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簡(jiǎn)介：對(duì)流感藥物的疏忽引發(fā)了全球性的藥物短缺問題。目前市場(chǎng)上只有2種主要的流感藥物。同時(shí)，對(duì)禽流感的擔(dān)心，促使各國(guó)政府采取了相應(yīng)的藥物儲(chǔ)備措施，結(jié)果導(dǎo)致流感藥物的需求變得更加緊張。不過這也帶來了一個(gè)積極的結(jié)果流感藥物研究領(lǐng)域開始復(fù)蘇。自從1983年確定了流感病毒神經(jīng)氨酸酶NA的晶體結(jié)構(gòu)及其與天然底物唾液酸的共晶結(jié)構(gòu)以來，流感病毒NA抑制劑的研究，尤其是其唾液酸類似物的研究取得了突破性進(jìn)展。對(duì)晶體結(jié)構(gòu)的了解允許人們進(jìn)行分子模擬研究，進(jìn)而設(shè)計(jì)開發(fā)高效、高選擇性的抑制劑。而定量構(gòu)效關(guān)系研究是藥物設(shè)計(jì)的一種重要方法，它對(duì)于設(shè)計(jì)和篩選生物活性顯著的藥物以及闡述藥物的作用機(jī)理等具有指導(dǎo)作用。本文綜述了流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制劑和定量構(gòu)效關(guān)系方法的研究進(jìn)展；利用2DQSAR和3DQSAR技術(shù)對(duì)流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制劑進(jìn)行了定量構(gòu)效關(guān)系研究和計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)；實(shí)現(xiàn)了對(duì)部分目標(biāo)化合物的成功合成，以期得到具有較高生物活性的新型抗流感藥物小分子結(jié)構(gòu)。本文的主要內(nèi)容和研究成果如下1運(yùn)用分子距離矢量MEDV和三維全息原子場(chǎng)作用矢量3DHOVAIF這兩種描述子結(jié)合逐步線性回歸SMR、多元線性回歸MLR建模技術(shù)分別對(duì)兩個(gè)神經(jīng)氨酸酶抑制劑樣本體系進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征和建模分析。通過對(duì)建模結(jié)果進(jìn)行對(duì)比發(fā)現(xiàn)運(yùn)用3DHOVAIF所建模型，相對(duì)于MEDV所建模型不論是在估計(jì)能力還是預(yù)測(cè)能力都較理想。初步說明描述子MEDV相對(duì)于3DHOVAIF不適用于神經(jīng)氨酸酶抑制劑的結(jié)構(gòu)表征。2進(jìn)一步運(yùn)用3DHOVAIF描述子和逐步線性回歸SMR、多元線性回歸MLR建模技術(shù)對(duì)40個(gè)嘧啶類抑制劑體系進(jìn)行了結(jié)構(gòu)表征和建模分析，通過變量篩選和回歸分析最終得到了得到了5變量的定量構(gòu)效關(guān)系模型，建模結(jié)果為R0923，SD1146，R2CV0679，SDCV1513?？梢钥闯鲈撃Ｐ途哂辛己玫姆€(wěn)定性和預(yù)測(cè)能力。從而進(jìn)一步說明3DHOVAIF描述子能夠準(zhǔn)確描述神經(jīng)氨酸酶抑制劑的結(jié)構(gòu)信息，適用于該類分子的結(jié)構(gòu)表征。3為了深入分析3DHOVAIF對(duì)流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制劑樣本集的表達(dá)和建模性能，采用優(yōu)化算法將123個(gè)含氮雜環(huán)類抑制劑樣本分為兩部分，即訓(xùn)練集和測(cè)試集各為100和23個(gè)樣本。利用3DHOVAIF對(duì)100個(gè)神經(jīng)氨酸酶抑制劑進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征，然后采用逐步回歸對(duì)變量進(jìn)行篩選后，運(yùn)用偏最小二乘技術(shù)建立模型。結(jié)果復(fù)相關(guān)系數(shù)R2，交互校驗(yàn)的復(fù)相關(guān)系數(shù)Q2和模型的均方根誤差分別為R20705，SD0936，Q20657，并對(duì)文獻(xiàn)中23個(gè)藥物和設(shè)計(jì)的36個(gè)化合物進(jìn)行了活性預(yù)測(cè)，說明該模型對(duì)內(nèi)部樣本活性的估計(jì)能力和對(duì)外部樣本活性的預(yù)測(cè)能力均較好。表明三維全息原子場(chǎng)作用矢量能較好表征該類分子結(jié)構(gòu)信息值得進(jìn)一步推廣應(yīng)用。4在36個(gè)設(shè)計(jì)化合物的活性預(yù)測(cè)值中，嘧啶類衍生物和環(huán)己烯類衍生物均表現(xiàn)出較高的生物活性，從中篩選出六個(gè)嘧啶類衍生物即4羥基2巰基6甲基嘧啶、6甲基24二羥基嘧啶、4羥基2甲氧基6甲基嘧啶、4羧基24二羥基嘧啶、4羧基2甲氧基6羥基嘧啶和4羧基2乙氧基6羥基嘧啶進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)室合成、純化和結(jié)構(gòu)測(cè)定，并對(duì)4羥基2甲氧基6甲基嘧啶的合成工藝進(jìn)行了優(yōu)化。這對(duì)下一步的抗流感活性測(cè)試和藥物的篩選均具有十分重要的意義。

