簡(jiǎn)介：第一部分異丙景糖酐抗乙型肝炎病毒的體外實(shí)驗(yàn)研究。目的通過觀察異丙景糖酐作用后，HEPG2215細(xì)胞分泌HBV標(biāo)志物的變化，探討異丙景糖酐在體外條件下對(duì)乙型肝炎病毒HBV的復(fù)制是否有直接的抑制作用。方法以不同濃度的異丙景糖酐溶液作用于HEPG2215細(xì)胞72小時(shí)H，以恩替卡韋10ΜGML作為陽性對(duì)照，以不含任何藥物的胎牛血清培養(yǎng)基為陰性對(duì)照；分別于藥物作用后24H、48H、72H取培養(yǎng)上清，并于72H后提取細(xì)胞內(nèi)船VDNA。用ABBOT試劑盒檢測(cè)培養(yǎng)上清中HBSAGHBEAG的水平，用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)PCR法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)外HBVDNA水平，以MTT法檢測(cè)細(xì)胞成活率。結(jié)果濃度為10ΜGML、40ΜGML、100ΜGML的異丙景糖酐溶液作用于HEPG2215細(xì)胞72小時(shí)后，細(xì)胞成活率分別為9309％、9112％、8703％P＞005，組間比較無顯著差異，與陰性組比較亦無顯著差異。各用藥組培養(yǎng)上清中的HBSAG、HBEAG及細(xì)胞內(nèi)外HBVDNA水平較陰性組低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。用藥組之間比較，高濃度組上述指標(biāo)較低濃度組低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；HBSAG、HBEAG及細(xì)胞內(nèi)外HBVDNA的抑制率隨著藥物作用時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，高濃度組的抑制率高于低濃度組，藥物作用72H，各組10ΜGML、40ΜGML、100ΜGMLHBSAG的抑制率分別為343％、638％、1057％P0137；HBEAG的抑制率分別為56％、138％、192％P0660；細(xì)胞內(nèi)HBVDNA的抑制率分別為07％、24％、35％P0679，差異組間比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。陽性對(duì)照恩替卡韋作用72H，培養(yǎng)上清HBSAG、HBEAG及細(xì)胞內(nèi)外HBVDNA水平較陰性組有顯著下降。結(jié)論濃度為10ΜGML、40ΜGML、100ΜGML的異丙景糖酐溶液對(duì)HEPG2215細(xì)胞無毒性作用，對(duì)HEPG2215細(xì)胞表達(dá)分泌HBSAG、HBEAG及HBVDNA無明顯的抑制作用。第二部分異丙景糖酐抗乙型肝炎病毒的臨床研究目的研究異丙景糖酐治療HBEAGM性慢性乙型肝炎CHB患者的療效和安全性，并進(jìn)一步探討可能的抗HBV機(jī)制。方法將HBEAG陽性的CHB患者按1111隨機(jī)分配至異丙景糖酐200MG、400MG和800MG組及對(duì)照組甘露醇組。用藥組給予相應(yīng)劑量的異丙景糖酐，對(duì)照組給予800MG甘露醇，療程12周。觀察治療前后各組病毒學(xué)、生化學(xué)、血清學(xué)指標(biāo)和安全性指標(biāo)變化情況，血清細(xì)胞因子水平變化情況及不良反應(yīng)發(fā)生情況。結(jié)果治療12周后，異丙景糖酐800MG組的病毒應(yīng)答率為L(zhǎng)875％，400MG組和200MG組的病毒應(yīng)答率均為125％，組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。800MG組使HBVDNA水平平均下降096±141LOG10拷貝ML，治療前后有顯著性差異P00006；400MG組、200MG組和對(duì)照組HBVDNA水平分別平均下降028±092LOG10拷貝ML、048±119LOG10拷貝ML、027±084LOG10拷貝ML，組間和組內(nèi)比較均無顯著性差異。HBEAG陰轉(zhuǎn)率、ALT復(fù)常率組間比較均無顯著性差異。最高劑量異丙景糖酐800MG療程12周對(duì)患者無明顯不良影響。研究中報(bào)道的不良事件主要表現(xiàn)為慢性乙肝肝功能異常。本項(xiàng)研究有一例嚴(yán)重不良事件發(fā)生，但是位于安慰劑組。800MG組用藥后血清IFNΓ、TNFΑ、IL2水平較用藥前升高，但I(xiàn)FNΓ水平治療前后差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＞005，而TNFΑ、IL2水平治療前與治療后12周相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P0015；0023。其余各組治療后上述細(xì)胞因子水平均較治療前有所升高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＞005。比較各組治療12周與治療前各細(xì)胞因子水平的差值，800MG組IFNΓ、TNFΑ、IL2治療前后的差值均明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P0031，0003，0041。結(jié)論異丙景糖酐劑量為800MG時(shí)對(duì)HBV復(fù)制有一定抑制作用，并顯示了良好的安全性，抗病毒作用的發(fā)揮可能有賴于機(jī)體細(xì)胞免疫系統(tǒng)的激活。為了得到更多的有效性和安全性的資料，需要進(jìn)行擴(kuò)大樣本量的臨床試驗(yàn)。

