔凈實(shí)驗(yàn)室,—《伯杰氏系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)手冊(cè)》對(duì)細(xì)菌的分類(lèi)是通過(guò)遺傳物質(zhì)的分析比較來(lái)實(shí)現(xiàn)?！蜩b定法不但技術(shù)需要保證，還需要昂貴的分析設(shè)備和材料，通常在關(guān)鍵微生物調(diào)查中使用，如產(chǎn)品不合格調(diào)查，若使用，方法必須經(jīng)過(guò)確認(rèn)鑒定方法的確認(rèn)包括：準(zhǔn)確度、專(zhuān)屬性、重現(xiàn)性、靈敏度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值,潔凈實(shí)驗(yàn)室,隔離器 分類(lèi)：硬倉(cāng)、軟倉(cāng)結(jié)構(gòu)：1、空氣處理系統(tǒng)（高效空氣過(guò)濾器） 2、傳遞接口及傳

41、遞門(mén) 3、滅菌設(shè)備（一般為過(guò)氧化氫、過(guò)氧乙酸等滅菌） 4、配套設(shè)備與輔助設(shè)備,潔凈實(shí)驗(yàn)室,潔凈實(shí)驗(yàn)室,潔凈實(shí)驗(yàn)室,隔離系統(tǒng)的驗(yàn)證1、操作驗(yàn)證2、隔離器完整性驗(yàn)證3、滅菌驗(yàn)證4、滅菌循環(huán)驗(yàn)證5、隔離器內(nèi)部潔凈度驗(yàn)證6、儀器儀表驗(yàn)證,潔凈實(shí)驗(yàn)室,藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室怎樣實(shí)現(xiàn)微生物的良好控制？處于受控狀態(tài)？1、硬件設(shè)施的滿(mǎn)足 潔凈室的驗(yàn)收應(yīng)符合規(guī)范，換氣次數(shù)，送風(fēng)量、環(huán)境溫濕

42、度等等2、良好的環(huán)境管理， 清潔、消毒程序，并嚴(yán)格執(zhí)行，選擇適當(dāng)?shù)南痉绞?，合理的消毒劑，清潔消毒頻率。監(jiān)測(cè)到位。3、減少人員干預(yù)，人是最大的污染源，規(guī)范人員進(jìn)出潔凈區(qū)的程序，嚴(yán)格按照A/B潔凈區(qū)的要求做好人員防護(hù)。做好人員培訓(xùn)。4、控制物流的干擾，做好物流的消毒、外表面滅菌工作，減少物流的污染5、應(yīng)當(dāng)對(duì)監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析、回顧，通過(guò)收集的數(shù)據(jù)和趨勢(shì)分析，總結(jié)和評(píng)估潔凈實(shí)驗(yàn)室是否受控。,潔凈實(shí)驗(yàn)室,消毒劑的選擇與使用微生物的抗力

43、從小到大排列一般為：—細(xì)菌繁殖體—真菌繁殖體—真菌孢子—病毒—分枝桿菌—細(xì)菌芽孢,潔凈實(shí)驗(yàn)室,消毒劑選擇、使用 將消毒劑種類(lèi)分為四個(gè)作用水平（1）滅菌：可殺滅一切微生物（包括芽孢）達(dá)到滅菌保證水平的方法。甲醛、戊二醛、環(huán)氧乙烷、過(guò)氧乙酸、過(guò)氧化氫等。（2）高水平消毒法：可以殺滅各種微生物，對(duì)芽孢殺滅達(dá)到消毒效果的方法。這類(lèi)消毒方法應(yīng)能殺滅一切細(xì)菌繁殖體（包括結(jié)核分枝桿菌）、病毒、真菌及其孢子和絕大多數(shù)細(xì)菌芽孢

44、。用含氯、二氧化氯、過(guò)氧乙酸、過(guò)氧化氫、含溴消毒劑、臭氧、二溴海因等甲基乙內(nèi)酰脲類(lèi)化合物和一些復(fù)配的消毒劑等消毒因子進(jìn)行消毒的方法。（3）中水平消毒法：殺滅和去除細(xì)菌芽孢以外的各種病原微生物的消毒方法，碘類(lèi)消毒劑(碘伏、碘酊等)、醇類(lèi)、醇類(lèi)和氯已定的復(fù)方，醇類(lèi)和季銨鹽類(lèi)化合物的復(fù)方、酚類(lèi)等消毒劑進(jìn)行消毒的方法。（4）低水平消毒法：只能殺滅細(xì)菌繁殖體（分枝桿菌除外）和親脂病毒的化學(xué)消毒劑。如單鏈季銨鹽類(lèi)消毒劑(苯扎溴銨等)、雙胍類(lèi)消毒