簡(jiǎn)介：第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文HIF1Α及MDR1MIRNA重組慢病毒干擾體系逆轉(zhuǎn)結(jié)腸癌細(xì)胞多藥耐藥的研究姓名丁震宇申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師梁后杰20080501第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文方法1、通過免疫組織化學(xué)染色及免疫熒光雙標(biāo)染色技術(shù)觀察結(jié)腸癌組織標(biāo)本中HIF一10【與PGP的表達(dá)和分布情況，了解二者在結(jié)腸癌組織中表達(dá)的關(guān)系及與腫瘤分期、淋巴轉(zhuǎn)移等臨床病理參數(shù)的關(guān)系。2、采用免疫細(xì)胞化學(xué)染色及RTPCR技術(shù)分別在常氧及低氧培養(yǎng)條件下檢測(cè)四種結(jié)腸癌細(xì)胞株中HIF一10T與MDRL／PGP的表達(dá)變化情況，初步探討腫瘤低氧微環(huán)境對(duì)HIFLA及MDRL／PGP表達(dá)的影響及二者表達(dá)的變化關(guān)系。3、設(shè)計(jì)合成分別針對(duì)靶基因HIF一1Q與MDRL的各2組PREMIRNA干擾序列，構(gòu)建帶有報(bào)告基因EMGFP的PCDNATM62一GW／EMGFPMIRHIF一10【及PCDNATM62一GW／EMGFPMIRMDRL兩套干擾質(zhì)粒，雙酶切及測(cè)序鑒定質(zhì)粒構(gòu)建成功后，應(yīng)用脂質(zhì)體LIPOFECTAMINEⅢ2000分別介導(dǎo)兩套MIR干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染LOVO細(xì)胞，經(jīng)殺稻瘟菌素篩選穩(wěn)定陽(yáng)性克隆，利用半定量RTPCR技術(shù)檢測(cè)兩種干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后相應(yīng)目的基因MRNA表達(dá)抑制情況，分析其干擾效果及兩種靶基因可能的作用關(guān)系，從而在備選的4組PREMIRRNA干擾序列中挑選出分別針對(duì)靶基因HIF一10T與MDRL干擾效果最佳的1組進(jìn)行下游MIR慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建。4、選取上一部分鑒定出的干擾效果最佳的兩組MIR干擾質(zhì)粒，應(yīng)用GATEWAY重組反應(yīng)技術(shù)構(gòu)建分別針對(duì)靶基因HIF一10T與MDRL的兩套MIR慢病毒表達(dá)克隆PLENTI6／V5一GW／EMGFPMIRHIF一1U與PLENTI6／V5一GW／EMGFPMIRMDR1，應(yīng)用脂質(zhì)體LIPOFECTAMINE。M2000介導(dǎo)法，共轉(zhuǎn)染VIRAPOWERTM混和慢病毒包裝質(zhì)粒體系入293FT細(xì)胞產(chǎn)毒，產(chǎn)毒上清經(jīng)感染NIH／3T3細(xì)胞進(jìn)行滴度測(cè)定。而后將HIF1A與MDRL兩套MIR重組慢病毒干擾體系分別感染LOVO細(xì)胞，經(jīng)殺稻瘟菌素穩(wěn)定篩選后，利用半定量RTPCR及WESTERNBLOT技術(shù)分別檢測(cè)干擾后HIF一10T與MDRL基因MRNA及蛋白的表達(dá)變化情況，并進(jìn)一步在蛋白水平分析兩種基因可能存在的作用關(guān)系。5、采用三維培養(yǎng)的方法分別建立穩(wěn)定感染HIF一1Q或MDRLMIR重組慢病毒及親本LOVO細(xì)胞的多細(xì)胞球MCS培養(yǎng)體系，經(jīng)低氧培養(yǎng)處理，模擬體內(nèi)腫瘤細(xì)胞微環(huán)境，以建立體外經(jīng)低氧誘導(dǎo)的LOVOMCS耐藥模型，并采用流式細(xì)胞術(shù)分別檢測(cè)各組LOVOMCS的細(xì)胞周期分布情況；隨后利用WESTERNBLOT技術(shù)檢測(cè)HIFLOT及MDRLMIR慢病毒干擾體系在低氧誘導(dǎo)的LOVOMCS水平對(duì)相應(yīng)目的基因的沉默效果并與常氧培養(yǎng)的正常LOVOMCS中目的基因蛋白表達(dá)情況作比較。6、應(yīng)用MTT法檢測(cè)親本LOVOMCS分別在常氧培養(yǎng)及低氧處理后對(duì)ADR、VCR、5一FU和CPT11四種藥物化療敏感性的變化，并在低氧誘導(dǎo)的LOVOMCS多藥耐藥模

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多小柴胡加減方對(duì)流感病毒感染小鼠免疫調(diào)節(jié)作用及其對(duì)肺組織的保護(hù)作用.pdf精彩內(nèi)容。

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簡(jiǎn)介：山東大學(xué)博士學(xué)位論文慢病毒介導(dǎo)的HIF1Α基因沉默對(duì)不同P53狀態(tài)纖維肉瘤細(xì)胞放、化療乏氧抵抗的影響及作用機(jī)制研究姓名郝靜申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)血液病學(xué)（腫瘤放射治療）指導(dǎo)教師于金明20070515山東大學(xué)博士學(xué)位論文慢病毒介導(dǎo)的HIFLCT基因沉默對(duì)不同P53狀態(tài)纖維肉瘤細(xì)胞放、化療乏氧抵抗的影響及作用機(jī)制研究博士研究生郝靜導(dǎo)師于金明專業(yè)；血液學(xué)腫瘤放射治療中文摘要乏氧為實(shí)體腫瘤中較普遍的現(xiàn)象和微環(huán)境最重要的特征之一，包括急性乏氧和慢性乏氧，其產(chǎn)生主要與與腫瘤無(wú)限制生長(zhǎng)、氧耗增加、血供不足及腫瘤組織血管發(fā)育不良等有關(guān)。