簡(jiǎn)介：學(xué)校代碼10023學(xué)號(hào)200701021年齡相關(guān)性黃斑變性認(rèn)知度調(diào)查及其影響因素分析專業(yè)年級(jí)北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)2007級(jí)姓名張辰茜導(dǎo)師陳有信教授北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院臨床學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)院眼科完成日期2015年6月摘要目的評(píng)估我國北京地區(qū)公眾及年齡相關(guān)性黃斑變性AGERELATEDMACULARDEGENERATION，AMD患者對(duì)AMD疾病本身及其危險(xiǎn)因素的認(rèn)知情況，確定影響AMD認(rèn)知度的相關(guān)因素，為提高公眾對(duì)AMD的認(rèn)知提供理論及實(shí)踐依據(jù)，為AMD防治提供幫助。內(nèi)容根據(jù)受訪人群的不同，將研究?jī)?nèi)容主要分為兩部分1調(diào)查北京地區(qū)公眾對(duì)AMD及其危險(xiǎn)因素以吸煙為主的認(rèn)知情況，并與白內(nèi)障、青光眼的公眾認(rèn)知度作對(duì)比。分析受訪者人口統(tǒng)計(jì)學(xué)特征對(duì)AMD認(rèn)知度的影響。2調(diào)查普通眼科門診就診的AMD患者中對(duì)AMD及其危險(xiǎn)因素以吸煙為主的認(rèn)知情況，分析其人口統(tǒng)計(jì)學(xué)特征及臨床相關(guān)因素對(duì)AMD認(rèn)知度的影響。方法利用計(jì)算機(jī)輔助電話調(diào)查COMPUTERASSISTEDTELEPHONEINVESTIGATION，CATI對(duì)北京地區(qū)公眾的AMD認(rèn)知度進(jìn)行橫斷面研究。所有接觸者的聯(lián)系方式均由計(jì)算機(jī)系統(tǒng)自動(dòng)隨機(jī)生成并撥打。研究?jī)H納入自愿參與該項(xiàng)調(diào)查且年齡在18歲及以上的受訪者。在AMD患者認(rèn)知度方面，則采用方便抽樣的方式對(duì)2014年10月至2015年4月間就診于北京協(xié)和醫(yī)院眼科門診的AMD患者進(jìn)行問卷調(diào)查。本研究所用調(diào)查問卷是以2005年AMD國際聯(lián)盟全球認(rèn)知度報(bào)告為藍(lán)本制定，內(nèi)容包括’般人口學(xué)特征，醫(yī)療從業(yè)經(jīng)歷，眼部患病病史等，同時(shí)對(duì)AMD患者的臨床檢查信息進(jìn)行了收集。所有數(shù)據(jù)均以AMD認(rèn)知度為主體，用貯檢驗(yàn)和二分類LOGISTIC回歸進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果調(diào)查發(fā)現(xiàn)北京地區(qū)公眾對(duì)AMD的認(rèn)知度僅為68％，遠(yuǎn)低于公眾對(duì)白內(nèi)障278螄及青光FL艮166％的認(rèn)知。AMD患者對(duì)AMD的認(rèn)知度盡管達(dá)到了603％，但仍有一成左右121％的AMD患者表示對(duì)AMD完全不了解，且其中對(duì)AMD具有良好客觀認(rèn)知的患者也僅占四成397％。公眾中，年齡大于30歲0R617，CI1442657，有過醫(yī)療從業(yè)經(jīng)歷OR81L，CI3252027，或本人及親朋中有AMD患者的受訪者OR3218，CI11299168對(duì)AMD的認(rèn)知情況更好，而在AMD患者中，性別、教育程度、生活地域、患眼視力及患病時(shí)長(zhǎng)則與AMD認(rèn)知度顯著相關(guān)。在對(duì)AMD有所認(rèn)知的公眾及AMD患者中，分有346％及616％的受訪者認(rèn)為吸煙是AMD的危險(xiǎn)因素，但均低于各自受訪人群對(duì)年齡、日光暴露等危險(xiǎn)因素的認(rèn)知。公眾中，僅有231％的受訪者清楚吸煙可致失明，而相信吸煙會(huì)致失明的AMD患者亦不足一半446％。結(jié)論無論北京地區(qū)的普通公眾還是眼科門診就診的AMD患者對(duì)AMD及其危險(xiǎn)因素的認(rèn)知程度均較低。需進(jìn)一步加強(qiáng)AMD相關(guān)的宣傳教育活動(dòng)，提高全民對(duì)AMD的認(rèn)知水平。關(guān)鍵詞年齡相關(guān)性黃斑變性；危險(xiǎn)因素；吸煙認(rèn)知

簡(jiǎn)介：本課題研究的目的和意義肝吸蟲病在一個(gè)地區(qū)流行的關(guān)鍵原因是當(dāng)?shù)厝说娜河谐陨幕蛭粗笫斓聂~肉的習(xí)慣。隨著居民生活水平的提高，飲食的需求也趨于多樣化，吃生鮮己成為一種時(shí)尚，這給肝吸蟲病的流行創(chuàng)造了條件。由于我市居民素有吃“魚生”的習(xí)慣，肝吸蟲病在我市的潛在危害性較大，是嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。居民對(duì)肝吸蟲病的認(rèn)知情況在一定程度上可以反映該病在當(dāng)?shù)氐念A(yù)防控制難易程度，為進(jìn)一步摸清源城區(qū)人群肝吸蟲感染情況，居民對(duì)肝吸蟲病的知曉情況，中間宿主螺、魚的帶蟲情況，保蟲宿主貓、狗、豬的帶蟲情況，為河源市肝吸蟲病防治策略的制定提供參考依據(jù)，開展了此項(xiàng)調(diào)查。結(jié)論1源城區(qū)人群肝吸蟲感染的總感染率為1189％，與廣東省居民的平均感染水平相當(dāng)。4160歲組的肝吸蟲感染率最高，男性高于女性，國家機(jī)關(guān)、企事業(yè)單位工作人員高于其他職業(yè)人群。2當(dāng)?shù)卮嬖谥m宜肝吸蟲傳播流行的自然條件，中間宿主、保蟲宿主均有一定的感染率。魚塘、溝渠中螺的分布主要以紋沼螺為主。螺的感染率偏高。第二中間宿主淡水魚的感染率偏高。不同來源的談水魚樣本感染率沒有顯著性差異。保蟲宿主的感染率偏高，其中貓、豬的感染率高于狗的感染率。3源城區(qū)居民對(duì)肝吸蟲病防治知識(shí)的知曉率為963％，知曉率水平偏低。4在流行程度分區(qū)上屬于肝吸蟲中度流行區(qū)感染率在10％20％之間。5健康教育依然是預(yù)防控制肝吸蟲病的重要措施之一。6加強(qiáng)健康教育，確保現(xiàn)癥肝吸蟲感染者獲得及時(shí)的治療，加強(qiáng)流行區(qū)各級(jí)醫(yī)療機(jī)構(gòu)的醫(yī)生對(duì)肝吸蟲防治技術(shù)的培訓(xùn)，提高居民肝吸蟲病防治知識(shí)的知曉率，增強(qiáng)自我防控意識(shí)，對(duì)降低居民肝吸蟲病的感染水平，保障居民的身體健康有著十分重要的意義。

