基于切刻酶的等溫核酸擴增的研究熵檢驅測動新分技子術開的關研和究信號放大.pdf

1、核酸作為重要的遺傳信息生物分子，其檢測被廣泛的應用在食品安全、生物醫(yī)學檢測、環(huán)境檢測等諸多領域。聚合酶鏈式反應（PCR）是目前應用最廣泛的核酸擴增檢測方法之一，然而PCR技術需要專門的熱循環(huán)儀，限制了其在疾病的即時診斷等領域的應用。因此，發(fā)展更靈敏、快速的核酸等溫檢測方法具有重要意義。本文構建了幾種簡單、快速的核酸等溫擴增檢測新方法，分別對DNA和RNA進行了快速、靈敏和特異地檢測。
　　本研究建立了一種基于雙切口分子信標的等溫擴

2、增檢測DNA新方法的研究。用該方法對提取的大腸桿菌16S rDNA進行實時熒光檢測，當檢測靶標的量在100fmol到10amol之間時呈良好的線性，最低檢測限為10amol；通過在引物上設計突變堿基進行檢測，驗證了該方法具有較強的特異性；并用該方法在復雜體系中檢測時呈現(xiàn)較強的抗干擾能力。此外，它是一鍋式的等溫鏈置換擴增方法，不需要額外的操作步驟，極大的簡化了實驗步驟，并降低了樣品污染的可能性。它的這些優(yōu)點使該方法在核酸的現(xiàn)場快速檢測及即

3、時檢測（POCT）中更具有實用性。目前的RNA檢測方法中，大部分都需要利用反轉錄酶將RNA反轉錄為cDNA后再進行擴增檢測。構建了三種無需加反轉錄酶可直接等溫擴增RNA的實驗方案，實現(xiàn)了對RNA的快速“一步法”檢測。這幾種方法都利用了本實驗室發(fā)現(xiàn)的Bst DNA聚合酶既具有DNA聚合酶活性又具有內(nèi)在的反轉錄酶活性的特點；此外，還充分的利用了DNA聚合酶的鏈置換活性及與切刻酶聯(lián)用的擴增放大機理，最終實現(xiàn)了信號的多重放大。最優(yōu)方法對大腸桿菌