研究表明，乏氧與腫瘤放射治療抵抗、藥物抵抗及不良預(yù)后密切相關(guān)，其中乏氧誘導(dǎo)因子．1ⅡHYPOXIAINDUCIBLEFKTOR．1A，HIF．1A作為最重要的轉(zhuǎn)錄因子，可介導(dǎo)多種包括與促血管生成、糖酵解、抗凋亡等基因的表達(dá)，阻斷其信號(hào)傳導(dǎo)途徑成為目前靶向治療的熱點(diǎn)【HL。由于腫瘤內(nèi)部存在著復(fù)雜的微環(huán)境．基因的交互作用，HIF．1A作為克服乏氧所致的放、化療抵抗的靶點(diǎn)是否依賴于腫瘤的基因背景尚不清楚。特別是近年來，研究表明HIF．1A和P53存在著重要的交互作用【5刪，由于HIF．1D見于70％以上的腫瘤原發(fā)及轉(zhuǎn)移病灶，P53突變見于50／O以上的腫瘤3T,551，HIF．1A與不同功能狀態(tài)的P53之間的相互作用其潛在的病理生理學(xué)意義應(yīng)具有普遍性，對(duì)腫瘤HIF．1A靶點(diǎn)治療的影響意義重大。HIF．1由HIF．1A和HIF1LJ亞基構(gòu)成的異二聚體。HIFLIJ，又稱為芳烴受體核轉(zhuǎn)位蛋白ARYLHYDROCARBONRECEPTORNUCLEARTRANSLOCATOR,ARNT，在正常與乏氧情況下均持續(xù)表達(dá)。HIF．1作用主要由HIF．1A的表達(dá)和活性決定的，其調(diào)控主要發(fā)生在轉(zhuǎn)錄后蛋白水平上，受到微環(huán)境中氧濃度的精細(xì)調(diào)控。正常氧分壓下，HIF．1A與抑癌基因VHLVONHIPPELLINDAU結(jié)合。通過泛素蛋白酶途徑被迅速降解，半衰期僅有5MINS，故可作為急性乏氧標(biāo)記物。而乏氧狀態(tài)下，HIF．1ET蛋白表達(dá)顯著增加，降解被阻斷，與H_IF．1B結(jié)合形成HIF．1，并被轉(zhuǎn)移入細(xì)胞核內(nèi)，調(diào)控下游基因的表達(dá)。盡管臨床資料顯示HIF．1N表達(dá)與實(shí)體腫瘤不良預(yù)后、放化療抵抗有關(guān)，但目前對(duì)HIF．1Ⅱ在腫瘤放、化療抵抗中是否及如何發(fā)揮作用結(jié)論不一致，體外實(shí)驗(yàn)選擇的細(xì)胞株P(guān)53狀態(tài)不同可能是其中一重要因素。目前僅MOILER【13】的研究探討了HIF一1表達(dá)下調(diào)對(duì)放療敏感性的影響與P53的關(guān)系，結(jié)果表明抑制HIF．I可降低而不是提高體外放射敏感性，且該作用依賴于P53正常功能狀態(tài)。相反，P53表達(dá)缺失的細(xì)胞株HIF．1的表達(dá)與放射敏感性

簡(jiǎn)介：第一部分兔抗豬內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒P15E多克隆抗體的制備研究背景和目的豬器官、組織和細(xì)胞作為臨床移植的供體源具有廣泛和良好的應(yīng)用前景，可緩解臨床器官移植的器官相對(duì)短缺也可為臨床治療1型胰島素依賴型糖尿病，帕金森病、亨廷頓病和癲痛病等頑固性神經(jīng)疾患提供一種治療方法。豬肝細(xì)胞也可作為豬肝細(xì)胞型生物人工肝的生物成分治療急性爆發(fā)性肝炎肝功能衰竭和終末期肝功能衰竭的過渡性措施。自DRCLIVEPATIENEEBIOTRANSPLANTXNC首席科學(xué)家1997年報(bào)道豬內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒PCINEENDOGENOUSRETROVIRUS，PERV感染體外培養(yǎng)人源細(xì)胞以來，豬異種移植或豬肝細(xì)胞型生物人工肝治療過程中可能發(fā)生PERV種間傳播的潛在危險(xiǎn)引起眾多學(xué)者的廣泛關(guān)注。PATIENCE等首先證實(shí)至少有三種PERV亞型在體外培養(yǎng)能夠感染人源細(xì)胞，TAKEUCHI和MARTIN等也證實(shí)PERV可以感染體外培養(yǎng)的人源細(xì)胞株。1998年，DENNERJ等報(bào)道逆轉(zhuǎn)錄病毒的一個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白即跨膜蛋白P15E是一個(gè)活性成分，在體內(nèi)和體外可以抑制免疫反應(yīng)P15E的檢測(cè)可以作為檢測(cè)PERV表達(dá)及其是否具有感染性的一個(gè)診斷指標(biāo)。國(guó)內(nèi)及國(guó)際抗體市場(chǎng)上并未見應(yīng)用于檢測(cè)PERVP15E的特異性抗體，本研究在國(guó)外報(bào)道的PERVP15E抗原位點(diǎn)的基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)并制作了兔抗豬PERVP15E多克隆抗體，該抗體用于檢測(cè)PERVP15E在蛋白方面的表達(dá)水平具有很高的靈敏度及特異性。該抗體的研發(fā)，對(duì)檢測(cè)臨床器官移植和豬肝細(xì)胞型生物人工肝中PERV的表達(dá)和傳播具有重要意義。方法根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)告獲得了PERVP15E抗原表位E1和E2蛋白序列，再根據(jù)其蛋白序列反推獲得了P15EE1和E2的核酸序列。P15E核酸序列最小長(zhǎng)度317BP，為增強(qiáng)其抗原性以及表位的完整性，我們將P15E前方100BP核酸序列一起擴(kuò)增，通過PCR擴(kuò)增方法擴(kuò)增得到了P15E編碼區(qū)序列，然后將其連接到PGEX4T1載體上，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21DE3中，再通過自身誘導(dǎo)法誘導(dǎo)表達(dá)重組質(zhì)粒的融合蛋白通過割膠回收純化融合蛋白。