簡(jiǎn)介：四川大學(xué)碩士學(xué)位論文水泡口炎病毒（VSV）基質(zhì)蛋白（MP）治療卵巢癌的實(shí)驗(yàn)研究姓名林小娟申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師趙霞20070428四川大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)碩士專業(yè)學(xué)位論文水泡口炎病毒VSV基質(zhì)蛋白MP治療卵巢癌的實(shí)驗(yàn)研究研究生林小娟導(dǎo)師趙霞教授中文摘要目的水泡口炎病毒VSV是近年來倍受關(guān)注的一種溶瘤病毒，它能夠選擇性地侵入一些惡性腫瘤細(xì)胞，在其中大量復(fù)制并最終誘導(dǎo)這些腫瘤細(xì)胞的凋亡。最近的研究發(fā)現(xiàn)，該病毒的基質(zhì)蛋白MP在病毒誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生病變的過程中扮演著舉足輕重的角色，即使在其他病毒成分缺失的情況下，也能夠在體外誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。本實(shí)驗(yàn)將表達(dá)VSVMP的重組質(zhì)粒VSVMPP應(yīng)用于人卵巢癌的體外及體內(nèi)模型，以探討其抗腫瘤效應(yīng)及相關(guān)機(jī)制。方法用重組VSVMPP轉(zhuǎn)染人卵巢漿液性囊腺癌細(xì)胞SKOV3，通過HOEEHST33258染色及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)癌細(xì)胞的凋亡。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，建立了人卵巢癌裸鼠腹腔種植瘤模型，并將荷瘤裸鼠隨機(jī)分為4組VSVMPP／／I旨質(zhì)體復(fù)合物組，空質(zhì)粒／脂質(zhì)體復(fù)合物組，單純脂質(zhì)體組和生理鹽水組，分別行腹腔內(nèi)注射治療，每周2次，共6次。治療后比較各組裸鼠腹腔內(nèi)腫瘤結(jié)節(jié)的重量，觀察裸鼠的生存時(shí)間及毒副反應(yīng)，并用Ⅱ腿L和HOEEHST33258染色檢測(cè)腫瘤組織中的細(xì)胞凋亡。結(jié)果重組VSVMPP轉(zhuǎn)染SKOV3細(xì)胞后，引起了大量癌細(xì)胞的凋亡。在裸鼠模型中，與其他三種對(duì)照試劑相比，重組VSVMPP使腹腔內(nèi)腫

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多鹽酸戊乙奎醚、東莨菪堿對(duì)老年大鼠認(rèn)知功能的影響.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文論文題目苤魚紲照魚瘥堡蛋白搓受佳K型基固墨查世皇。臣整植苤卮￡巡塵K通垂鐾染的實(shí)驗(yàn)硒壅答辯委員會(huì)主席至倒明教攫昆明醫(yī)堂瞳笠三啦屋醫(yī)瞳鯊屋處型答辯委員會(huì)成員窶圭粱煎援顯刖醫(yī)生醫(yī)笠二瞰屆醫(yī)瞳塑屋處抖謝齷麴攫塑劃醫(yī)堂瞳簋二隘屆醫(yī)陵澄屋處型論文答辯日期Q生I爿19目溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文

簡(jiǎn)介：目的1研究金雀異黃素GENISTEIN，GEN對(duì)人胃腺癌SGC7901細(xì)胞增殖、遷移以及與人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUMANUMBILICALVEINENDOTHELIALCELLS，HUVECS粘附的影響，并探討其可能的作用機(jī)制。2探討聯(lián)合應(yīng)用腺病毒介導(dǎo)的人TIMP1和內(nèi)皮抑素ENDOSTAIN，END導(dǎo)入和細(xì)胞移植技術(shù)治療或抑制小鼠黑色素瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的可行性。通過感染表達(dá)人TIMP1和END的重組腺病毒的小鼠原代成纖維細(xì)胞，研究原代成纖維細(xì)胞分泌的TIMP1和END對(duì)小鼠黑色素瘤細(xì)胞遷移和浸潤的影響；通過皮下接種感染腺病毒的原代成纖維細(xì)胞制劑，研究其對(duì)小鼠移植瘤的生長(zhǎng)以及腫瘤轉(zhuǎn)移的影響。方法1分別利用細(xì)胞計(jì)數(shù)和MTT方法檢測(cè)GEN對(duì)SGC7901細(xì)胞增殖的影響。2利用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)GEN對(duì)SGC7901細(xì)胞遷移的影響；利用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和TRANSWELL細(xì)胞浸潤實(shí)驗(yàn)檢測(cè)感染表達(dá)TIMP1和END腺病毒后的原代成纖維細(xì)胞培養(yǎng)上清對(duì)小鼠黑色素瘤B16BL6細(xì)胞遷移和浸潤的影響。3利用腫瘤細(xì)胞與HUVECS粘附實(shí)驗(yàn)分別研究GEN對(duì)SGC7901細(xì)胞與單層HUVECS粘附的影響，以及感染表達(dá)TIMP1和END腺病毒后的小鼠原代成纖維細(xì)胞培養(yǎng)上清對(duì)小鼠黑色素瘤B16BL6石細(xì)胞與HUVECS粘附的影響。4利用免疫熒光實(shí)驗(yàn)觀察GEN對(duì)SGC7901細(xì)胞中ECADHERIN、BCATENIN和FACTIN分布的影響；利用WESTERNBLOTTING檢測(cè)了GEN對(duì)SGC7901細(xì)胞中FAK、PFAK、ECADHERIN和BCATENIN蛋白表達(dá)水平的影響。5利用間接ELISA方法分別檢測(cè)感染ADEND和ADTIMP1的原代成纖維細(xì)胞培養(yǎng)上清中以及原代成纖維細(xì)胞接種小鼠體內(nèi)后的小鼠血清中TIMP1和END的水平。6通過建立小鼠移植瘤模型，導(dǎo)入表達(dá)并分泌TIMP1和END的原代成纖維細(xì)胞制劑，觀察原代成纖維細(xì)胞分泌的TIMP1和END對(duì)小鼠黑色素瘤生長(zhǎng)的影響，重點(diǎn)研究聯(lián)合感染ADTIMP1和ADEND的原代成纖維細(xì)胞制劑對(duì)移植瘤的生長(zhǎng)的影響；利用細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)腫瘤組織病理學(xué)變化。