人類睪丸特異表達新基因MAEL的克隆和表達分析.pdf

1、精子生成是一個多基因參與的復雜過程，多個與精子發(fā)生相關的基因已相繼被鑒定。但這些已知的基因如何與其它的基因相互作用來調控精子的生成過程，以及是否存在其它未知的基因參與精子的發(fā)生目前尚不完全清楚?？寺⌒碌牟G丸發(fā)育、生精相關基因對進一步了解精子發(fā)生機理具有重要意義。
　　 本文利用數(shù)字差異顯示(digital differential display)方法，從篩查人睪丸中高表達而在其他組織中不表達或低表達的差異EST(表達序列標簽)

2、入手，成功克隆到一個在人睪丸中高表達的新基因MAEL(GenBank登錄號為：DQ076156)。RLM—RACE結果表明，MAEL基因的轉錄起始位點位于翻譯起始位點上游第74位核苷酸(nt)，MAEL基因的mRNA全長序列為1751 nt。生物信息學分析顯示：MAEL基因位于人類1號染色體長臂上(1q24.1)，由12個外顯子組成和11個內含子所組成，編碼434個氨基酸，分子量約為49.2kD。
　　 Northern印跡雜交

3、結果表明，MAEL基因的mRNA只在睪丸組織中高表達，而在卵巢、肺、肝臟、心、腦、脾臟、腎臟等組織中無表達。RNA原位雜交結果表明發(fā)現(xiàn)MAEL基因的mRNA在精母細胞、圓形精子和早期伸長型精子中都有表達。EGFP—MAEL融合表達載體的細胞轉染實驗發(fā)現(xiàn)MAEL基因編碼蛋白質主要定位于細胞質中。
　　 為了進一步了解該基因表達調控機制，本文分析了MAEL基因的啟動子。首先，將MAEL基因的上游序列(—1510 bp～+150 bp

4、)克隆到載體pTAL—luc的熒光素酶基因上游并構建一系列缺失突變，然后將包含全長序列和各種缺失突變的重組質粒轉染人宮頸癌細胞系HeLa和小鼠精原細胞系GC—1，通過比較熒光素酶的活性發(fā)現(xiàn)，MAEL基因的基本啟動子位于—216 bp與+28bp之間，而+28 bp至+150 bp處有精原細胞系特異表達的增強子序列。生物信息學分析發(fā)現(xiàn)MAEL基因啟動子缺乏TATA盒，而存在3個CACCC盒，1個CCAAT盒和1個倒轉的CCAAT盒(ATT