免疫新西蘭大白兔制備多克隆抗體，WESTERNBLOT和ELISA檢測(cè)抗體活性和滴度。結(jié)果兔抗豬PERVP15E多克隆抗體可以特異性檢測(cè)P15E抗原蛋白以及豬腎細(xì)胞系PK15中P15E蛋白的表達(dá)，而人腎細(xì)胞系HEK293中則檢測(cè)不到該蛋白表達(dá)，證實(shí)本抗體特異性強(qiáng)。ELISA檢測(cè)兔抗豬PERVP15E多克隆抗體滴度效價(jià)達(dá)到了1100，000。結(jié)論本研究所獲得的兔抗豬PERVP15E多克隆抗體不僅效價(jià)高，而且特異性強(qiáng)，可以作為檢測(cè)臨床器官移植和豬肝細(xì)胞型生物人工肝中PERV表達(dá)和傳播的重要工具。

簡(jiǎn)介：蘇州大學(xué)碩士學(xué)位論文反復(fù)短暫性腦缺血發(fā)作對(duì)認(rèn)知功能累積性損傷的臨床研究姓名何川申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)精神病學(xué)與精神衛(wèi)生學(xué)指導(dǎo)教師吳愛勤20080501反復(fù)短暫性腦缺血發(fā)作對(duì)認(rèn)知功能累積性損傷的I臨床研究中文摘要于BA組，而BA組的DST成績(jī)低于IC組。5直線回歸方程顯示IC組MMSE總分和P300潛伏期隨發(fā)作次數(shù)變化的斜率大于BA組。結(jié)論1TIA患者存在抽象思維、注意、短時(shí)記憶、執(zhí)行操作功能等方面的認(rèn)知功能損害2TIA所導(dǎo)致的認(rèn)知功能損害不會(huì)隨著神經(jīng)系統(tǒng)缺損癥狀同步緩解，而呈稽延性損害，隨著發(fā)作次數(shù)的增加，各次TIA所引起的認(rèn)知損害呈現(xiàn)累積效應(yīng)。3TIA發(fā)作可能成為老年認(rèn)知功能減退的重要病因，老年認(rèn)知功能減退和老年癡呆癥AD之間密切相關(guān)，TIA也可能和AD之間存在著一定的病因?qū)W聯(lián)系。4頸內(nèi)動(dòng)脈TIA發(fā)作后在操作執(zhí)行能力、語(yǔ)言功能、計(jì)算力和注意力、抽象思維等方面的認(rèn)知功能損害比較突出，而基底動(dòng)脈11A僅在短時(shí)記憶、即刻回憶的損害較明顯，頸內(nèi)動(dòng)脈TIA后總體認(rèn)知功能狀況隨發(fā)作次數(shù)增加而損害的程度高于基底動(dòng)脈TIA，頸內(nèi)動(dòng)脈TIA發(fā)生認(rèn)知功能損害的易感性更高。關(guān)鍵詞短暫性腦缺血發(fā)作認(rèn)知功能P300MCI累積性損害Ⅱ作者何川指導(dǎo)老師吳愛勤

簡(jiǎn)介：本實(shí)驗(yàn)用DV2感染真皮微血管來源的HMEC1和來源于人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的ECV304細(xì)胞株，檢測(cè)DV2在兩種內(nèi)皮細(xì)胞中的增殖規(guī)律，病毒感染后細(xì)胞表面整合素的表達(dá)及功能的變化，以及細(xì)胞表面的整合素在DV2感染中的作用，探討DV2感染與VEC相互作用的分子機(jī)制。主要的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下1DV2感染可以上調(diào)整合素Β在HMEC1和ECV304細(xì)胞中的表達(dá)首先，采用流式細(xì)胞技術(shù)，檢測(cè)DV2感染的HMEC1及ECV304細(xì)胞表面的整合素Β和Β的表達(dá)，樣品的平均熒光強(qiáng)度代表了整合素的表達(dá)量。在整合素Β的檢測(cè)中，HMEC1感染后24HR，感染組平均熒光強(qiáng)度略高于對(duì)照組，隨著感染時(shí)間的延長(zhǎng)，樣品的平均熒光強(qiáng)度逐漸增加，在感染后72HR達(dá)到峰值，是對(duì)照組的254倍P在HMEC1中的表達(dá)。整合素Β的表達(dá)量于感染前后沒有明顯變化。ECV304細(xì)胞感染后，整合素Β和Β呈現(xiàn)了與HMEC1相似的變化趨勢(shì)。用感染復(fù)數(shù)MOI為1的病毒量感染HMEC1時(shí)，上清中的病毒量于感染后72HR達(dá)峰值，為1610PFUML。這與感染后整合素Β高表達(dá)的時(shí)相點(diǎn)一致，提示DV2對(duì)細(xì)胞的感染可能誘導(dǎo)了整合素Β的表達(dá)。同時(shí)，我們用實(shí)時(shí)定量REALTIMERTPCR的方法檢測(cè)整合素Β的MRNA水平。利用2的分析方法分析，整合素Β的MRNA水平在DV2感染HMEC1后逐漸升高，在感染后72HR達(dá)到峰值，是對(duì)照組的1448倍P的表達(dá)。我們的結(jié)果與RAYMOND等在漢坦病毒的研究結(jié)果一致，RAYMOND等研究發(fā)現(xiàn)致病性漢坦病毒可以選擇性抑制整合素Β直接介導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞移行，流式細(xì)胞分析顯示整合素Β的表達(dá)量明顯升高。其原因目前尚不清楚，但我們知道整合素Β是細(xì)胞表面的一種糖蛋白受體，通過與細(xì)胞外基質(zhì)的親和力的變化，控制細(xì)胞的粘附和移行。整合素Β3正常的生理功能的發(fā)揮有賴于這種受體與配體結(jié)合解離的平衡。