45、劑如氯己定、植物類(lèi)消毒劑和汞、銀、銅等金屬離子消毒劑。,潔凈實(shí)驗(yàn)室,消毒劑的配制：1、按供應(yīng)商的使用說(shuō)明配制和儲(chǔ)存。2、A/B級(jí)區(qū)域應(yīng)使用經(jīng)除菌過(guò)濾的消毒劑。3、盡量高級(jí)別的水配制，純化水、滅菌水、注射用水,配好后放置一會(huì)。影響消毒劑效力的因素： 濃度、接觸時(shí)間、 pH值、溫度、微生物的數(shù)量和種類(lèi),潔凈實(shí)驗(yàn)室,消毒劑的選擇原理1、根據(jù)市售消毒劑的抗菌譜、根據(jù)區(qū)域等級(jí)，A/B級(jí)選用殺孢子劑，其他區(qū)域可配合使用其他水平的消

46、毒劑，定期使用殺孢子劑。2、根據(jù)使用說(shuō)明，規(guī)范使用濃度和作用時(shí)間3、根據(jù)待消毒表面的材質(zhì)。如對(duì)設(shè)備表面的腐蝕程度對(duì)操作者的安全性。（殘留、腐蝕、粘膜刺激）4、和清潔劑，其他消毒劑的相容性5、選用多種類(lèi)的消毒劑，交替使用，避免微生物對(duì)其產(chǎn)生耐受性。,潔凈實(shí)驗(yàn)室,幾種空間滅菌方法：熏蒸滅菌概念 1980年收錄于USP，在一定溫度和壓力的密閉條件下，化學(xué)消毒劑轉(zhuǎn)為氣態(tài)滲透到生物體內(nèi)，使生物致死。有助于降低潔凈區(qū)死角的微

47、生物污染。 甲醛：對(duì)所有微生物都有殺滅作用。殺孢子劑 通常推薦12小時(shí)滅菌時(shí)間，排氣、通風(fēng)至少24小時(shí)，過(guò)程漫長(zhǎng)，有致癌作用，現(xiàn)在已很少使用 臭氧：對(duì)所有微生物都有殺滅作用。殺孢子劑 無(wú)殘留，無(wú)污染，臭氧對(duì)人體有害，為強(qiáng)氧化劑，對(duì)多種物品有損壞，橡膠老化、銅片生銹，織物褪色等。過(guò)氧化氫：對(duì)所有微生物都有殺滅作用。殺孢子劑 2H2O2→2 H2O+O2過(guò)氧化氫滅菌安全，環(huán)

48、境友好，不產(chǎn)生有毒有害殘留物最終分解產(chǎn)物為H2O和O2，無(wú)毒無(wú)殘留。,潔凈實(shí)驗(yàn)室,紫外消毒的應(yīng)用紫外線(xiàn)：空氣消毒、物體表面消毒 用UV進(jìn)行表面消毒時(shí)，要求燈管距離污染表面不超過(guò)1m，30WUV燈照射時(shí)，照射時(shí)間不應(yīng)短于30分鐘，燈管周?chē)?.5-2.0m為消毒有效區(qū)。應(yīng)對(duì)燈的紫外線(xiàn)照射強(qiáng)度進(jìn)行監(jiān)測(cè)，當(dāng)強(qiáng)度低于規(guī)定值時(shí)，及時(shí)更換。方法：生物指示劑/物理學(xué)檢測(cè)生物指示：大腸桿菌，照射劑量應(yīng)達(dá)到20000μw·s/c

49、m2 ,枯草桿菌黑色變種芽孢應(yīng)達(dá)到100000μw·s/cm2 。物理學(xué)檢測(cè)方法：燈管的紫外線(xiàn)強(qiáng)度（μw/cm2）用中心波長(zhǎng)為253.7nm的紫外線(xiàn)強(qiáng)度測(cè)定儀（標(biāo)定有效期內(nèi)），在燈管垂直位置1m處測(cè)定。,潔凈實(shí)驗(yàn)室,判定指標(biāo)（1）電壓220V，室溫20～25℃， 253.7nm紫外線(xiàn)輻射強(qiáng)度（垂直1m處） 普通30W直管型紫外線(xiàn)燈≥70μw/cm2； 高強(qiáng)度紫外線(xiàn)燈 ≥200μw /cm2。

