體外誘導小鼠胚胎干細胞分化為胰島素分泌細胞的實驗研究.pdf

1、在這里,我們以生長因子為工具,試將ES細胞誘導分化為胰島素分泌細胞,同時,在誘導ES細胞分化為胰島素分泌細胞時,我們采用了三種不同的細胞培養(yǎng)方式,即EB方式、形成EB一定時間后將EBs消化成單個細胞(EB-單層)方式和細胞單層方式,以比較這三種方式的ES細胞的誘導效果.此外,我們還探討一個五個階段的、包含七種生長因子的分階段誘導方法能否誘導ES細胞分化為功能良好的胰島素分泌細胞.期望通過上述研究,為今后ES細胞應用到糖尿病臨床治療,最終

2、治愈糖尿病打下基礎(chǔ).第一部分GLP-1、Betacellulin、Activin A、bFGF和Nicotinimide五種生長因子聯(lián)合誘導ES細胞分化為胰島素分泌細胞一.目的聯(lián)合應用GLP-1、betacellulin、activin A、bFGF和nicotinimide五種生長因子誘導ES細胞分化為胰島素分泌細胞.二.方法1.ES細胞的培養(yǎng)2.ES細胞的誘導3.HE染色4.DT染色5.免疫組化6.RT-PCR7.胰島素陽性細胞的計

3、數(shù)8.培養(yǎng)液胰島素水平的檢測9.數(shù)據(jù)處理和分析;四.小結(jié)以胚胎體方式進行誘導,聯(lián)合應用GLP-1、betacellulin、activin A、bFGF和nicotinimide五種生長因子可將E14.1小鼠ES細胞誘導分化為胰島素分泌細胞;以葡萄糖作用細胞時,胰島素分泌細胞可釋放胰島素到培養(yǎng)液中,并且提高葡萄糖濃度時胰島素分泌水平有所提高,但培養(yǎng)液胰島素水平很低,提示所誘導出來的胰島素分泌細胞功能欠佳.第二部分三種不同細胞培養(yǎng)方式對E

4、S細胞誘導分化為胰島素分泌細胞誘導效果的初步比較一.目的以EB-單層和細胞單層兩種不同的細胞培養(yǎng)方式,聯(lián)合應用GLP-1、betacellulin、activin A、bFGF和nicotinimide五種生長因子誘導ES細胞分化為胰島素分泌細胞,結(jié)合第一部分(即EB方式)結(jié)果,初步比較三種方式的ES細胞誘導分化為胰島素分泌細胞的誘導效果.二.方法1.ES細胞的培養(yǎng)2.ES細胞的誘導3.HE染色4.DTZ染色5.免疫組化6.RT-PCR