所以兩種出血熱病毒均可引起整合素Β的表達(dá)量升高，而臨床上卻表現(xiàn)為出血、血漿滲出，這一看似矛盾的現(xiàn)象可能是由于整合素Β過量表達(dá)，引起了細(xì)胞粘附與移行這一平衡的紊亂，造成血管通透性變化所致。DV2感染上調(diào)整合素的表達(dá)對(duì)整合素Β功能的影響有待進(jìn)一步研究。對(duì)于DV2感染后整合素表達(dá)上調(diào)的分子機(jī)制，我們也做了初步的研究。蛋白質(zhì)的MRNA水平高，一般由兩方面因素決定，一是啟動(dòng)子活性增強(qiáng)，轉(zhuǎn)錄水平增高；二是MRNA降解減緩，導(dǎo)致的MRNA半衰期的延長(zhǎng)。對(duì)于前者比較容易確定，本實(shí)驗(yàn)即用整合素啟動(dòng)子系列報(bào)告基因載體PGL31K和PGL313K，檢測(cè)DV2感染后整合素表達(dá)上調(diào)是否由于整合素啟動(dòng)子活性增強(qiáng)，轉(zhuǎn)錄水平增高造成的。3次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示，無(wú)論是ECV304細(xì)胞還是VERO細(xì)胞，DV2感染后各時(shí)相點(diǎn)，整合素啟動(dòng)子的活性均沒有明顯的變化。那么整合素表達(dá)量的變化，可能是病毒感染導(dǎo)致的MRNA降解減緩，MRNA半衰期的延長(zhǎng)造成的，其中具體的作用機(jī)制還需要進(jìn)一步證明。2免疫熒光染色顯示HMEC1中整合素Β與DV2的E蛋白共存用整合素Β的單克隆抗體與DV2E蛋白的抗體對(duì)DV2感染后的HMEC1進(jìn)行免疫熒光雙染色。未感染的HMEC1用整合素Β的單克隆抗體染色，呈現(xiàn)較弱的熒光。感染后24HR熒光的強(qiáng)度無(wú)明顯變化，隨著感染時(shí)間的延長(zhǎng)，整合素Β抗原的熒光強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)，在感染后48HR和72HR，細(xì)胞均呈現(xiàn)較強(qiáng)的熒光。整合素Β抗原主要分布在核周和細(xì)胞膜上，與細(xì)胞內(nèi)的DV2E蛋白抗原有明顯的共存。利用ECV304細(xì)胞，實(shí)施相同的感染實(shí)驗(yàn)，所得結(jié)果與HMEC1一致。整合素Β抗原在感染前后的熒光強(qiáng)度沒有明顯變化，提示整合素Β可能與DV2的感染過程密切相關(guān)。3阻斷整合素ΑVΒ的功能可部分的抑制DV2進(jìn)入HMEC1和ECV304細(xì)胞本實(shí)驗(yàn)先用整合素Β，ΑV，ΑVΒ的功能阻斷抗體分別可以抑制30％38％的DV2進(jìn)入HMEC1。100ΜGML的FN和VTN的阻斷效率分別為32％和23％N3。整合素Β的功能阻斷抗體，牛血清白蛋白BSA以及正常小鼠的IGG1在相應(yīng)的濃度下均未出現(xiàn)阻斷效果。利用ECV304細(xì)胞，實(shí)施相同的感染進(jìn)入阻斷實(shí)驗(yàn)，所得結(jié)果與HMEC1一致。提示整合素Β在DV2進(jìn)入細(xì)胞的過程中可能發(fā)揮比較重要的作用。4可溶性整合素ΑVΒ可以有效的阻斷DV2進(jìn)入HMEC1和ECV304細(xì)胞為進(jìn)一步證明整合素ΑVΒ在介導(dǎo)DV2進(jìn)入內(nèi)皮細(xì)胞中的特異性作用，在實(shí)施DV2感染實(shí)驗(yàn)之前，先用可溶性的整合素ΑVΒ或ΑVΒ與病毒孵育。可溶性的整合素ΑVΒ可以有效的阻斷DV2的感染，其阻斷作用具有劑量依賴特性。在25ΜGML的濃度下，僅出現(xiàn)部分阻斷作用，當(dāng)濃度達(dá)到10ΜGML時(shí)，阻斷率幾乎可達(dá)100％。而可溶性整合素ΑVΒ5在10ΜGML的濃度時(shí)僅僅可以阻斷約23％的病毒感染N3。BSA則幾乎沒有阻斷作用。結(jié)果提示整合素ΑVΒ可能特異性的與DV2相互作用，從而阻斷病毒感染細(xì)胞。5RNA干擾方法下調(diào)整合素Β的表達(dá)，可降低DV2的感染率為進(jìn)一步證實(shí)整合素ΑVΒ是否為DV2進(jìn)入宿主細(xì)胞所必需的，我們用RNA干擾的方法下調(diào)整合素Β的表達(dá)。構(gòu)建特異性針對(duì)人整合素Β的干擾質(zhì)粒P1262和P1932，轉(zhuǎn)染ECV304細(xì)胞后48HR用流式細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測(cè)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的干擾效果轉(zhuǎn)染干擾質(zhì)粒的細(xì)胞平均熒光強(qiáng)度均比對(duì)照組轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒PSLIENSER有明顯下降，提示本次構(gòu)建的干擾質(zhì)粒確實(shí)可以降低整合素Β的表達(dá)水平。在此基礎(chǔ)上，我們通過G418，篩選了低表達(dá)整合素Β的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株。經(jīng)過2輪篩選，共得到5個(gè)細(xì)胞克隆，其中轉(zhuǎn)染P1262的有兩株G6，F(xiàn)8，轉(zhuǎn)染P1932的有三株91，F(xiàn)10，G10，流式細(xì)胞計(jì)數(shù)顯示G6中整合素Β的表達(dá)水平下降最為明顯，僅為對(duì)照組的38％。我們將G6克隆命名為ECVΒ。利用上述細(xì)胞株進(jìn)行DV2感染實(shí)驗(yàn)，與對(duì)照組相比，在ECVΒ中，DV2的感染率下降了89％，提示整合素Β可能是DV2進(jìn)入ECV304細(xì)胞所必需的。