7建立小鼠黑色素瘤實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移模型，通過尾靜脈注射B16BL6細(xì)胞，24H后接種感染腺病毒的原代成纖維細(xì)胞制劑，3周后，處死小鼠觀察肺轉(zhuǎn)移灶或轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)的變化。結(jié)果1細(xì)胞計(jì)數(shù)和MTT結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，GCN可以抑制SGC7901細(xì)胞的增殖，以75ΜMOLL對(duì)SGC7901細(xì)胞抑制效果最明顯。2細(xì)胞劃痕遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，GEN以劑量依賴的方式抑制SGC7901細(xì)胞的遷移。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和TRANSWELL細(xì)胞浸潤實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與MOCK組相比，ADTIMP1和ADEND感染組的細(xì)胞培養(yǎng)上清可以顯著抑制小鼠黑色素瘤B16BL6細(xì)胞的遷移和浸潤P005，而50ΜMOLL、75ΜMOLL和100ΜMOLL三個(gè)劑量組與對(duì)照組相比均可以顯著地降低SGC7901細(xì)胞與單層HUVECS的粘附能力P005。感染腺病毒的原代成纖維細(xì)胞培養(yǎng)上清對(duì)B16BL6細(xì)胞粘附影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與MOCK組和ADGFP組相比，ADTIMP1組的細(xì)胞培養(yǎng)上清可以顯著抑制B16BL6與單層HUVECS的粘附P005，而ADEND組和ADTIMP1ADEND組與MOCK和ADGFP組相比，細(xì)胞培養(yǎng)上清均可以顯著地抑制B16BL6細(xì)胞與HUVECS的粘附P001。4免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，75ΜMOLL的GEN可以引起SGC7901細(xì)胞中ECADHCRIN、BCATENIN和ACTIN重分布。GEN處理的緊密接觸相對(duì)靜止的的SGC7901細(xì)胞中應(yīng)力纖維數(shù)目與對(duì)照組相比明顯減少。WESTERNBLOTTING結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，不同濃度的GEN對(duì)SGC7901細(xì)胞中FAK和BCATENIN的表達(dá)沒有明顯影響，但可以下調(diào)細(xì)胞中PFAK和ECADHERIN的表達(dá)。但是，當(dāng)GEN的濃度為100ΜMOLL時(shí)，ECADHERIN表達(dá)量又明顯升高。5感染腺病毒的原代成纖維細(xì)胞培養(yǎng)上清的ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示，隨著感染ADEND和ADTIMP1的成纖維細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)，END和TIMP1的分泌逐漸增多，證實(shí)ADEND和ADTIMP1感染小鼠原代成纖維細(xì)胞后，感染細(xì)胞能有效表達(dá)并分泌END和TIMP1至細(xì)胞培養(yǎng)上清中。在空白對(duì)照組MOCK和空載腺病毒ADGFP組小鼠血清中未檢測(cè)出人END和TIMP1蛋白。感染ADEND和ADTIMP1的原代成纖維細(xì)胞制劑治療組24H的小鼠血清中就可檢測(cè)出END和TIMP1蛋白，并且隨著時(shí)間的推移，小鼠血清中END和TIMP1一直維持在較高水平，證實(shí)ADEND和ADTIMP1感染小鼠原代成纖維細(xì)胞后，在小鼠體內(nèi)能有效表達(dá)并分泌TIMP1和END蛋白。6與MOCK和ADGFP組相比，感染ADEND、ADTIMP1后的小鼠原代成纖維細(xì)胞制劑治療組可以抑制小鼠黑色素瘤B16BL6細(xì)胞移植痛的生長(zhǎng)，尤其是，聯(lián)合感染ADEND和ADTIMP1的原代成纖維細(xì)胞制劑治療組對(duì)移植瘤的生長(zhǎng)抑制具有明顯的協(xié)同和累加效應(yīng)P001。組織病理學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示，感染ADEND、ADTIMP1后的小鼠原代成纖維細(xì)胞制劑治療組可見大量的淋巴細(xì)胞浸潤和明顯的細(xì)胞壞死，尤以聯(lián)合感染ADTIMP11ADEND細(xì)胞制劑治療組最為明顯。7與MOCK和ADGFP組相比，感染ADEND、ADTIMP1后的小鼠原代成纖維細(xì)胞制劑治療組可以抑制黑色素瘤B16BL6細(xì)胞實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移，而聯(lián)合感染ADTIMP1和ADEND的原代成纖維細(xì)胞制劑對(duì)小鼠黑色素瘤實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移的抑制具有明顯的協(xié)同和累加效應(yīng)P001。結(jié)論1GEN抑制SGC7901細(xì)胞的增殖、遷移以及與單層HUVECS粘附可能是通過誘導(dǎo)SGC7901細(xì)胞中ECADHERIN、BCATENIN和ACTIN的重排、下調(diào)PFAK和ECADHERIN的表達(dá)等實(shí)現(xiàn)的。2感染腺病毒的成纖維細(xì)胞分泌的TMP1和END可以在體外顯著抑制小鼠黑色素瘤B16BL6細(xì)胞的遷移、浸潤以及與HUVECS的粘附。3接種感染相應(yīng)腺病毒的原代成纖維細(xì)胞制劑可以表達(dá)并分泌TIMP1和END到小鼠血清中并能在體內(nèi)維持較高水平，可以顯著抑制小鼠黑色素瘤細(xì)胞移植瘤的生長(zhǎng)和實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移，而且聯(lián)合感染TIMP1和END的小鼠原代成纖維細(xì)胞制劑抑制效果更顯著。4腺病毒介導(dǎo)的原代成纖維細(xì)胞制劑可能為臨床治療腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移提供一種新的基因治療手段，具有潛在臨床應(yīng)用價(jià)值?；蛑委熀图?xì)胞治療聯(lián)合運(yùn)用能取得更好的抗腫瘤效果，有望成為一種新的腫瘤治療模式。