50、（2）表面消毒接受的照射劑量，應(yīng)達(dá)殺滅目標(biāo)微生物所需。應(yīng)達(dá)到100000μw.s /cm2。 劑量（μw.s /cm2）=輻射強(qiáng)度（μw/cm2）×時(shí)間（s）。,菌種的管理,《9203 藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則》 藥品微生物檢驗(yàn)用的試驗(yàn)菌應(yīng)來(lái)自認(rèn)可的國(guó)內(nèi)或國(guó)外菌種保藏機(jī)構(gòu)的標(biāo)準(zhǔn)菌株，或使用與標(biāo)準(zhǔn)菌株所有相關(guān)特性等效的可以溯源的商業(yè)派生菌株。CMCC-----中國(guó)醫(yī)學(xué)菌種保藏中心 CMCC（

51、F）\CMCC（B）,F--------真菌；B--------細(xì)菌ATCC-美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)菌種收藏中心,菌種的管理,定義標(biāo)準(zhǔn)菌株 至少定義到屬或種水平的菌株。按其特征進(jìn)行分類(lèi)和描述，有明確的來(lái)源。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株 從國(guó)內(nèi)或國(guó)外菌種保藏機(jī)構(gòu)獲得的標(biāo)準(zhǔn)菌株經(jīng)過(guò)復(fù)活并在適宜的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)后，即為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株。應(yīng)進(jìn)行純度和特性確認(rèn)。可用于制備每月或每周1 次轉(zhuǎn)種的工作菌株。工作菌株 由標(biāo)準(zhǔn)菌株、標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株轉(zhuǎn)接后

52、獲得的同種菌株。工作菌株的傳代次數(shù)應(yīng)嚴(yán)格控制，不得超過(guò)5 代。,菌種的管理,菌種的管理,申購(gòu)：菌種管理人員提出購(gòu)買(mǎi)申請(qǐng)驗(yàn)收：接受菌種時(shí)應(yīng)檢查菌種的名稱(chēng)，代號(hào)，數(shù)量，完整性，記錄信息。菌種復(fù)活：冷凍菌種的復(fù)活，無(wú)菌操作打開(kāi)玻璃管，用相應(yīng)的液體培養(yǎng)基0.5-1ml溶解冷凍菌種，轉(zhuǎn)移至適宜的培養(yǎng)基中復(fù)活。確認(rèn)：用無(wú)菌接種環(huán)取復(fù)活的培養(yǎng)物，在相應(yīng)的培養(yǎng)基平板上劃線(xiàn)分離培養(yǎng)，觀察典型的菌落形態(tài)，菌落形態(tài)的一致性，挑取單個(gè)菌落形態(tài)進(jìn)行革蘭氏染

53、色、鏡檢，觀察染色特性及微生物形態(tài)學(xué)特征，生化反應(yīng)或用菌種鑒定系統(tǒng)進(jìn)行進(jìn)一步鑒定。,菌種的管理,保藏-----確保在相應(yīng)的保藏條件下的菌種不會(huì)變異且性能穩(wěn)定，經(jīng)濟(jì)簡(jiǎn)便。甘油冷凍保藏：液體培養(yǎng)物加入等體積的20%甘油，混勻，分裝于1ml的小管，-80℃---30℃保存；或菌苔刮取后分散于無(wú)菌水中，加入等體積20%甘油的TSB中。再分裝。瓷珠保藏法　 將培養(yǎng)好的微生物細(xì)胞或孢子制成懸浮液，轉(zhuǎn)入裝有無(wú)菌多孔玻璃珠（或瓷珠）的無(wú)

54、菌瓶中，使其吸附于玻璃珠表面，去除多余懸浮液，低溫冷凍保存的一種菌種保藏方法。 SN/T 2660-2010 食品微生物實(shí)驗(yàn)室菌種保藏方法：-70℃可保存10年斜面低溫保藏： 把待保藏菌接種在適宜的斜面培養(yǎng)基表面，充分生長(zhǎng)后，在4℃左右冰箱保存。銅綠不能用此法保存。,菌種的管理,菌種的管理,傳代：工作菌株的傳代次數(shù)不得超過(guò)5 代（標(biāo)準(zhǔn)菌株為第0 代）。1 代是指將活的培養(yǎng)物接種到微生物生長(zhǎng)的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)，任何形式的轉(zhuǎn)種