6在CHOK1細(xì)胞中重建整合素Β受體可以提高DV2的感染率CHOK1是來源于中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢上皮的細(xì)胞系，常用于異源整合素的表達(dá)。用DV2感染CHOK1細(xì)胞后不同時(shí)相點(diǎn)取培養(yǎng)上清，進(jìn)行病毒滴度測(cè)定，發(fā)現(xiàn)病毒在CHOK1中的增殖滴度較低，最高滴度為16510PFUML。而ECV304細(xì)胞或VERO細(xì)胞，在相同的感染條件下，DV2的最高滴度可達(dá)13410PFUML和110PFUML。本實(shí)驗(yàn)將表達(dá)人整合素Β的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染CHOK1細(xì)胞，用G418篩選單克隆細(xì)胞，通過流式細(xì)胞檢測(cè)，建立了穩(wěn)定表達(dá)整合素Β的CHOK1細(xì)胞。利用該細(xì)胞株進(jìn)行感染實(shí)驗(yàn)，觀察了人整合素Β穩(wěn)定表達(dá)的CHOK1對(duì)DV2易感性的變化。與轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的對(duì)照組CHOK1細(xì)胞相比，發(fā)現(xiàn)DV2進(jìn)入穩(wěn)定表達(dá)整合素Β的CHOK1細(xì)胞株的病毒量有所增高，增高的比例與整合素Β的表達(dá)增高趨勢(shì)基本一致，進(jìn)一步說明了整合素ΑVΒ在DV2感染過程有重要作用。CHOF8細(xì)胞是所篩選到的整合素Β表達(dá)最高的細(xì)胞克隆，感染后0HR進(jìn)入細(xì)胞中的病毒為510PFU，而相同的感染條件下進(jìn)入ECV304細(xì)胞或VERO細(xì)胞的病毒可達(dá)510PFU。因此認(rèn)為，整合素Β是DV2進(jìn)入內(nèi)皮細(xì)胞所必需的蛋白，但不是惟一的蛋白，若要確定還有哪些蛋白參與了DV2進(jìn)入內(nèi)皮細(xì)胞的過程，尚需要進(jìn)一步研究。綜合上述結(jié)果，DV2感染可以誘導(dǎo)整合素Β高水平的表達(dá)，整合素Β的表達(dá)上調(diào)可能有助于病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞。本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果為揭示整合素Β在DV感染的病理過程中的作用提供了重要的理論基礎(chǔ)。對(duì)于整合素Β與病毒蛋白的結(jié)合位點(diǎn)以及DV2感染上調(diào)整合素Β的分子機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

簡(jiǎn)介：復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文提高重組桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)的表達(dá)量和特異性的研究姓名張靜申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)微生物學(xué)指導(dǎo)教師鐘江20060527復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文提高重組桿裝病毒的表達(dá)量和特異性的研究摘要重組昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)RECOMBINANTBACULOVIRUSEXPRESSIONSYSTEM在昆蟲細(xì)胞中由于具有表達(dá)量高，不易形成包涵體，有一定的轉(zhuǎn)錄后修飾等優(yōu)點(diǎn)，已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于真核蛋白的表達(dá)。起初，人們以為桿狀病毒只能感染昆蟲鱗翅目家族的成員，然而在1983年VOLKMAN和GOLDSMITH首次發(fā)現(xiàn)了桿狀病毒也可以進(jìn)入脊椎動(dòng)物細(xì)胞。這一革命性的報(bào)道從此揭開了桿狀病毒作為哺乳動(dòng)物細(xì)胞基因轉(zhuǎn)移載體的研究?，F(xiàn)在已有的文獻(xiàn)證明桿狀病毒可以感染多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞，尤其是對(duì)肝細(xì)胞具有較強(qiáng)的偏好性。其具體的進(jìn)入途徑雖然還不是十分明了，不過研究顯示是和細(xì)胞非特異性的胞吞作用相關(guān)。桿狀病毒作為哺乳動(dòng)物細(xì)胞基因轉(zhuǎn)移的載體有很多獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)。譬如安全性好，不能復(fù)制傳代；對(duì)外源基因的容量大，其核衣殼至少可以容納LOOKB的外源基因；毒副作用小，即使在高M(jìn)OI感染時(shí)也不會(huì)引起細(xì)胞毒性。鑒于桿狀病毒對(duì)于肝細(xì)胞較高的感染率，一些試圖將桿狀病毒改造成肝細(xì)胞特異性基因表達(dá)載體的研究已有所報(bào)道。例如在重組桿狀病毒表達(dá)框中引入肝癌細(xì)胞特異性甲胎蛋白AFP的啟動(dòng)子和增強(qiáng)子，以此將外源基因選擇性的導(dǎo)入肝癌細(xì)胞中。但是桿狀病毒作為真核細(xì)胞基因轉(zhuǎn)移的載體還有一些自身無(wú)法克服的缺點(diǎn)。