簡(jiǎn)介：分類號(hào)R373密級(jí)單位代碼10422學(xué)號(hào)200913159⑧O關(guān)力孥碩士學(xué)位論文SHANDONGUNIVERSITYMASTERTHESIS論文題目以AD41為載體的輪狀病毒疫苗免疫效果初探THEPRELIMINARYSTUDYOFIMMUNEEFFECTSOFAD41一BASEDROTAVIRUSVP6RECOMBINANTADENOVIRUS作者姓名陳多靈學(xué)院名稱醫(yī)學(xué)院專業(yè)名稱病原生物學(xué)指導(dǎo)教師洪濤院士合作導(dǎo)師趙蔚明教授2012年5月12日山東大學(xué)碩士學(xué)位論文目錄中文摘要4英文摘要7符號(hào)說明11前言13日Ⅱ舌LJ第一部分人腺病毒41型HADV41感染性克隆的構(gòu)建17材料和方法17結(jié)果35寸‘論QLQL，J、結(jié)46第二部分以AD41為載體的重組輪狀病毒疫苗免疫效果初探一47材料和方法47結(jié)果62討論78／』、結(jié)83全文總結(jié)84參考文獻(xiàn)85致謝9L攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄92

簡(jiǎn)介：研究背景器官移植后器官功能維持的主要障礙是術(shù)后排斥反應(yīng)和免疫抑制劑的毒性?；蛑委煘楦我浦差I(lǐng)域供肝抵抗移植后排斥反應(yīng)和損傷提供了新的治療思路。將免疫調(diào)節(jié)基因?qū)胍浦哺蝺?nèi)，使其表達(dá)致耐受分子，產(chǎn)生能抑制受體免疫反應(yīng)的細(xì)胞因子，可有效地抑制排斥反應(yīng)的發(fā)生和增強(qiáng)移植肝的保護(hù)功能，能在不用或少量使用免疫抑制劑的情況下延長(zhǎng)移植肝存活，甚至長(zhǎng)期存活。程序性死亡配體1PROGRAMMEDDEATHLIG1，PDL1是一種重要的抑制性共刺激分子，可通過激活初始T細(xì)胞、抑制活化的效應(yīng)T細(xì)胞及調(diào)節(jié)細(xì)胞因子的分泌等參與多種免疫過程。體外研究發(fā)現(xiàn)PDL1與其受體程序性死亡1PROGRAMMEDDEATH1，PD1結(jié)合后，能抑制活化T細(xì)胞增殖及細(xì)胞因子的產(chǎn)生。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也證實(shí)，在心臟、胰島、角膜、皮膚等多種器官移植模型中，PDL1均能抑制排斥反應(yīng)及延長(zhǎng)移植物的存活；這強(qiáng)烈提示了PDL1可能具有保護(hù)移植肝免受排斥反應(yīng)損傷的治療潛能。PDL1可通過多種機(jī)制產(chǎn)生免疫抑制效應(yīng)，與肝移植聯(lián)系起來考慮，它可能通過抑制活化T細(xì)胞的增殖及細(xì)胞因子的合成、分泌，從而阻斷宿主對(duì)移植肝的攻擊。此外，免疫抑制分子的局部表達(dá)有可能減少其全身性副作用、增加其生物利用度及治療效應(yīng)，因此是減輕排斥反應(yīng)、促進(jìn)移植物長(zhǎng)期存活的很有前景的方法。腺相關(guān)病毒ADENOASSOCIATEDVIRUS，AAV是移植物保護(hù)分子轉(zhuǎn)染和表達(dá)的理想載體。報(bào)告基因紅色熒光蛋白R(shí)EDFLUESCENTPROTEIN，RFP因其具有靈敏度高、信號(hào)清楚等特點(diǎn)亦日益受到關(guān)注。研究目的基于以上分析，本研究擬通過建立近交系大鼠原位肝移植模型，以RFP為報(bào)告基因，將AAV作為PDL1的載體，采用冷保存期門靜脈灌注夾閉法轉(zhuǎn)染供肝，觀察其安全性和有效性。在此基礎(chǔ)上，于活體內(nèi)觀察PDL1基因轉(zhuǎn)染對(duì)大鼠異基因肝移植術(shù)后肝臟的保護(hù)作用及其與亞劑量CSA的協(xié)同效果，并通過檢測(cè)PDL1對(duì)移植肝CD4、CD8、CD25淋巴細(xì)胞浸潤及細(xì)胞因子INFΓ、IL17、IL10、TGFΒ1表達(dá)的影響，試圖闡明PDL1在抑制大鼠肝移植急性排斥反應(yīng)中的可能機(jī)制。方法與結(jié)果第一部分近交系大鼠肝移植急性排斥模型的建立及排斥反應(yīng)觀察大鼠隨機(jī)分為3組①G1同基因肝移植組；②G2異基因肝移植組；③G3CSA組，移植后0～7D腹腔注射CSA25MGKGD，余同G2。采用改良“二袖套法”建立大鼠肝移植急性排斥模型。術(shù)后觀察一般情況、平均存活時(shí)間MEDIANSURVIVALTIME，MST，分別在術(shù)后3、7、14及21D采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)肝功能，光鏡下觀察移植肝組織學(xué)變化，根據(jù)BANFF標(biāo)準(zhǔn)判斷排斥反應(yīng)強(qiáng)度。結(jié)果表明在無外界干預(yù)的情況下，G1大鼠無急性排斥表現(xiàn)；G2受體多在術(shù)后7D出現(xiàn)耳廓黃染、尿黃等，至14D進(jìn)行性加重伴血性腹水等；G3用藥期間大鼠精神差，停藥后逐漸恢復(fù)，至14D出現(xiàn)輕度急排表現(xiàn)；三組大鼠MST分別為G11067±024D，G2183±115D和G3287±098D，G3較G2明顯延長(zhǎng)，差異顯著P005；肝功及肝組織病理學(xué)改變?cè)缬谏鲜霰憩F(xiàn)，術(shù)后3D急排大鼠ALT、TBIL明顯升高伴輕度的排斥反應(yīng)病理改變，7D后上述指標(biāo)進(jìn)一步惡化，至14D最為典型，與G1、G3相比差異顯著P005；各時(shí)段排斥分級(jí)與病理變化趨勢(shì)一致術(shù)后3DG3與G2急性排斥活動(dòng)指數(shù)REIECTIONACTIVITYINDEX，RAI評(píng)分無明顯差異，而7D、14D及21DG2RAI評(píng)分明顯高于G1、G3P005。第二部分重組PDL1AAV2RFP轉(zhuǎn)染大鼠移植肝的安全性和有效性1重組PDL1AAV2RFP載體PCR鑒定以重組載體為模板，在PCR儀上進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，取PCR產(chǎn)物行1％瓊脂糖凝膠電泳，紫外燈下觀察發(fā)現(xiàn)擴(kuò)增條帶與預(yù)期的891BP大小的特異性條帶相吻合，表明PDL1基因構(gòu)建正確。