槲皮素調(diào)節(jié)谷胱甘肽代謝的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑研究.pdf

1、目的：
　　通過(guò)體外動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，從 Keap1-Nrf2-ARE信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的角度探討槲皮素（quercetin）對(duì)大鼠體內(nèi)谷胱甘肽含量的影響，尤其是不同濃度槲皮素對(duì)谷胱甘肽代謝中的主要酶活性及基因水平，以及Keap1-Nrf2-ARE信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑重要分子的的影響。全方位、多靶點(diǎn)地探討槲皮素調(diào)節(jié)GSH代謝的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。
　　方法：
　　以AIN-93飼料，在此基礎(chǔ)上分別添加0.005％、0.05%和0.5%槲皮素喂養(yǎng)大

2、鼠6周后，采用試劑盒測(cè)定大鼠血清中還原型谷胱甘肽（reduced glutathione， GSH）、氧化型谷胱甘肽（oxidated glutathione,GSSG）、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量，谷胱甘肽還原酶（glutathione reductase,GR）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶（glutathione S-transfer

3、ase,GST），丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alanine aminotransferase，ALT)、門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase,AST)活性。使用試劑盒測(cè)定肝組織GSH和GSSG含量，GST、GR和GSH-Px酶活性。采用RT-PCR法測(cè)定肝組織GST、GSH-Px、GR、γ-谷胱酰半胱氨酸合成酶（gamma-glutamylcysteine synthetase， GCS）mRNA表達(dá)水平,。

4、采用 Westerbolt法測(cè)定肝組織細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases，ERK1/2）、磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）、c-jun氨基末端激酶(c-jun N-terminal knase,JNK)、磷酸化JNK(p-JNK)、p38絲裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38)、磷酸化P38(p-p38)、

5、(Kelch-like ECH-associated protein1,Keap1）核因子E2相關(guān)因子(nuclear factor erythroid2-related factor2, Nrf2）蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.各組大鼠體重增長(zhǎng)量和每日平均攝食量均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差別（P>0.05）。與對(duì)照組比，各實(shí)驗(yàn)組大鼠ALT、AST活性差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　2.與對(duì)照組相比，0.05%、0.5%

6、槲皮素組大鼠血清GSH含量顯著降低，而MDA含量和GSH-Px的活性顯著增高（P<0.05）
　　3.在大鼠肝臟中，與對(duì)照組相比，0.05%和0.5%槲皮素組 GSH含量顯著降低（P<0.05），0.05%和0.5%槲皮素組中的GR活性顯著降低（P<0.05），與0.005%槲皮素組相比，0.05%槲皮素組和0.5%槲皮素組的GR活性顯著降低（P<0.05）。與對(duì)照組相比，0.005%、0.05%和0.5%槲皮素組GST活性顯著增

7、高（P<0.05）。4.與對(duì)照組相比，0.005%槲皮素組 GST基因表達(dá)上調(diào)而 GCL基因表達(dá)下調(diào)，0.05%槲皮素組GR基因表達(dá)下調(diào)，0.5%槲皮素組GST、GCL和GR基因表達(dá)下調(diào)（P<0.05）。
　　5.與對(duì)照組相比，0.005%槲皮素組p-ERK蛋白表達(dá)增加，0.05%槲皮素組Keap1、p-JNK和p-ERK蛋白表達(dá)增加，0.5%槲皮素組p-ERK和p-p38蛋白表達(dá)增加而Nrf2蛋白表達(dá)降低（P<0.05）。

8、>　　結(jié)論：
　　1.0.5%槲皮素未造成大鼠肝功能明顯損傷
　　2.一定劑量槲皮素可以降低血中GSH的含量，并產(chǎn)生促氧化作用。
　　3.0.5%槲皮素通過(guò)抑制GR活性并下調(diào)GR和GCL mRNA水平，使GSH含量顯著降低。
　　4.0.005%槲皮素使肝臟GST活性增加，并上調(diào)GST mRNA水平，0.5%槲皮素使肝臟 GST活性增加，但是使 GST mRNA水平下調(diào)，說(shuō)明0.5%槲皮素可能使mRNA翻譯效率增