如在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中不能復(fù)制，引入的外源基因表達(dá)量不高等問題。本試驗(yàn)設(shè)計(jì)的目的就在于改造重組桿狀病毒表達(dá)載體，以期能提高外源基因的表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)選用了AFP增強(qiáng)子ENHANCER和HS4絕緣子INSULATOR兩個(gè)調(diào)控元件，以及綠色熒光蛋白GFP報(bào)告基因來構(gòu)建重組桿狀病毒。其中綠色熒光蛋白表達(dá)框?yàn)镃MV和P10雙啟動(dòng)子。雙啟動(dòng)子便于在昆蟲細(xì)胞中篩選重組病毒。選用AFPENHANCER一方面是為了維持其肝癌細(xì)胞特異性另一方面是為了提高GFP的表達(dá)。選用HS4INSULATOR是因?yàn)楸緦?shí)驗(yàn)室已有的研究發(fā)現(xiàn)通過添加和表觀遺傳學(xué)修飾相關(guān)的酶的化學(xué)抑制劑可以提高重組桿狀病毒在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的表達(dá)量。而

簡(jiǎn)介：本研究從面孔呈現(xiàn)模式、面孔刺激方位、面孔種族特征三個(gè)方面，分別選取其各自有代表性的層面設(shè)計(jì)出三個(gè)實(shí)驗(yàn)，目的在于揭示面孔識(shí)別中的某些特性，研究場(chǎng)認(rèn)知方式對(duì)面孔識(shí)別的影響。實(shí)驗(yàn)一通過對(duì)三種呈現(xiàn)模式全臉既包括外部特征又包括內(nèi)部特征、外部特征臉和內(nèi)部特征臉的比較，研究在不同呈現(xiàn)模式下，不同場(chǎng)認(rèn)知方式的被試識(shí)別面孔的差異。實(shí)驗(yàn)二通過對(duì)兩種刺激方位正立和倒立面孔的比較，研究不同場(chǎng)認(rèn)知方式的被試在識(shí)別正立、倒立面孔時(shí)的差異。實(shí)驗(yàn)三把目標(biāo)面孔分為東方人面孔和西方人面孔兩類，結(jié)合被試的性別、場(chǎng)認(rèn)知方式，比較其在面孔識(shí)別中的差異。

簡(jiǎn)介：APROJECTREPORTONTHETRANSLATIONCHAPTERFIVEBYZHANGJINGUNDERTHESUPERVISIONOFASSOCIATEPROFESSORZHANGHONGXIAMSWANGXIAOMEIATHESISSUBMITTEDINPARTIALFULFILLMENTOFTHEREQUIREMENTSFORTHEDEGREEOFMASTEROFTRANSLMIONANDINTERPRETATIONINTHESCHOOLOFFOREIGNSTUDIESOFANHUIUNIVERSITYMAY，2015摘要本文是一篇翻譯項(xiàng)目報(bào)告。翻譯項(xiàng)目的原文選自于威廉克羅夫特與D艾倫克魯斯所著的認(rèn)知語(yǔ)言學(xué)COGNITIVELINGUISTICS，CROFTCRUSE，2004一書。該書主要介紹了認(rèn)知語(yǔ)言學(xué)的基本原則和基本方法。譯者選取了該書第五章“多義詞意義邊界的識(shí)解”這一主題章節(jié)來進(jìn)行翻譯實(shí)踐活動(dòng)，并在此基礎(chǔ)上完成項(xiàng)目報(bào)告。作為一本學(xué)術(shù)著作，原文文本明顯屬于信息型文本。對(duì)于信息型文本的翻譯，首先要注重的是保持原文和譯文在語(yǔ)義上的對(duì)等。因此在本次翻譯實(shí)踐過程中，譯者翻譯工作的重點(diǎn)是如何正確完整地以中文傳達(dá)出與原文相同的概念。為了解決這一問題，譯者在翻譯實(shí)踐過程中選取了諾德的文本分析模式作為理論指導(dǎo)，首先確定此次翻譯活動(dòng)的類型屬于工具型翻譯，翻譯目標(biāo)是保證譯文和原文實(shí)現(xiàn)語(yǔ)義上的對(duì)等。在結(jié)合實(shí)例的基礎(chǔ)上運(yùn)用了詞類轉(zhuǎn)譯法、增詞法和減詞法等具體方法，來對(duì)翻譯實(shí)踐中的問題進(jìn)行具體的分析。譯者在本次翻譯實(shí)踐中得到了以下幾點(diǎn)啟示，首先要重視理論的指導(dǎo)，其次是做好譯前準(zhǔn)備工作，查閱相關(guān)平行文本，最后譯者還要熟悉掌握源語(yǔ)和譯語(yǔ)的語(yǔ)言特點(diǎn)，這樣才能在以后的翻譯工作中取得良好的成績(jī)。關(guān)鍵詞認(rèn)知語(yǔ)言學(xué)；翻譯理論；文本分析方法；翻譯策略

簡(jiǎn)介：天津師范大學(xué)碩士學(xué)位論文密碼子優(yōu)化的輪狀病毒VP6蛋白在煙草中的高效表達(dá)姓名張富杰申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)植物學(xué)指導(dǎo)教師劉麗麗20080401ROTAVIMSRVISTHEMOSTIMPONANTANDCOMMONCAUSEOFSEVEFEDIA玎HEAININ協(xié)1TS，CHILDRENANDINF抽CY柚IMALWORLDWIDE．INDEVELOPINGCOUNTRIES，ROTAVI九LSMAYCAUSEANESTIMATED18MILLIONCASESOFMODERATELYSEVERE鋤DSEVEREDIA玎HEA鋤DOVER870000DEATHSINTHEYOUNGEACHYEALINDCVELOPEDCOUNTRIES，F(xiàn)OTAVIMSMAYRESULTEDINSUBSTANTIALECONOMICALDAMAGE．FBREXAMPLE，MEDICALEXPENDITUI．EASSOCIATEDWITHROTAVIRUSMAYREACH260000000EACHYEAR，INTHEUNITEDSTATES．