55、均被認(rèn)為是傳代1次。傳代時(shí)，應(yīng)對(duì)工作菌株的特性和純度進(jìn)行確認(rèn)。 使用：使用工作菌種制備菌液，做好記錄。菌液制備后若在室溫下放置，應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)使用；若保存在2-8度，可在24小時(shí)內(nèi)使用。銷(xiāo)毀：傳代、使用過(guò)程產(chǎn)生的所有活的微生物均應(yīng)進(jìn)行高壓滅菌處理。,菌種的管理,菌種的標(biāo)識(shí) 每一支菌種都應(yīng)以適當(dāng)?shù)臉?biāo)簽、標(biāo)識(shí)來(lái)表示其名稱(chēng)、菌號(hào)、接種日期、代數(shù)等信息。,例如1：大CMCC(B)44102標(biāo)140606/0/3，其中“大”表

56、示大腸埃希菌，“標(biāo)”代表標(biāo)準(zhǔn)菌株，“140606”指標(biāo)準(zhǔn)菌株的購(gòu)買(mǎi)日期即2014年6月6日，“0”代表是零代，“3”代表是一共購(gòu)買(mǎi)3支。 例如2：大CMCC(B)44102儲(chǔ)（瓷）140606/2/10，其中“大”表示大腸埃希菌，“儲(chǔ)”代表標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株， “瓷”表示用瓷珠保藏法來(lái)保藏此菌種，“140606”指標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株的傳代日期即2014年6月6日，“10”代表是一共制備了10支。,生物安全實(shí)驗(yàn)室,生物安全實(shí)驗(yàn)室簡(jiǎn)介二級(jí)生物安全實(shí)

57、驗(yàn)室的建設(shè)要求生物安全柜的分類(lèi)與特點(diǎn)二級(jí)生物安全柜的使用,生物安全實(shí)驗(yàn)室,《人間傳染的病原微生物名錄》根據(jù)微生物的危害程度將其分為4類(lèi)，藥品微生物檢測(cè)所涉及到的菌都為第三類(lèi)，應(yīng)該在二級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室操作。具有一定的生物安全防護(hù)水平的實(shí)驗(yàn)室統(tǒng)稱(chēng)為生物安全實(shí)驗(yàn)室。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)化的建筑、生物安全設(shè)備配置、個(gè)人防護(hù)、翔實(shí)的SOP 和嚴(yán)格的管理來(lái)實(shí)現(xiàn) 。,生物安全實(shí)驗(yàn)室,氣溶膠 aerosol 懸浮于氣體介質(zhì)中 粒徑一

58、般為 0.001-100μm的固態(tài)或液態(tài)微小粒子形成的穩(wěn)定的分散體系。吸入 （病原微生物污染的空氣）（氣溶膠－0.001-100μm的固態(tài)、液態(tài)微小粒子懸浮在氣體介質(zhì)中形成的相對(duì)穩(wěn)定的分散體系） 感染性病原微生物氣溶膠的吸入是造成實(shí)驗(yàn)室相關(guān)感染的主要因素。,生物安全實(shí)驗(yàn)室,二級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室建設(shè)要求（1）必須為實(shí)驗(yàn)室安全運(yùn)行、清潔和維護(hù)提供足夠的空間。在實(shí)驗(yàn)室的工作區(qū)外還應(yīng)當(dāng)提供另外的可長(zhǎng)期使用的儲(chǔ)存間。應(yīng)當(dāng)為安全操作及儲(chǔ)存溶劑、

59、放射性物質(zhì)、壓縮氣體和液化氣提供足夠的空間和設(shè)施.在實(shí)驗(yàn)室的工作區(qū)外應(yīng)當(dāng)有存放外衣和私人物品的設(shè)施。在實(shí)驗(yàn)室的工作區(qū)外應(yīng)當(dāng)有進(jìn)食、飲水和休息的場(chǎng)所（2） 實(shí)驗(yàn)室墻壁、天花板和地板應(yīng)當(dāng)光滑、易清潔、不滲漏、耐化學(xué)品和消毒劑的腐蝕。地板應(yīng)當(dāng)防滑。實(shí)驗(yàn)臺(tái)面應(yīng)是防水的，并可耐消毒劑、酸、堿、有機(jī)溶劑和中等熱度的作用。實(shí)驗(yàn)室器具應(yīng)當(dāng)堅(jiān)固耐用，在實(shí)驗(yàn)臺(tái)、生物安全柜和其他設(shè)備之間及其下面要保證有足夠的空間以便進(jìn)行清潔。實(shí)驗(yàn)室的門(mén)應(yīng)有可視窗，并達(dá)到適