2重組PDL1AAV2RFP載體感染活性檢測(cè)重組病毒感染BHK細(xì)胞后熒光顯微鏡下觀察RFP基因表達(dá)。結(jié)果表明PDL1AAV2一RFP感染后24H即可觀察到紅色熒光，48H后轉(zhuǎn)染率可達(dá)30％，表明其具有較強(qiáng)的感染活性，可用于體內(nèi)外轉(zhuǎn)染研究。3大鼠隨機(jī)分為3組①G1同基因肝移植組；②G2AAV空載體組，供肝切取后經(jīng)門靜脈灌注AAV2RFP空病毒液夾閉冷轉(zhuǎn)染供肝2H，移植前乳酸林格氏液經(jīng)門靜脈沖洗供肝，余同G1；③G3PDL1轉(zhuǎn)染組，所用灌注液為PDL1AAV2RFP，余同G2。改良“二袖套法”建立大鼠肝移植基因轉(zhuǎn)染模型，于熒光顯微鏡下觀察移植肝RFP的表達(dá)，分別采用實(shí)時(shí)熒光定量RTPCR、IHC從MRNA及蛋白水平檢測(cè)移植肝PDL1的表達(dá)，肝功能及肝組織病理檢測(cè)同第一部分。結(jié)果發(fā)現(xiàn)ALT與TBIL分別于術(shù)后3D、7D達(dá)到峰值，14D基本恢復(fù)正常，各組間無顯著性差異；與未轉(zhuǎn)染組相比，PDL1轉(zhuǎn)染后肝組織病理未見明顯差異；G2、G3術(shù)后7D即可在熒光顯微鏡下觀察到微弱的紅色熒光，14、21D逐漸增強(qiáng)，呈高亮度的紅色熒光，而三組大鼠肝外器官中始終無紅色熒光；RTPCR及IHC檢測(cè)顯示未轉(zhuǎn)染組PDL1MRNA基因和蛋白均微弱表達(dá)；PDL1轉(zhuǎn)染7D后隨時(shí)間延長(zhǎng)靶基因表達(dá)逐漸增強(qiáng)，21D達(dá)峰值，主要位于匯管區(qū)周圍；除3D外，余各時(shí)段PDL1基因轉(zhuǎn)錄及蛋白表達(dá)G3較G1、G2明顯增強(qiáng)P005。第三部分腺相關(guān)病毒介導(dǎo)的PDL1表達(dá)對(duì)大鼠移植肝的保護(hù)作用及其機(jī)制大鼠隨機(jī)分為6組①G1同基因肝移植組；②G2異基因肝移植組；③G3AAV空載體組，供肝切取后經(jīng)門靜脈灌注AAV2RFP空病毒液夾閉冷轉(zhuǎn)染供肝2H，移植前乳酸林格氏液經(jīng)門靜脈沖沈供肝，余同G2；④G4CSA組，移植后0～7D予腹腔注射CSA25MGKGD，余同G2；⑤G5PDL1轉(zhuǎn)染組，所用灌注液為PDL1AAV2RFP，余同G3；⑥G6聯(lián)合治療組，所用灌注液為PDL1AAV2RFP，術(shù)后0～7D予腹腔注射CSA25MGKGD，余同G2。改良“二袖套法”建立大鼠肝移植模型，利用組織病理、IHC、ELISA等技術(shù)，觀察術(shù)后移植肝病理改變、PDL1蛋白表達(dá)及其對(duì)移植肝CD4、CD8、CD25細(xì)胞浸潤和細(xì)胞因子INFΓ、IL17、IL10、TGFΒ1表達(dá)的影響。結(jié)果顯示G1大鼠無急性排斥表現(xiàn)；肝功能損害較輕，ALT與TBIL分別于術(shù)后3D、7D達(dá)到峰值，14D基本恢復(fù)正常肝臟病理學(xué)呈BANFF0級(jí)排斥反應(yīng)；各時(shí)段PDL1蛋白微弱表達(dá)；匯管區(qū)未見明顯淋巴細(xì)胞浸潤；IFNΓ無明顯表達(dá)，而IL17、IL10和TGFΒ1呈低表達(dá)；大鼠MST為1067±024D。G2、G37D開始出現(xiàn)急排表現(xiàn)，14D癥狀加重；肝功能指標(biāo)明顯惡化；肝臟病理學(xué)呈BANFFII～I(xiàn)II級(jí)排斥反應(yīng)，RAI評(píng)分隨時(shí)間推移逐漸升高；各時(shí)段PDL1蛋白微弱表達(dá)；移植肝大量CD4、CD8、CD25細(xì)胞浸潤；細(xì)胞因子IFNΓ、IL17上調(diào)表達(dá)，而IL10、TGFΒ1表達(dá)下降；大鼠MST為183±115D、183±072D。與G2、G3相比，G4、G5及G6大鼠發(fā)生急性排斥反應(yīng)的時(shí)間均明顯延遲，直至14D才出現(xiàn)輕度排斥表現(xiàn)；肝功能部分改善，術(shù)后出現(xiàn)ALT、TBIL再次升高及肝功能衰竭的時(shí)間明顯推遲；肝臟病理學(xué)呈BANFFI～I(xiàn)I級(jí)排斥反應(yīng)；G5、G6各時(shí)段移植肝PDL1蛋白的表達(dá)隨時(shí)間逐漸增強(qiáng)，G4無明顯變化；移植肝CD4、CD8、CD25細(xì)胞浸潤明顯減少，尤以CD8細(xì)胞為著P005；移植肝細(xì)胞因子IFNΓ、IL17含量顯著下降，而IL10、TGFΒ1含量明顯升高，差異顯著P005；受體MST明顯延長(zhǎng)，但未獲得長(zhǎng)期存活，僅為287±098D、293±147D。PDL1基因轉(zhuǎn)染聯(lián)合亞劑量CSA治療的大鼠各時(shí)段肝功能損害進(jìn)一步減輕，RAI評(píng)分顯著降低，受體MST明顯延長(zhǎng)至340±149DP005。四、結(jié)論1采用改良“二袖套法”成功建立了LEWBN組合大鼠肝移植急性排斥模型。2冷保存期經(jīng)門靜脈灌注PDL1AAV2RFP夾閉法轉(zhuǎn)染供肝，可安全、有效地將目的基因轉(zhuǎn)染至大鼠移植肝內(nèi)并分泌功能性蛋白。3在本實(shí)驗(yàn)條件下，采用PDL1AAV2RFP11011VG只經(jīng)門靜脈灌注夾閉冷保存2H是介導(dǎo)足量蛋白表達(dá)的理想方案。4腺相關(guān)病毒介導(dǎo)的PDL1基因轉(zhuǎn)染對(duì)移植肝具有顯著的保護(hù)作用，可延長(zhǎng)移植肝存活，且與CSA有協(xié)同效果。5PDL1基因可抑制肝移植急性排斥反應(yīng)，其機(jī)制可能是PDL1基因轉(zhuǎn)染增強(qiáng)了PDL1PD1信號(hào)通路，通過抑制移植肝CD4、CD8、CD25T細(xì)胞浸潤及其功能，在上調(diào)細(xì)胞因子IL10、TGFΒ1表達(dá)的同時(shí)，下調(diào)INFΓ、IL17的表達(dá)，從而發(fā)揮對(duì)移植肝的保護(hù)作用。

