環(huán)境脅迫對(duì)單巢類(lèi)輪蟲(chóng)不同類(lèi)別基因差異表達(dá)的影響.pdf

1、為了從基因表達(dá)水平上探討單巢類(lèi)輪蟲(chóng)有性生殖發(fā)生的分子機(jī)理，本研究以萼花臂尾輪蟲(chóng)為材料，通過(guò)溫度刺激，分別獲取非混交雌體、混交雌體和雄體，進(jìn)而利用mRaNA熒光差異顯示的方法對(duì)三種類(lèi)別進(jìn)行了研究，取得了下列幾個(gè)主要結(jié)果和結(jié)論： (1)用急劇冷休克4小時(shí)的方法，得到的輪蟲(chóng)后代中的混交雌體百分含量最高。 (2)用Trizol試劑盒提取了萼花臂尾輪蟲(chóng)非混交雌體、混交雌體和雄體的RNA，純度較高。且發(fā)現(xiàn)提取雌體的RNA至少需要雌體

2、300只。 (3)進(jìn)行了20個(gè)熒光差異顯示反應(yīng)，獲得了34個(gè)差異片段。進(jìn)行PCR二次擴(kuò)增得到穩(wěn)定的差異條帶18條。約有1／2的差異條帶回收后，再次擴(kuò)增時(shí)未能擴(kuò)出條帶，可能是假陽(yáng)性條帶。說(shuō)明萼花臂尾輪蟲(chóng)不同類(lèi)別之間在mRNA水平上確實(shí)存在著本質(zhì)的差別。 (4)對(duì)差異片段進(jìn)行克隆測(cè)序，獲得了16個(gè)DNA片段的序列數(shù)據(jù)。序列的編號(hào)分別為H7-1、H7-2、F7-1、F7-2、F7-3、F7-4、F7-6、H8-1、 H8-4、