60、當(dāng)?shù)姆阑鸬燃?jí)，最好能自動(dòng)關(guān)閉 (3)  應(yīng)保證實(shí)驗(yàn)室內(nèi)所有活動(dòng)的照明，避免不必要的反光和閃光。要有可靠和充足的電力供應(yīng)和應(yīng)急照明，以保證人員安全離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室。,生物安全實(shí)驗(yàn)室,(4)  必須為實(shí)驗(yàn)室提供可靠和高質(zhì)量的水。要保證實(shí)驗(yàn)室水源和飲用水源的供應(yīng)管道之間沒(méi)有交叉連接。應(yīng)當(dāng)安裝防止逆流裝置來(lái)保護(hù)公共飲水系統(tǒng)。每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都應(yīng)有洗手池，并最好安裝在出口處，盡可能用自來(lái)水. (5)  安全系統(tǒng)應(yīng)當(dāng)包括消防、

61、應(yīng)急供電、應(yīng)急淋浴以及洗眼設(shè)施。應(yīng)當(dāng)配備具有適當(dāng)裝備并易于進(jìn)入的急救區(qū)或急救室。 (6)  BSL-2實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)在靠近實(shí)驗(yàn)室的位置配備高壓滅菌器或其他清除污染的工具。 (7) 在設(shè)計(jì)新的設(shè)施時(shí)，應(yīng)當(dāng)考慮設(shè)置機(jī)械通風(fēng)系統(tǒng)，以使空氣向內(nèi)單向流動(dòng)。如果沒(méi)有機(jī)械通風(fēng)系統(tǒng)，實(shí)驗(yàn)室窗戶(hù)應(yīng)當(dāng)能夠打開(kāi)，同時(shí)應(yīng)安裝防蟲(chóng)紗窗。 (8)  必須考慮安全保衛(wèi)措施。必須使用堅(jiān)固的門(mén)、安全窗戶(hù)以及門(mén)禁系統(tǒng)。適當(dāng)時(shí)還應(yīng)使用其他措施來(lái)加強(qiáng)安全

62、保障。,生物安全實(shí)驗(yàn)室,生物安全實(shí)驗(yàn)室,防護(hù)要求在實(shí)驗(yàn)室工作時(shí)，必須穿著合適的工作服或防護(hù)服。在進(jìn)行可能接觸到血液、體液以及其他具有潛在感染性的材料或感染性動(dòng)物的操作時(shí)，應(yīng)戴上合適的手套。手套用完后，應(yīng)先消毒再摘除，隨后必須洗手。在處理完感染性實(shí)驗(yàn)材料和動(dòng)物后，以及在離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域前，都必須洗手。為了防止眼睛或面部受到噴濺物的污染、碰撞或人工紫外線(xiàn)輻射的傷害，必須戴合適的安全眼鏡、面罩（面具）或其他防護(hù)設(shè)備。嚴(yán)禁穿著實(shí)驗(yàn)室

63、防護(hù)服離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域。不得在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)穿露腳趾的鞋。禁止在實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域進(jìn)食、飲水、吸煙、化妝和處理隱形眼鏡。禁止在實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域儲(chǔ)存食品和飲料。在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)用過(guò)的防護(hù)服不得和日常服裝放在同一柜子內(nèi)。,生物安全實(shí)驗(yàn)室,生物安全柜（ Biosafety Cabinet BSC) 負(fù)壓過(guò)濾排風(fēng)柜－在生物因子操作過(guò)程中用來(lái)保 護(hù)操作人員、環(huán)境和（或）實(shí)驗(yàn)材料，防止感染 性材料在實(shí)驗(yàn)中產(chǎn)生的氣溶膠向操作者和環(huán)境擴(kuò) 散。