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多乙型肝炎病毒相關(guān)腎炎研究進(jìn)展.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：目的軟骨損傷性疾病是一類常見的、嚴(yán)重的疾病，發(fā)展到一定程度后可致殘，加重社會(huì)與家庭的負(fù)擔(dān)。關(guān)節(jié)軟骨損傷后自我修復(fù)能力很弱，目前軟骨缺損的修復(fù)仍無理想的方法，以致關(guān)節(jié)軟骨損傷成為了臨床上亟待解決的難題。近年來基因工程及組織工程技術(shù)的發(fā)展為解決這一難題提供了機(jī)遇。本課題采用基因轉(zhuǎn)染及組織工程技術(shù)，分別構(gòu)建表達(dá)TGFΒ1及IL10目的基因的慢病毒載體，轉(zhuǎn)染體外分離培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞BMSCS，在細(xì)胞因子影響下誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞方向分化，通過各項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè)，更好的為多基因誘導(dǎo)干細(xì)胞定向分化提供理論依據(jù)，為構(gòu)建新型組織工程軟骨提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。材料和方法1取23月齡健康新西蘭大白兔，無菌條件下穿刺針抽取雙側(cè)脛骨平臺(tái)內(nèi)下側(cè)骨髓68ML，梯度密度離心法結(jié)合貼壁培養(yǎng)法提取BMSCS，進(jìn)行原代、傳代細(xì)胞培養(yǎng)。按加入慢病毒載體的不同分為三組A組TGFΒ1B組TGFΒ1IL10C組空載體組C組空白對(duì)照組。2以TGFΒ1和IL10為目的基因，構(gòu)建TGFΒ1GFP及IL10RFP慢病毒表達(dá)載體。在重組基因慢病毒載體轉(zhuǎn)染體系中，確定最佳轉(zhuǎn)染效率所需MOI值（感染復(fù)數(shù)）及作用時(shí)間。單基因TGFΒ1及雙基因共轉(zhuǎn)染（TGFΒ1和IL10）在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中的表達(dá)情況。3取已轉(zhuǎn)染的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，根據(jù)加入慢病毒載體及加入細(xì)胞因子IL1Β的不同分為六組A組TGFΒ1B組TGFΒ1IL1Β（IL1Β10NGML）C組TGFΒ1IL10D組TGFΒ1IL10IL1ΒE組空載體組，加誘導(dǎo)液F組空白對(duì)照組，常規(guī)完全培養(yǎng)基，不加任何誘導(dǎo)液。AE組滴加軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)液（組成TGFΒ310NGML、VITC50ΜGML、地塞米松107ML、含10％胎牛血清的ΑMEM液。）培養(yǎng)。每日倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀況，誘導(dǎo)培養(yǎng)7、14天后，收集六組中的細(xì)胞，提取MRNA，熒光定量PCR檢測(cè)SOX9、AGGRECAN、TYPEⅡCOLLAGEN的表達(dá)，同時(shí)提取蛋白，WESTERNBLOTTING測(cè)定TYPEⅡCOLLAGEN的表達(dá)。結(jié)果1細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變倒置相差顯微鏡下觀察，原代培養(yǎng)的BMSCS24H可見少量紡錘或短梭形細(xì)胞貼壁”48H后大多數(shù)細(xì)胞已貼壁、分裂，并出現(xiàn)由單個(gè)細(xì)胞分裂形成的細(xì)胞集落。57D后，細(xì)胞分裂增殖，形成多個(gè)細(xì)胞集落。傳代細(xì)胞貼壁快，5日左右即可長(zhǎng)滿瓶底形成單層，細(xì)胞核大，胞漿內(nèi)顆粒多，呈平行或漩渦狀生長(zhǎng)。2含有單、雙目的基因的慢病毒載體轉(zhuǎn)染BMSCS，轉(zhuǎn)染后12H即可有熒光表達(dá)，MOI值（感染復(fù)數(shù)）為100，感染96H后轉(zhuǎn)染效率可達(dá)70％左右。3熒光定量PCR及WESTERNBLOTTING檢測(cè)培養(yǎng)第7、14天，實(shí)驗(yàn)組AE三個(gè)目的基因都有表達(dá)，F(xiàn)空白對(duì)照組無表達(dá)。A組、C組SOX9、AGGRECAN、TYPEⅡCOLLAGEN的表達(dá)水平分別高于加細(xì)胞因子IL1Β的B、D組及空載體組，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異D組目的基因表達(dá)水平較B組為高，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜005A組和C組間目的基因表達(dá)無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論1BMSCS是軟骨組織工程理想的種子細(xì)胞，培養(yǎng)法方法簡(jiǎn)便，易取材及體外擴(kuò)增，體外培養(yǎng)性能穩(wěn)定。密度梯度離心法結(jié)合全骨髓培養(yǎng)法培養(yǎng)出的BMSCS活力旺盛，易于傳代。在一定誘導(dǎo)條件下，BMSCS可以定向分化為軟骨細(xì)胞。2利用慢病毒載體轉(zhuǎn)染可使兔骨髓問充質(zhì)干細(xì)胞高效穩(wěn)定地表達(dá)目的基因。3細(xì)胞因子在促進(jìn)BMSCS細(xì)胞增殖和向軟骨細(xì)胞定向分化方面有重要意義，TGFΒ1在BMSCS向軟骨細(xì)胞分化和增殖時(shí)起促進(jìn)作用。IL10具有軟骨保護(hù)作用，可以對(duì)抗IL1Β的軟骨合成抑制作用。

