豬干擾素α、β、γ在293T細(xì)胞中的表達(dá)研究.pdf

1、干擾素(Interferon，IFN)是一種具有抗病毒，影響細(xì)胞生長(zhǎng)、分化和免疫調(diào)節(jié)等功能的蛋白質(zhì)，在獸醫(yī)臨床上，干擾素在對(duì)疾病的預(yù)防、治療以及疫苗佐劑的應(yīng)用等方面發(fā)揮著重要作用。 目前，IFN已廣泛應(yīng)用于人醫(yī)臨床多種疾病的治療。相對(duì)而言，獸醫(yī)界對(duì)動(dòng)物干擾素的研究起步較晚。由病毒、細(xì)菌等病原微生物侵染動(dòng)物所引起的各種傳染性疾病嚴(yán)重制約了各個(gè)國(guó)家和地區(qū)養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展，同時(shí)也對(duì)人類健康存在著巨大危害。因此，動(dòng)物干擾素的研究對(duì)動(dòng)物傳

2、染性疾病的防治具有重大的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和社會(huì)意義。本研究以豬干擾素α[(PoIFN-α)、豬干擾素β(PoIFN-β)與豬干擾素γ(PoIFN-γ)為研究對(duì)象，構(gòu)建了pcDNA3.1-EGFP-PoIFN-α/β/γ(命名為pcDNA3.1-IFN-α/β/γ)和rAAV-PoIFN-α/β/γ(命名為AAV-PoIFN-α/β/γ)真核表達(dá)載體，并轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞293T，Western-blot檢測(cè)到了29T細(xì)胞中干擾素蛋白。 主

3、要研究?jī)?nèi)容如下： 1.pcDNA3.1-IFN質(zhì)粒構(gòu)建和制備 根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室已擴(kuò)增到的PoIFN-α/β/γ全長(zhǎng)基因設(shè)計(jì)引物，在PoIFN-α/β/γ上下游引入NheI和HindIII酶切位點(diǎn)，以PoIFN-α/β/γ全長(zhǎng)基因?yàn)槟０?，PCR擴(kuò)增得到PoIFN-α/β/γ基因，將該基因亞克隆到pcDNA3.1-IFN載體上，轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α，挑選單菌落，LB培養(yǎng)基培養(yǎng)，菌液PCR鑒定，經(jīng)測(cè)序鑒定獲得正確pcDNA3.1-

4、PoIFNd質(zhì)粒，擴(kuò)大培養(yǎng)，大量提取質(zhì)粒并純化。 2.rAAV-IFN質(zhì)粒構(gòu)建和制備 根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室已擴(kuò)增到的PoIFN-α/β/γ長(zhǎng)基因設(shè)計(jì)引物，使得PoIFN-α/β/γ上下游引入EcoRI和HindIII酶切位點(diǎn)，以PoIFN-α/β/γ全長(zhǎng)基因?yàn)槟０?，PCR擴(kuò)增得到PoIFN-α/β/γ基因，將該基因亞克隆到AAV載體上，轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α，挑選單菌落，LB培養(yǎng)基培養(yǎng)，菌液PCR鑒定，證明獲得正確AAV-PoIF