體外誘導(dǎo)大鼠骨髓干細(xì)胞分化為胰島素分泌細(xì)胞.pdf

1、目的：糖尿病是一種嚴(yán)重危害人們健康的慢性疾病。胰島細(xì)胞移植可能是不依賴(lài)胰島素治愈糖尿病的最佳方法。但由于移植材料匱乏，這種治療方法的推廣受到了限制。目前研究表明多種來(lái)源干細(xì)胞可以通過(guò)體外誘導(dǎo)分化為胰島素分泌細(xì)胞，這為胰島細(xì)胞移植提供了新的來(lái)源。因骨髓干細(xì)胞具有多種分化潛能、取材容易、可以避免免疫排斥反應(yīng)等優(yōu)點(diǎn)，使其成為誘導(dǎo)分化胰島細(xì)胞的最佳候選千細(xì)胞。有研究顯示骨髓干細(xì)胞在體外可以誘導(dǎo)分化為胰島素分泌細(xì)胞。各種誘導(dǎo)方法雖然不盡相同，但總

2、體上都比較繁瑣，而且大多都應(yīng)用細(xì)胞因子。這大大地限制了骨髓干細(xì)胞作為胰島細(xì)胞移植的來(lái)源在臨床上的廣泛應(yīng)用。本實(shí)驗(yàn)嘗試在體外通過(guò)簡(jiǎn)單的非細(xì)胞因子方法誘導(dǎo)大鼠骨髓干細(xì)胞，使其分化為胰島素分泌細(xì)胞，并應(yīng)用一系列方法對(duì)誘導(dǎo)的細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，目的在于探索一種不應(yīng)用任何細(xì)胞因子，簡(jiǎn)單易行的誘導(dǎo)方法，從而為骨髓干細(xì)胞作為胰島細(xì)胞移植的來(lái)源在臨床上實(shí)際應(yīng)用提供進(jìn)一步的理論依據(jù)及新思路。 方法：1、制備鼠尾膠原及鋪鼠尾膠原的玻片及六孔板。2、分離大

3、鼠骨髓細(xì)胞。3、將分離的骨髓細(xì)胞分別設(shè)為DMSO及高糖環(huán)境培養(yǎng)的誘導(dǎo)組和低糖環(huán)境培養(yǎng)的對(duì)照組。4、通過(guò)倒置顯微鏡觀察誘導(dǎo)組和對(duì)照組細(xì)胞形態(tài)的改變。5、通過(guò)雙硫腙染色的方法檢測(cè)誘導(dǎo)組及對(duì)照組細(xì)胞胰島素的合成。6、通過(guò)免疫組化的方法檢測(cè)誘導(dǎo)組及對(duì)照組細(xì)胞在蛋白質(zhì)水平上胰島素的表達(dá)。7、通過(guò)RT-PCR的方法檢測(cè)誘導(dǎo)組及對(duì)照組細(xì)胞在mRNA水平上胰島素的表達(dá)。8、通過(guò)ELISA的方法檢測(cè)誘導(dǎo)組及對(duì)照組細(xì)胞分泌到細(xì)胞外的胰島素含量。 結(jié)

4、果：1、誘導(dǎo)組形成的細(xì)胞團(tuán)在形態(tài)上與胰島十分相似，與對(duì)照組形成的細(xì)胞團(tuán)明顯不同。2、用雙硫腙對(duì)誘導(dǎo)組和對(duì)照組的細(xì)胞團(tuán)進(jìn)行染色，誘導(dǎo)組的細(xì)胞團(tuán)呈現(xiàn)猩紅色，表明細(xì)胞中有鋅離子，提示有胰島素的合成，而對(duì)照組不顯色。3、免疫組化染色結(jié)果顯示誘導(dǎo)組除團(tuán)樣細(xì)胞胞漿中有胰島素外，圓形、橢圓形和部分梭形的分散的單個(gè)細(xì)胞中也含有胰島素。對(duì)照組的細(xì)胞中無(wú)胰島素存在。4、RT-PCR結(jié)果顯示在mRNA水平上誘導(dǎo)組細(xì)胞表達(dá)Ins1和Ins2，而對(duì)照組不表達(dá)。5