64、生物安全實(shí)驗(yàn)室的重要設(shè)備，是病原微生物操作 的一級(jí)防護(hù)屏障，關(guān)系生命安全和環(huán)境安全，有 嚴(yán)格質(zhì)量要求。安全柜分級(jí)：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 三個(gè)級(jí)別。,生物安全實(shí)驗(yàn)室,生物安全柜種類(lèi)BSC有三個(gè)級(jí)別，一共有六種。,生物安全實(shí)驗(yàn)室,Ⅰ級(jí)生物安全柜 操作者可通過(guò)前窗操作口 在安全柜內(nèi)進(jìn)行操作。 前窗操作口向內(nèi)吸入的負(fù) 壓氣流保護(hù)人員的安全。 污染氣流經(jīng)高效過(guò)濾器過(guò) 濾后排出，保護(hù)環(huán)境不受 污染。 不保護(hù)操作對(duì)象。,

65、A-前窗操作口 B-觀察窗 C-排氣過(guò)濾器 D-負(fù)壓排氣通路Ⅰ級(jí)安全柜結(jié)構(gòu)和氣流模式示意圖,生物安全實(shí)驗(yàn)室,Ⅱ級(jí)生物安全柜根據(jù)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和氣流模式 的不同分為 A1、A2、B1、B2四種類(lèi)型操作者通過(guò)前窗操作口在安全柜內(nèi)進(jìn)行操作。操作口流入氣流：保護(hù)人員經(jīng)高效過(guò)濾器過(guò)濾的下降氣流：保護(hù)產(chǎn)品被污染氣流經(jīng)高效過(guò)濾器過(guò)濾后排出：保護(hù)環(huán)境,生物安全實(shí)驗(yàn)室,ⅡA1型生物安全柜前窗操作口流入氣流的最低速率為0.38m/s

66、；下降氣流為部分流入氣流和部分循環(huán)氣流的混合 氣流，經(jīng)高效過(guò)濾器過(guò)濾后送至工作區(qū)；污染氣流經(jīng)過(guò)高效過(guò)濾器過(guò)濾后可以排到實(shí)驗(yàn)室 中或經(jīng)安全柜的外接排風(fēng)管道排到大氣中； 安全柜內(nèi)的污染部位可以處于正壓狀態(tài)；A1型安全柜不能用于揮發(fā)性有毒化學(xué)品和揮發(fā)性 放射性核素的實(shí)驗(yàn)。,生物安全實(shí)驗(yàn)室,IIA1型生物安全柜70% 氣體循環(huán)利用 30% 氣體外排.,,,,,環(huán)境空氣 污染的空氣 HEPA 過(guò)濾的空氣 負(fù)壓的污染

67、空氣,生物安全實(shí)驗(yàn)室,操作口流入氣流的最低速率為0.50m/s；下降氣流為部分流入氣流和部分循環(huán)氣流的混合 氣流，經(jīng)高效過(guò)濾器過(guò)濾后送至工作區(qū)；污染氣流經(jīng)過(guò)高效過(guò)濾器過(guò)濾后可以排到實(shí)驗(yàn)室 或經(jīng)安全柜的外接排風(fēng)管道排到大氣中；安全柜內(nèi)所有污染部位均處于負(fù)壓狀態(tài)或者被負(fù) 壓通道和負(fù)壓通風(fēng)系統(tǒng)環(huán)繞；安全柜用于進(jìn)行以微量揮發(fā)性有毒化學(xué)品和痕量 放射性核素為輔助劑的微生物實(shí)驗(yàn)時(shí)，必須連接 功能合適的排氣罩。,生物安全實(shí)

68、驗(yàn)室,IIA2型生物安全柜70%氣體循環(huán)使用 .30%氣體排出，既可以接管道外排，也可以不接管道直接排放在實(shí)驗(yàn)室,,,,,環(huán)境空氣 污染的空氣 HEPA 過(guò)濾的空氣 污染空氣,生物安全實(shí)驗(yàn)室,Ⅱ級(jí)B1型生物安全柜操作口流入氣流的最低速率為0.50m/s；下降氣流大部分由未污染的流入氣流循環(huán)提供， 經(jīng)過(guò)高效過(guò)濾器過(guò)濾后送至工作區(qū)；大部分被污染的下降氣流經(jīng)過(guò)高效過(guò)濾器過(guò)濾后 通過(guò)專(zhuān)用的排氣管道排入大氣中；安全柜內(nèi)所