BECAUSEOFSIGNIFIC柚TMOFBIDITYANDMORTALITYASSOCIATEDWITHROTAVIMSDIAN．HEA，THEREISA11UFGENTNEEDTODEVELOPROTAVINLSVACCINESTA瑪ETEDFORUSEINEALLYINFANCY．CURRENTLY．PLANTREACTORSYSTEMISCHEAPANDSAFEBIOSYSTEM．WITHTHEDEVELOPMENT0FTHEMOLECULARBIOLOGY；ANDESPECIAUYTHEFASTSTEPOFPLANTGENETICENGINEERING，PEOPLECANREBUILDTHEPLANTINTHEIROWNOPINIONS，ANDCANPRODUCEMANYKINDSOFPRODUCTNEEDEDINPRODUCTION鋤DLIFECHEAPLY柚DE確CIENTLY．TILLECONCEPTOFPLANTREACTOR’柚DESPECIALLYTHECONCEPTOFPRODUCING0佑CINALPROTEINANDENZYMEWITHPL鋤TANDUSINGPLANTDIRECTLYASTLLEORALVACCINE，IS黟ADUALLYRECO薩IZED觚DAACI印TEDBYHUMANBEING．INTHISEXPERIMENT，WECHOSETOBACC0T0PRODUCEVP6PROLEIN．THECODON0PTIMIZEDVP6GENEWASINSERTINTOPLASMIDPBLL21INT，ANDTHEPLANTTRANSFONNATIONVECTORPBLL21一V6UWASCONSTMCTEDTOEXPRESSTHEVP6PROTEIN．BYUSINGTHELEAFDISCC0．CLLLTIVATEDMETHOD，VP6GENEOFROTAVIMSWASTRANSFELLREDINTOTOBACCOCELLRESPECTIVELY11RANSFO砷EDSHOOTSWERESELECTEDONSOLIDIFIEDMEDIUMCONTAINING10蛐AMYCIN．INTE伊ATIONOFTHESEGENESINTOTHEGENOMEOFTOBACCOPLANTSWASCONFIN_ILEDBYPCR．ANDTHESERESULTSINDICATEDTHATTHEVP6WASINLEGRATEDINTOTHETOBACCOGENOMICDNA．THEWESTEMB10TRESULTSHOWEDTHATTHEPROTEINWASEXPRESSEDE位CIENTLY．T11ISRESEARCHPROVIDESANEWMETHODFORNEWROTAVIRUSVACCINE，WLLICHPRESENTSTHEORICALSIGNIFICANCEANDAPPLICATIVEPROSPECT．KEYWORDSCODONOPTIMIZATION，ROTAVIRUSVP6，TRANSGENICTOBACCO，PLANTVACCLNE4

簡(jiǎn)介：ADISSERTATIONSUBMITTEDTOTHEGRADUATESCHOOLOFHENANUNIVERSITYINPARTIALFULFILLMENTOFTHEREQUIREMENTSFORTHEDEGREEOFMASTEROFMEDICINEBYCHENYANINGSUPERVISORPROF．HANSHUANGYINAPRIL，2012本人鄭果。據(jù)我所發(fā)表或撰寫使用過的材說明并表示在此本本人經(jīng)意河南大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的要求，即河南大學(xué)有權(quán)向國(guó)家圖書館、科研信息機(jī)構(gòu)、數(shù)據(jù)收集機(jī)構(gòu)和本校圖書館等提供學(xué)位論文紙質(zhì)文本和電子文本以供公眾檢索、查閱。本人授權(quán)河南大學(xué)出于宣揚(yáng)、展覽學(xué)校學(xué)術(shù)發(fā)展和進(jìn)行學(xué)術(shù)交流等目的，可以采取影印、縮印、掃描和拷貝等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文紙質(zhì)文本和電子文本。涉及保密內(nèi)容的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書學(xué)位獲得者學(xué)位論文作者簽名墮壁室攮須主皇學(xué)位論文指導(dǎo)教師簽名2012年4月26日2012年4月26日

簡(jiǎn)介：蘇州大學(xué)碩士學(xué)位論文帕金森病患者的認(rèn)知損害和睡眠障礙研究姓名陳靜申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師劉春風(fēng)20080401帕金森病患者的認(rèn)知損害和睡眠障礙研究中文摘要PO000呈正相關(guān)。與年齡P0571、病程PO887、文化程度PO860、MMSE分值PO151、UPDRSIII評(píng)分PO078無(wú)關(guān)。睡眠障礙組與無(wú)睡眠障礙組比較在主觀睡眠質(zhì)量F1、入睡時(shí)間F2、睡眠時(shí)間F3、睡眠效率F4、睡眠干擾F5、催眠藥物F6這六個(gè)因子間存在差異均為P0000，在日間功能障礙F7上無(wú)差異PO058。結(jié)論認(rèn)知損害和睡眠障礙是帕金森病患者重要的非運(yùn)動(dòng)癥狀，在疾病的不同階段均可以發(fā)生，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。關(guān)鍵詞帕金森病認(rèn)知損害睡眠障礙非運(yùn)動(dòng)癥狀作者陳靜指導(dǎo)老師劉春風(fēng)