簡(jiǎn)介：目的構(gòu)建人真核表達(dá)的HTAZ慢病毒載體PLENTI6V5HTAZ，轉(zhuǎn)染293FT細(xì)胞獲得重組慢病毒顆粒，研究HTAZ對(duì)前成骨細(xì)胞MC3T3E1分化的調(diào)控作用。方法將已經(jīng)過測(cè)序驗(yàn)證的，含有HTAZ基因慢病毒入門質(zhì)粒PENTR221HTAZ通過LR反應(yīng)克隆到慢病毒載體PLENTI6V5DEST中。對(duì)重組質(zhì)粒進(jìn)行酶切鑒定并在細(xì)胞中驗(yàn)證表達(dá)。將該重組載體和慢病毒包裝質(zhì)粒充分混合，用陽離子脂質(zhì)體LIPOFACTAMINE轉(zhuǎn)染293FT細(xì)胞，培養(yǎng)和待細(xì)胞完全裂解后收集富含HTAZ基因的慢病毒顆粒上清液，取適量上清液感染MC3T3E1細(xì)胞，采用殺稻瘟菌素（BLASTCIDIN）篩選，建立了穩(wěn)定過量表達(dá)HTAZ蛋白的MC3T3E1HTAZ細(xì)胞系。用條件培養(yǎng)基誘導(dǎo)MC3T3E1和MC3T3E1HTAZ細(xì)胞成骨、成脂分化，VONKOSSA和茜素紅染色比較MC3T3E1和MC3T3E1HTAZ成骨分化程度差異；油紅O染色比較其成脂分化差異，考察HTAZ基因過表達(dá)對(duì)前成骨細(xì)胞分化的影響。結(jié)果凝膠電泳和測(cè)序結(jié)果均證明HTAZ重組慢病毒載體PLENTI6V5HTAZ構(gòu)建正確，并能在細(xì)胞中正確表達(dá)。與輔助質(zhì)粒共轉(zhuǎn)包裝細(xì)胞獲得慢病毒顆粒，并成功感染MC3T3E1細(xì)胞。VONKOSSA染色和茜素紅染色結(jié)果表明，MC3T3E1HTAZ細(xì)胞成骨分化強(qiáng)于未轉(zhuǎn)染細(xì)胞，而其成脂分化受抑制。結(jié)論本研究構(gòu)建了人真核表達(dá)的質(zhì)粒載體PLENTI6V5HTAZ，并能在細(xì)胞中正確表達(dá)。成功包裝了HTAZ病毒并獲得過表達(dá)HTAZ的MC3T3－E1細(xì)胞。過表達(dá)HTAZ可促進(jìn)MC3T3E1向成骨細(xì)胞分化，抑制其成脂分化。

簡(jiǎn)介：河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文癲癇引起認(rèn)知功能障礙與海馬NR2B表達(dá)的變化姓名范月輝申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師王維平20080301中文摘要天注射完畢后觀察1小時(shí)。NC組大鼠給予同等劑量、同等次數(shù)的生理鹽水。依據(jù)RACINE分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)將大鼠行為分為6級(jí)。0級(jí)無任何反應(yīng)；I級(jí)胡須動(dòng)、面肌抽動(dòng)；II級(jí)點(diǎn)頭、咀嚼或濕狗樣抖動(dòng)WETDOGSHAKES，WDSIII級(jí)傾JJ前肢抬起、陣攣；Ⅳ級(jí)站立伴有雙側(cè)前肢陣攣；V級(jí)跌倒、全身強(qiáng)直陣攣性發(fā)作。完全點(diǎn)燃的標(biāo)準(zhǔn)是獲得連續(xù)3次Ⅳ級(jí)或以上的運(yùn)動(dòng)驚厥。2腦電圖將大鼠麻醉后固定于腦立體定位儀上，將電極放置于雙側(cè)皮質(zhì)和雙側(cè)海馬部位，按上述模型分組描記腦電圖。3行為學(xué)檢測(cè)應(yīng)用Y迷宮、水迷宮、檢測(cè)大鼠癲癇前后學(xué)習(xí)記憶及情感反應(yīng)能力的變化。4免疫組織化學(xué)染色行為學(xué)檢查后，分別隨機(jī)選取模型組和對(duì)照組大鼠各8只在水合氯醛深度麻醉下灌注，取腦固定，常規(guī)包埋，標(biāo)本冠狀位石蠟切片。經(jīng)抗原修復(fù)、羊血清封閉后，加多克隆抗體，再經(jīng)二抗、三抗孵育，DAB顯色后置顯微鏡下觀察記錄。5逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)行為學(xué)檢查后，分別隨機(jī)選取模型組和對(duì)照組大鼠各8只，迅速分離海馬，經(jīng)提取海馬，EERNA、逆轉(zhuǎn)錄合成CDNA、引物擴(kuò)增后，擴(kuò)增產(chǎn)物在瓊脂糖凝膠上電泳，用凝膠成像系統(tǒng)掃描定量并攝像電泳條帶的灰度，凝膠圖象分析系統(tǒng)分析厶士田多口5GZO結(jié)果1動(dòng)物模型制備

簡(jiǎn)介：分類號(hào)R7445密級(jí)公開單位代碼10422學(xué)號(hào)201213549⑧∥菇辦寫SHANDONGUNIVERSITY碩士學(xué)位論文THESISFORMASTERDEGREE論文題目多發(fā)性硬化患者認(rèn)知功能損害與磁共振彌散張量成像相關(guān)性研究CORRELATIONBETWEENCOGNITIVEIMPAIRMENTANDDIFFUSIONTENSORIMAGINGINPATIENTSWITHMULTIPLESCLEROSIS作者姓名學(xué)院名稱專業(yè)名稱指導(dǎo)教師合作導(dǎo)師劉光云醫(yī)學(xué)院神經(jīng)病學(xué)郭守剛副教授2015年4月5日山東大學(xué)碩士學(xué)位論文目錄中文摘要L英文摘要4符號(hào)說明7前言9日IJ舌第一部分資料與方法11結(jié)果13討論L4結(jié)論17附表L8附圖2L第二部分資料與方法23結(jié)果25討侖26結(jié)論29附表30附圖32創(chuàng)新性與局限性36參考文獻(xiàn)37綜述42致謝52攻讀學(xué)位期間表的學(xué)術(shù)論文目錄53

簡(jiǎn)介：該研究的目的旨在觀察蕈樣肉芽腫患者細(xì)胞是否存在EB病毒感染及病毒復(fù)制從而探討EB病毒感染與蕈樣內(nèi)芽腫發(fā)病的相關(guān)性我們應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)的方法檢測(cè)了7例蕈樣肉芽腫患者外周血單個(gè)核細(xì)胞EB病毒DNA及BMRF1基因結(jié)論實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示7例MF患者中有2例MF患者EBVDNA陽性說明MF細(xì)胞中有EB病毒DNA的整合對(duì)這兩例患者的PBMC標(biāo)本進(jìn)行了PCRBMRF1基因擴(kuò)增檢測(cè)結(jié)果仍呈陽性兩項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果一致顯示了檢測(cè)結(jié)果良好的匹配性提示蕈樣肉芽腫患者體內(nèi)存EB病毒感染及病毒復(fù)制EBV可能作為一種重要的協(xié)同因子在CTCL的發(fā)病中起作用該研究?jī)H僅是初步的且病例數(shù)量少目前尚不能明確EB病毒在CTCL病變中發(fā)揮的作用該研究課題有待于今后進(jìn)一步完善、深入